Artigo eficiencia do Bravecto contra Leishmania

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Universidade Estadual do Ceará - UECE
Faculdade de Veterinária - FAVET
Disciplina: Terapêutica Veterinária
Docente: Amanda Leal de Vasconcelos
Discentes: Ana Beatriz, Ana Thays, Evelyn de Castro, Karisia Fernandes, Letícia Moura e Lohane Leonel
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INTRODUÇÃO
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Introdução
Ampla distribuição geográfica
Alto número de casos
Alta taxa de mortalidade
Leishmaniose Visceral
Leishmania infantum
Saúde Pública
Endêmica em 12 países – 96% Brasil
CÃO: principal reservatório
Alvos estratégicos para o controle da doenças
(Braga, 1986; Baneth et al., 2002; Alvar et al., 2004; Quinnell et al., 2009; Erza et al.,2010; World Health Organization, 2017; Panamerican Health Organization, 2019). 
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- A leishmaniose visceral (LV) é causada pelo protozoário Leishmania infantum e é considerado um problema de saúde pública devido à sua ampla distribuição geográfica, alto número de casos estimados anualmente e alta taxa de mortalidade, principalmente em crianças desnutridas, idosos e pacientes com coinfecção com o HIV;
Nas Américas, a LV é endêmica em 12 países, com aproximadamente 96% dos novos casos relatados no Brasil;
Os cães são considerados alvos estratégicos para o controle de doenças, pois são o principal reservatório doméstico e desempenham um papel importante na manutenção do ciclo da doença devido à alta prevalência da infecção em cães, a presença de formas amastigotas em sua pele e sua proximidade com os humanos.
Introdução
Lutzomyia longipalpis
Principal via de transmissão
Amplamente distribuído no Brasil
Altamente adaptável ao ambiente urbano
Controle: vetor e principal reservatório
Controverso e limitado
Ineficiência dos métodos diagnósticos
Ausência de um tratamento que elimine o parasita
Vacina eficaz para prevenir a infecção em humanos e cães
(Killick-Kendrick, 1999; Courtenay, 2002; França-Silva, 2005; , Michalsky et al., 2009; Quinnell et al., 2009; Romero et al., 2010; Dias et al., 2011; Brazil, 2013).
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A principal via de transmissão é através da picada do flebotmíneo fêmea, sendo o L longipalpis o principal vetor nas Américas. Esta espécie de flebotomíneo está amplamente distribuída na maioria dos estados brasileiros e tem se mostrado altamente adaptável ao ambiente urbano;
As ações de controle atualmente utilizadas para direcionar o vetor e seu principal reservatório são controversas e parecem ter um impacto limitado na incidência de casos de LV humana e canina devido a várias limitações, incluindo ineficiência dos métodos de diagnóstico, ausência de um tratamento que elimine o parasita e / ou a falta de uma vacina eficaz para prevenir a infecção em humanos e cães;
Controle: Uso de inseticidas 
Classe: Isoxazolinas
Antagonista de GABA e de canais de íons (Cl−).
FLURALANER: proteção mais prolongada!
Fluralaner, afoxolaner, saxolaner
Pulgas, carrapatos e ácaros
Hiperexcitabilidade do sistema nervoso central
Seguro em cães
Atividade inseticida contra: Triatoma infestans, Phlebotomus papatasi e P. perniciosus
Introdução
Lutzomyia longipalpis
(Gassel et al., 2014; . Kilp et al., 2014; Letendre, et al., 2014; Rohdich et al., 2014; Shoop et al., 2014; Taenzler et al., 2014; Walther et al., 2014; Fourie et al., Loza et al., 2015; Ozoe et al, 2015; Gomez et al., 2018; Bongiorno et al., 2019).
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Estudos anteriores exploraram o uso de inseticidas sistêmicos como medida de controle. Recentemente, alguns estudos se concentraram em uma nova classe de drogas, as isoxazolinas (fluralaner, afoxolaner, saxolaner), que são licenciadas para uso veterinário para proteger contra pulgas, carrapatos e ácaros. Entre esta classe de drogas, o composto fluralaner fornece a proteção mais prolongada, aproximadamente 12 semanas.
Fluralaner atua como um antagonista do íon cloreto de ácido gama-aminobutírico (GABA) (Cl-) canais, impedindo a entrada de Cl- no neurônio pós-sináptico, que por sua vez leva à hiperexcitabilidade do sistema nervoso central do inseto. O Fluralaner demonstrou ser seguro em cães e tem uma seletividade significativa para insetos sobre receptores de mamíferos. Estudos experimentais com fluralaner mostraram atividade inseticida em curtos períodos de tempo contra Triatoma infestans, o vetor de Trypanosoma cruzi (o agente etiológico da doença de Chagas e contra algumas espécies de flebotomíneos, como Phlebotomus papatasi eP. Perniciosus.
No entanto, até o momento, não houve nenhum estudo demonstrando a ação do fluralaner sobreLu. Longipalpis, o principal vetor de VL no Novo Mundo.
Avaliar a atividade inseticida sistêmica de uma única dose oral de Fluralaner (Bravecto®) contra L. longipalpis após repasto sanguíneo em cães, com base em ensaios mensais durante 1 ano de atividade do L. longipalpis.
Objetivo
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MATERIAIS E MÉTODOS
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Materiais e Métodos
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Recrutamento de manutenção dos cães 
8 Cães
Centro de Controle de Zoonoses
(ZCC) - Natal
 4
SRD
Banhados com shampoo neutro 2 semanas antes de cada ensaio
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Os cães foram obtidos no Centro de Controle de Zoonoses
(ZCC) na cidade de Natal, Rio Grande do Norte (Brasil). Com permissão do ZCC, utilizou-se oito cães vira-latas saudáveis, sendo 4 femeas e 4 machos . Os animais foram banhados com shampoo neutro 2 semanas antes de cada ensaio.
Materiais e Métodos
Manutenção de colônias de flebotomíneos 
Laboratório de Insetos e Vetores da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (Brasil)
 Ovos de Lu. longipalpis
75-80% de umidade relativa
26-27 ℃
 Larvas de Lu. longipalpis
Alimentação: Comida de camundongo triturada, fezes de coelho secas e solo
(Volf P., Volfova V., 2011)
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Uma colônia de flebotomíneos foi estabelecida no Laboratório de Insetos e Vetores da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (Brasil), a partir de ovos de Lu. Longipalpis(doado pelo Laboratório de Fisiologia de Insetos Hematófagos da Universidade Federal de Minas Gerais, Brasil). A colônia foi mantida em condições padrão (75-80% de umidade relativa, 26-27℃. Uma mistura fermentada homogênea consistindo de comida de camundongo triturada, fezes de coelho secas e solo foi usada para alimentação de larvas
Materiais e Métodos
Design do Estudo 
2 Grupos
Grupo tratado com fluralaner (n= 4)
Grupos controle (n= 4)
Ensaios de alimentação de Lu. longipalpis fêmea realizadas mensalmente 
Avaliar a mortalidade
Dose única oral de furalaner 1 h após a alimentação dos insetos
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Os cães foram randomizados em dois grupos: um fluralaner tratado (n= 4) grupo e um grupo de controle não tratado (n= 4), com cada grupo compreendendo dois cães machos e duas fêmeas. O grupo tratado com fluralaner recebeu uma única dose oral de fluralaner 1h após a alimentação dos insetos. 
Os ensaios de alimentação de Lu longipalpis femea foram realizados mensalemente, ou seja, nos dias 1, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360 para avaliar a mortalidade.
Materiais e Métodos
Design do Estudo 
Os cães foram gentilmente contidos. Seguida pela colocação de um pote de plástico cilíndrico equipado com uma tampa apertada que foi perfurada e coberta com uma rede sobre a região ventral de cada cão por 40 minutos. 
Cada pote:
Lu. longipalpis- 20 fêmeas e 5-10 machos
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E cada pote contendo 20 espécimes fêmeas / 5-10 machos deLu. Longipalpis
Materiais e Métodos
Design do Estudo 
B. Após os ensaios: os insetos foram mantidos em um insetário sob condições padrão, e alimentados com algodão embebido em solução saturada de glicose
C. Espécimes femininos foram monitorados em 24, 48, 72, 96 e 120 h pós-refeição de sangue
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C- Todas as amostras femininas foram monitoradas 24, 48, 72, 96 e 120 h após a refeição de sangue para registrar o número de fêmeas mortas, determinado pela falta de movimento (Fig.1c).
Materiais e Métodos
Análise Estatística 
Eficácia do fluralaner para matar flebotomíneos
Diferenças entre os grupos em cada dia de teste experimental
Análise de sobrevivência em cada dia de ensaio
Fórmula de Abbott
Teste de Fisher
Método Kaplan Meier
Diferenças entreos grupos foram consideradas significativas quando
 P ≤ 0,05
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A eficácia do fluralaner para matar flebotomíneos foi avaliada usando a fórmula de Abbott;
As diferenças entre os grupos foram determinadas usando o teste exato de Fisher em cada dia de teste experimental
As análises de sobrevivência foram conduzidas usando o método Kaplan Meier em cada dia de ensaio até 120 horas após a alimentação
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RESULTADOS
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Resultados
Ensaios
Nov. 2018 a nov. 2019
20 e 40 Kg
4 a 10 anos 
Sem diferenças significativas de peso e idade entre os dois grupos
Nenhum efeito colateral foi observado nos cães tratados com fluralaner durante o estudo
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Os ensaios foram realizados entre novembro de 2018 e novembro de 2019. Os cães recrutados pesavam entre 20 e 40 kg e com idade entre 4 e 10 anos. Não houve diferenças significativas no peso ou idade dos cães entre o controle não tratado e os cães tratados com fluralaner. Não foram observados efeitos colaterais entre os cães tratados com fluralaner durante o estudo.
Resultados
Todas as fêmeas de L. longipalpis utilizadas no estudo estavam ingurgitadas
100% de mortalidade das fêmeas até 150 dias após o tratamento
Após 5 meses, os níveis de mortalidade começaram a diminuir
Dia 180 - 72,5%
Dia 210 - 62,5%
Dia 360 - 15%
Figura 2 Lutzomyia longipalpis mortalidade (%) após refeição de sangue em cães tratados com fluralaner e cães de controle não tratados. Após os cães tratados com fluralaner terem recebido uma única dose oral de fluralaner (Bravecto®), Lu. Longipalpis mortalidade (n= 20) foi avaliada nos dias 1, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 pós-tratamento. Os dados são representativos de testes bicaudais e o teste exato de Fisher foi usado. Asterisco (*) indica uma diferença significativa entre os grupos em P < 0,05
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Todas as femeas de L longipalpis utilizadas no estudo estavam ingurgitadas. Conforme a figura 2, que representa a avaliação percentual da mortalidade de L. longipalpis após o repasto de sangue em cães tratados com uma dose oral de fluralaner e em cães controle, nos dias 1, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 dias pós-tratamento, na qual pode-se observar 100 % de mortalidade das fêmeas até o dia 150. Após o 5º mês, os níveis de mortalidade decaíram com o aumento do tempo de tratamento, para 72, 5% no dia 180, 62,5% no dia 210 e 15% no dia 360;
- Observamos ainda que a mortalidade dos flebotomíneos após a refeição de sangue em cães tratados foi maior do que no controle cães até o dia 300 pós-tratamento (Fig.2) No entanto, a mortalidade foi semelhante entre os grupos nos dias 330 e 360 pós-tratamento
Resultados
No 1º dia após o tratamento, todos os flebótomos morreram em 24 horas
30 dias - 48 horas
60 dias - 72 horas
90 dias - 96 horas
150 dias - 120 horas
Fig. 3 Lutzomyia longipalpis mortalidade até 120 h após a refeição de sangue em cães tratados com fluralaner (Bravecto®) Proporção de Lu. Longipalpis (n= 20) espécimes que morreram dentro de 24, 48, 72, 96 e 120 h após a refeição de sangue em cães sem raça definida tratados (n= 4) e não tratado (n 4 / controle) com fluralaner nos dias pós-tratamento 1, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360.
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Em relação à mortalidade por hora nos dias pós tratamento, temos a figura 3, que representa a mortalidade de L longipalpis em 24, 48, 72, 96, 120h pós repasto em cães tratados com fluralaner e do grupo controle nos dias 1, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360, na qual observamos Após o dia 1 de pós-tratamento, o tempo para atingir 100% de mortalidade aumentou gradualmente, para 48 h no dia 30 pós-tratamento, 72 h no dia 60 pós- tratamento, 96 h no dia 90 pós-tratamento, 120 h no dia pós-tratamento dia de tratamento 120 e 120 h no dia 150 pós-tratamento. Fluralaner forneceu mortalidade sustentada (100%) por até 5 meses de acordo com as 120 h pós-teste. 
Resultados
Em suma, os resultados demonstram que o tratamento de cães com fluralaner é efetivo contra L. longipalpis até 270 dias após o tratamento
tabela 1 Acompanhamento de Lutzomyia longipalpis mortalidade e eficácia inseticida após refeição de sangue em cães por até 12 meses (360 dias) após o tratamento com uma dose oral única de fluralaner (Bravecto®)
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Quanto à eficácia inseticidade do fluralaner, temos a tabela 1, que representa a mortalidade e eficácia e=inseticida após o repasto em cães por até 12 meses após o tratamento, na qual observamos a maior eficácia, de 100%, entre os dias 1 e 150, com diminuição para 68,1% no dia 180, 56,5% no dia 210, 55,7% no dia 240, 41,2% no 270, e sem diferenças significativas nos demais dias.
04
DISCUSSÃO
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6 meses
Diminuindo para 68,1%
 
5 meses
Eficácia de 100% em flebotomíneos fêmeas 
 
Cães tratados
Cães tratados
Esses resultados sugerem que o Fluralaner pode ser uma ferramenta promissora para o controle de LV em cães em áreas endêmicas, possivelmente administrando o agente a cada 5 meses.
Fluralaner (Bravecto®)
Discussão
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Baseado nestes resultados, Nos cães tratados, o tratamento com fluralaner teve uma eficácia de 100% em flebotomíneos fêmeas durante os primeiros 5 meses após o tratamento, diminuindo para 68,1% em 6 meses. Esses resultados sugerem que o fluralaner pode ser uma ferramenta promissora para o controle da LV em cães em áreas endêmicas, possivelmente pela administração do agente a cada 5 meses. 
Gomez et al., 2018
Observou a mortalidade de 100, 96, 89 e 42% em P. papatasi (24 horas após a refeição de sangue diretamente em cães) nos dias pós-tratamento 3, 31, 45 e 73, respectivamente
Nesse estudo
 Lu. longipalpis, com mortalidade de 100, 91,2, 48,7 e 37,5% nos dias pós-tratamento 1, 30, 60 e 90, respectivamente.
Susceptibilidade em outras espécies
Discussão
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Uma pesquisa realizada por Gomez e colegas de trabalho observou mortalidade de 100, 96, 89 e 42% em P. papatasi (24 h após a refeição de sangue diretamente em cães) nos dias pós-tratamento 3, 31, 45 e 73, respectivamente.
Observamos resultados semelhantes em nosso estudo durante o mesmo período de tempo (24 horas após a refeição de sangue) para Lu. Longipalpis, com mortalidade observada de 100, 91,2, 48,7 e 37,5 nos dias pós-tratamento 1, 30, 60 e 90, respectivamente.
Nos dias 1, 28 e 84 pós-tratamento: 
Mortalidade foi de 100, 100 e 52,7% respectivamente
Susceptibilidade em outras espécies
 96 h após repasto dos flebotomíneos: 
100% de mortalidade nos dias 1, 30 e 90 após o tratamento 
Lu. longipalpis
 P. perniciosus
Discussão
Bongiorno et al., 2019
Nesse estudo:
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A susceptibilidade ao fluralaner foi determinada em outras espécies de flebotomíneos, como P. perniciosus. 
um estudo realizado por Bongiorno e colaboradores comP. Perniciosus mostraram que 96 h após a refeição de sangue, havia 100, 100 e 68,6% de mortalidade nos dias 1, 28 e 84 pós-tratamento com fluralaner, respectivamente.
Em nosso estudo, 96 h após uma refeição de sangue, 100% de mortalidade foi registrada emLu. Longipalpisnos dias 1, 30 e 90 após o tratamento com fluralaner, indicando que Lu. Longipalpisé mais suscetível ao efeito inseticida do fluralaner do que P. perniciosus
Discussão
Williams et al., 2015 
Carrapatos coletados de cães tratados pesava significativamente menos do que os carrapatos coletados do cães de controle 
Nesse estudo
Todos os espécimes apresentaram alta níveis de mortalidade.
Independentemente da quantidade de sangue ingerida pelos Lu. longipalpis fêmeas.
Absorção mínima de sangue consequentemente, altos níveis de mortalidade
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Um estudo desenvolvido por William e colegas de trabalho mostrou que carrapatos coletados de cães tratados com fluralaner pesavam significativamente menos do que carrapatos coletados de cães controle, levando a uma absorção mínima de sangue, o que resulta em uma exposição suficiente de carrapatos ao fluralaner e, consequentemente, níveis elevados de mortalidade.
 No presente estudo, observamos que todos os espécimes apresentaram altosníveis de mortalidade após alimentação em
cães tratados com fluralaner, independentemente da quantidade
de sangue ingerida pelosLu. Longipalpismulheres.
		Objetivando
maior cobertura em áreas de risco	Fáceis de aplicar
			Apresentar eficácia imediata e prolongada
			Requerer um baixo número de reaplicações
			
Níveis de mortalidade, a
atividade residual mais longa relatada contra Phlebotomus papatasi e P. perniciosus 
Níveis de eficácia por até 9 meses. 
Discussão
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Ao avaliar inseticidas sistêmicos a serem aplicados em cães como medida de controle de doenças transmitidas por vetores, alguns pontos devem ser considerados. Para obter maior cobertura em áreas de risco, os inseticidas devem ser de fácil aplicação, eficácia imediata e prolongada e baixo número de reaplicações. Quando existe um bom perfil de segurança, os efeitos colaterais para o cão são evitados, aumentando a adesão do dono.
 Neste contexto, o fluralaner parece ser um composto promissor para o controle do mosquito-pólvora, especialmente Lu. Longipalpis populações. Os resultados do nosso estudo mostram altos níveis de mortalidade, a atividade residual mais longa relatada contra flebotomíneos e altos níveis de eficácia por até 9 meses.
 O tratamento com fluralaner em cães tem uma eficácia inseticida contra Lu. Longipalpis e representa uma possível estratégia de intervenção em saúde pública para o combate e redução de vetores infectados em áreas endêmicas de LV, reduzindo os casos caninos e humanos da doença.
05
Conclusão
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Obrigada!
Dúvidas?
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