DILUIÇÃO SERIADA

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INSTITUTO FEDERAL DO AMAZONAS – IFAM
CAMPUS MANAUS CENTRO – CMC
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA, AMBIENTE E ALIMENTOS – DQA
DISCIPLINA DE TÉCNICAS E ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS
Prof. Dr. ANDERSON PAULO 
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA LABORATORIAL
DILUIÇÃO SERIADA
MANAUS/AM
29 DE AGOSTO DE 2022
HAYANNA SABRYNA SILVA DOS SANTOS
JOSÉ ABRAÃO SIMPLÍCIO DIAS
JULIANA ALMEIDA E SILVA
RAFAEL COSTA FONSECA DE LIMA
YGOR ALVES DANIEL (ORGANIZADOR)
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA LABORATORIAL
DILUIÇÃO SERIADA
Relatório apresentado ao Curso Técnico de nível Médio Integrado em Química do Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia Campus Manaus Centro, como parte dos requisitos necessários para nota parcial na disciplina de Técnicas e Análises Microbiológicas, da turma IQUI 12.
Orientador: Prof. Dr. Anderson Paulo.
MANAUS/AM
29 DE AGOSTO DE 2022
SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO	4
2. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA	5
3. OBJETIVO	5
3. MATERIAIS E MÉTODOS	5
3.1 MATERIAIS	5
3.2 METODOLOGIA	6
4. RESULTADO	7
5. CONCLUSÃO	9
6. REFERÊNCIAS	10
7. APÊNDICE	10
	
1. INTRODUÇÃO
O relatório a seguir tem por finalidade apresentar os experimentos iniciado no dia 15 e finalizado no dia 22 de agosto no laboratório de microbiologia onde houve a aula prática na qual o grupo E fez a diluição do material (microrganismos presente no solo da horta) fornecido pelo professor. E na semana seguinte podemos ver o resultado do procedimento onde não houve nenhuma complicação em relação o experimento.
2. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
A técnica de diluição seriada é primordialmente uma série de diluições simples, cujo o objetivo é aumentar o fator de diluição, sendo que a amostra para a diluição de cada etapa vem da diluição anterior. O objetivo principal desse tipo de diluição é ir diminuindo a quantidade de soluto a cada etapa.
As diluições seriadas são muito utilizadas nas análises clínicas e em pesquisas científicas. Em alguns exames com resultados positivos, como por exemplo VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), a diluição seriada é utilizada para identificar em qual diluição da série houve o último sinal de reatividade.
3. OBJETIVO
A aula realizada tinha por objetivo, analisar o crescimento bacteriano de acordo com cada placa após a aplicação da técnica do processo de diluição seriada, de forma que pudéssemos perceber com eficácia a diferença entre cada placa de acordo com o nível de material de diluição (Proveniente do material de diluição anterior) que foi repassada a cada uma das placas seguindo o processo. A ideia principal, é que os alunos possam se familiarizar com esta técnica e aprender cada vez mais a respeito do crescimento bacteriano como um material de estudo e análise por meio deste processo que costuma ocorrer com frequência durante as práticas de um laboratório de microbiologia.
3. MATERIAIS E MÉTODOS 
3.1 MATERIAIS
· Erlenmeyer;
· Pepita automática;
· Tubo de ensaio;
· Béquer;
· Proveta;
· Balança analítica;
· Solo de horta;
· Placas.
3.2 METODOLOGIA
ETAPA 1
· Passo 1: Utilizando a proveta, foi coletado 10 ml de água destilada;
· Passo 2: Transferiu-se a água destilada contida na proveta para o Erlenmeyer;
· Passo 3: Descartou-se a água destilada contida no Erlenmeyer, e em seguida foi transferido 100ml de solução salina (0,9%) proporcionada pelo orientador.
· Passo 4: Com o auxílio da pipeta automática, foi transferido 9 ml da solução para cada um dos seis tubos de ensaio, tendo cada uma sua devida marcação (10-1 a 10-6).
ETAPA 2
· Passo 1: Com o béquer, foi realizado a pesagem do solo de horta em uma balança analítica a fim de obter a quantidade de 10g (sendo obtido 10,9g pelo grupo E);
· Passo 2: Foi transferida a quantidade obtida de solo para o Erlenmeyer contendo solução salina (misturamos por cerca de 5 minutos), formando o inóculo;
· Passo 3: Foi retirado 1 ml de inóculo com o auxílio da pipeta automática e em seguida, transferiu-se para o primeiro tubo 10-1 e logo homogeneizamos em Vórtex por aproximadamente 30 segundos;
· Passo 4: Retirou-se 1 ml do conteúdo presente no primeiro tubo de ensaio, e logo foi transferido para o segundo tubo 10-2, e assim como antes, homogeneizamos por 30 segundos. Dessa forma, foi repetido esse mesmo processo até transferir o conteúdo para o último tubo de ensaio, completando o processo de diluição seriada.
ETAPA 3
· Passo 1: Os tubos de ensaio, juntamente com seis placas de Petri (com marcações de 10-1 até 10-6), foram levadas até a Capela de Fluxo Laminar;
· Passo 2: Dentro da Capela, transferiu-se 1ml do inóculo presente no primeiro tubo 10-1 para a primeira placa de Petri 10-1, para assim, realizar o processo de esgotamento por estrias. 
Obs.: Transferiu-se 1 ml do inóculo dos restantes dos tubos para as placas de Petri, de acordo com sua devida marcação, para logo em seguida executar o processo de esgotamento por estrias.
· Passo 3: Levou-se as placas para a estufa de crescimento bacteriano a uma temperatura entre 28° e 30°C.
4. RESULTADO
Assim, após a realização da prática laboratorial, as placas contendo o material biológico foram alojadas em estufa, afim de que ocorra o crescimento bacteriano. Dessa maneira, as placas permaneceram na estufa por uma semana, e ao retirá-las, pudemos observar uma série de características em cada uma delas.
· 10-1: Na primeira placa, observou-se nitidamente a presença de uma grande concentração de colônias bacterianas, demonstrando uma pigmentação um tanto esbranquiçada. Estas colônias se encontram extremamente próximas umas das outras, apresentando em sua maioria uma forma morfológica circular. Além disso, deve-se destacar a presença de duas colônias; onde uma apresentou uma pigmentação mais escura que as demais, e a outra evidenciando uma coloração bem mais esbranquiçada.
· 10-2: Na segunda placa, foi possível perceber de imediato as diferenças entre as duas primeiras placas. Verificou-se colônias mais espalhadas sobre a superfície do meio de cultura, sendo visível algumas colônias maiores que outras e até mesmo uma certa mudança em sua morfologia, demonstrando um pouco mais de deformação.
· 10-3: A partir desta placa, pôde-se observar uma mudança em relação a concentração de colônias, havendo uma clara diminuição quanto a este quantitativo. Além de ter sido perceptível uma maior deformação quanto a morfologia das colônias, algumas inclusive se apresentando em forma de uma “linha reta” ou até de “riscos”.
· 10-4: Ao analisar a quarta placa, logo percebeu-se a presença de várias colônias entrelaçadas entre si, demonstrando uma forma semelhante a um “continente”, onde este aglomerado de colônias acabou por ocupar quase ¾ da superfície do meio de cultura. 
· 10-5: Analisando a quinta placa, foi observado a presença de apenas duas colônias na região central da placa e uma outra, um pouco maior, situada na borda.
· 10-6: Com a observação da última placa, foi constatado a presença de apenas uma única colônia bacteriana, situada na borda da placa.
Dessa forma, foi possível observar de maneira geral como ocorre o processo de diluição seriada, bem como perceber as constantes mudanças a cada nível de diluição, havendo a constante diminuição do número de colônias, o que facilita a contabilização da quantidade de colônias bacterianas, e assim, contribuindo para os mais diversos procedimentos laboratoriais que poderão vir a ser desenvolvidos.
5. CONCLUSÃO
Em virtude do que foi mencionado podemos concluir que a prática realizada é de extrema importância e contribuem para o desenvolvimento dos alunos e suas respectivas equipes como um todo. A técnica de diluição seriada se apresenta de certo modo, importantíssima para/com quando falamos sobre análise de crescimento bacteriano e formação de colônias, pois está técnica é eficaz para se realizar a contagem do número de microrganismos de acordo com seu nível de concentração de soluto em placas, de forma que as colônias cresçam separadamente e possibilitem a contagem e análise das mesmas. Esta técnica é frequentemente utilizada no laboratório, entãoa familiarização dos alunos com a mesma é de suma importância para o avanço dos estudos não somente no curso de microbiologia, mas também para fins de estudo em toda a área da microbiologia.
	
6. REFERÊNCIAS
· https://www.biomedicinapadrao.com.br/2016/04/como-fazer-diluicoes-seriadas.html
7. APÊNDICE
Figura 2: Tubos de ensaio contendo solução de água e cloreto de sódio (0,9%).
Figura 1: Erlenmeyer contendo água destilada.
	
Figura 3: Solo de horta (material utilizado).
Figura 4: Realização da pesagem do solo com a utilização da balança analítica.
Figura 6: Placas de Petri com meio de cultura (esterilizado).
Figura 5: Peso obtido após a pesagem do solo (10,95g).
Figura 8: Placa 10-1 com formação de colônias (visão de baixo).
Figura 7: Placa 10-1 com formação de colônias (visão de cima).
	
Figura 10: Placa 10-2 com formação de colônias (visão de baixo).
Figura 9: Placa 10-2 com formação de colônias (visão de cima).
Figura 11: Placa 10-3 com formação de colônias (visão de cima).
Figura 12: Placa 10-3 com formação de colônias (visão de baixo).
	
Figura 13: Placa 10-4 com formação de colônias (visão de cima).
Figura 14: Placa 10-4 com formação de colônias (visão de baixo).
Figura 16: Placa 10-5 com formação de colônias (visão de baixo).
Figura 15: Placa 10-5 com formação de colônias (visão de cima).
	
Figura 17: Placa 10-6 com formação de colônia.
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