questionario I bioengenharia e biotecnologia aplicada a biomedicina

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Usuário juliana.silva686 @aluno.unip.br
Curso BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA
Teste QUESTIONÁRIO UNIDADE I
Iniciado 13/04/23 22:36
Enviado 13/04/23 23:41
Status Completada
Resultado da
tentativa
5 em 5 pontos
Tempo
decorrido
1 hora, 4 minutos
Resultados
exibidos
Todas as respostas, Respostas enviadas, Respostas corretas, Comentários,
Perguntas respondidas incorretamente
 Pergunta 1
 0,5 em 0,5 pontos
Você deseja clonar um segmento de DNA recém-purificado
de uma PCR, em um vetor específico – ambos
representados na imagem a seguir. As sequências das
extremidades do segmento purificado da PCR estão
representadas pelas letras que constituem as bases dos
nucleotídeos do DNA. Assim, é possível analisar qual
enzima de restrição é a mais adequada para dar
continuidade com o processo de clonagem. Admita que
em seu laboratório você possui disponível apenas as
enzimas de restrição listadas: BamHI, EcoRI, EcoRV,
SmaI e XmaI.
A partir das informações e do seu conhecimento sobre o
assunto, determine qual alternativa apresenta a enzima
de restrição adequada para você dar segmento com
seu experimento de clonagem, considerando que você
deseja controlar a posição de inserção do fragmento,
respeitando o sentido de leitura do gene e que você irá
utilizar a mesma enzima de restrição para digerir o
inserto e o vetor. Nas alternativas estão apontados os
sítios de reconhecimento de cada enzima de restrição.
Resposta
Seleciona
da:
d.
X
m
a
I
.
Respostas: a.
B
a
m
H
I
.
b.
E
c
o
R
I
.
c.
S
m
a
I
.
d.
X
m
a
I
.
e.
E
c
o
R
V
.
Co
m
e
n
t
á
r
i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: D
Comentário: a enzima de restrição
XmaI reconhece a mesma
sequência da enzima SmaI
(presente no vetor), porém cliva
em sítio diferente. A clivagem
mediada por XmaI deixa
extremidades coesivas e garante
a posição de inserção do
segmento de interesse, garantido
que o sentido de leitura do gene
será respeitado. A utilização das
enzimas SmaI ou EcoRV, as
únicas cujos sítios de
reconhecimento são encontrados
tanto no inserto quanto no vetor,
não seriam adequadas, pois
deixam extremidades cegas e não
garantem o sentido de inserção
do segmento de interesse. As
enzimas EcoRI e BanHI não
apresentam sítio de
reconhecimento na sequência de
interesse, apenas no vetor, desta
forma, ambas não poderiam ser
usadas para deixar extremidades
coesivas no inserto.
 Pergunta 2
 0,5 em 0,5 pontos
Qual das seguintes estratégias seria a mais adequada para
purificação de uma mistura contendo proteínas de tamanhos
distintos?
Resposta
Selecion
ada:
c.
Cromatografia em gel filtração.
Respostas: a.
Cromatografia de afinidade.
b.
Cromatografia de troca catiônica.
c.
Cromatografia em gel filtração.
d.
Cromatografia de troca aniônica.
e.
Cromatografia por interação
hidrofóbica.
Co
m
e
n
t
á
r
i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: C
Comentário: considerando que as
proteínas da mistura apresentam
tamanhos diferentes, a cromatografia
em gel filtração é a alternativa mais
adequada. Nela, a fase estacionária
é constituída por resina contendo
esferas com orifícios. As proteínas de
menor tamanho (menor massa)
penetram dentro dos orifícios das
esferas que funcionam como
obstáculos. Desta forma, o fluxo
dessas proteínas menores pela
coluna cromatográfica é mais lento,
quando comparado com o fluxo de
proteínas maiores, que por sua vez
não são atrasadas pelos obstáculos
(são grandes demais para passar
pelos orifícios das esferas). Assim, é
possível coletar em diferentes
momentos da purificação as
proteínas de tamanhos distintos.
 Pergunta 3
 0,5 em 0,5 pontos
Um pesquisador deseja clonar a sequência codificante de
um gene de 540 pb a jusante (downstream) do promotor
(200 pb) de um vetor, para subsequente expressão e
purificação da proteína de interesse. Assim, o gene foi
isolado como fragmento da ação da enzima de restrição
SmaI (o sítio de reconhecimento dessa enzima é
CCC↓GGG / a seta indica sítio de clivagem) e clonado
no sítio SmaI do vetor localizado imediatamente a
jusante do promotor. A sequência do gene contém um
único sítio para enzima de restrição EcoRI localizada 70
pb a jusante do códon iniciador. A representação
esquemática do plasmídeo a seguir indica a localização
dos sítios de reconhecimento de algumas enzimas de
restrição no vetor e a posição de inserção do gene de
interesse.
O pesquisador avaliou as colônias obtidas no processo
de clonagem por meio da digestão do material com as
duas enzimas de restrição HindIII e EcoRI. Qual dos
seguintes padrões de digestão com essas duas
enzimas de restrição representa o clone com perfil
desejado pelo pesquisador para os experimentos de
superexpressão?
Resposta
Selecio
nada:
a. ~270 pb + ~470 pb + o
restante da estrutura vetor.
Respostas: a. ~270 pb + ~470 pb + o
restante da estrutura vetor.
b. ~740 pb + ~70 pb + o restante
da estrutura vetor.
c. ~200 pb + o restante da
estrutura vetor.
d. ~810 pb + o restante da
estrutura vetor.
e. ~200 pb + 540 pb + o restante
da estrutura vetor.
Co
m
e
n
t
á
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i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: A
Comentário: ao clivar o vetor
contendo o inserto com as duas
enzimas de restrição, teremos:
(1) um fragmento
correspondendo ao promotor
(200 pb) mais 70 pb do gene,
produzido pela clivagem com a
HindIII a montante (upstream) do
promotor e pela clivagem com a
EcoRI presente dentro do gene
(70 pb a início do códon iniciador)
e (2) outro fragmento de 470 pb
correspondente à clivagem nos
sítios EcoRI dentro do gene (a 70
pb do início da transcrição) e
EcoRI a jusante final do gene.
 Pergunta 4
 0,5 em 0,5 pontos
Leia e analise as proposições.
I- CRISPR é um acrônimo da língua inglesa das palavras
repetições palindrômicas curtas agrupadas e
regularmente interespaçadas (clustered regularly
interspaced short palindromic repeat).
II- O operon CRISPR contém fragmentos de DNA viral
provenientes de infecções prévias sofridas por
organismos procariontes. Os cientistas descobriram que
ele faz parte de um mecanismo de defesa de bactérias,
sendo posteriormente adaptado como uma ferramenta
de edição gênica.
III- Sequências PAM, sgRNA (single guide), Cas são
componentes importantes no processo de edição
gênica mediada pelo operon CRISPR.
IV- A edição gênica promovida pelo sistema
CRISPR/Cas pode ser realizada apenas em éxons.
V- A edição gênica realizada pelo sistema CRISPR/Cas
permite exclusivamente a remoção de fragmentos do
genoma (construção de knock-outs), além de ser uma
técnica que pode ser aplicada apenas em organismos
mais simples, como os procariontes.
Assinale a alternativa correta.
Resposta
Selecio
nada:
b. Estão corretas apenas as
afirmativas I, II e III.
Respostas: a. Estão corretas apenas as
afirmativas I e II.
b. Estão corretas apenas as
afirmativas I, II e III.
c. Estão corretas apenas as
afirmativas II, III e IV.
d. Estão corretas apenas as
afirmativas I, III e V.
e. Estão corretas apenas as
afirmativas II, III e V.
Co
m
e
n
t
á
r
i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: B
Comentário: a edição gênica
promovida pelo sistema
CRISPR/Cas pode ser realizada
em qualquer lugar do genoma,
desde que o sgRNA se ligue a
montante de uma sequência PAM.
A alternativa V está errada, pois a
edição mediada pelo sistema
CRISPR/Cas pode ser utilizada
em diversas aplicações e não
apenas na construção de
knock-outs, tais como
ativação/repressão gênica,
substituição alélica, clivagem de
DNA/RNA, deleção de genes,
knock-in/out, inserção de
transgenes, geração de variação
genética, além de outras
abordagens possíveis como DNA
labeling, mapeamento gênico,
RNA tracking. Essa técnica
também pode ser utilizada em
células eucariontes e organismos
complexos.
 Pergunta 5
 0,5 em 0,5 pontos
Um dos reagentes utilizados na preparação de células
competentes é:
Resposta
Seleciona
da:
e.
CaCl2.
Respostas: a.
HCl.
b.
NaCl.
c.
Glicina.
d.
Formami
da.
e.
CaCl2.
Com
e
n
t
á
r
i
Alternativa: E
Comentário: o CaCl2 é utilizado na
preparação de células
competentes, uma vez que,
juntamente com o choque térmico,
permitea abertura de poros na
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
membrana plasmática facilitando a
entrada do DNA exógeno na célula.
 Pergunta 6
 0,5 em 0,5 pontos
Eletroporação é:
Respo
st
a
Se
le
ci
on
ad
a:
d. Aplicação de pulsos de alta
voltagem, geralmente utilizados
para criação de poros na
membrana plasmática das
células.
Respo
st
as
:
a. O processo de separação de
moléculas carregadas, por meio de
um gel mantido em um campo
elétrico.
b. O processo que permite a ligação do
DNA exógeno a um vetor
eletricamente carregado.
c. O processo que estimula a
multiplicação celular.
d. Aplicação de pulsos de alta
voltagem, geralmente utilizados
para criação de poros na membrana
plasmática das células.
e. Aplicação de pulsos de baixa
voltagem, usados para fechar os
poros da membrana plasmática das
células após protocolo de choque
térmico.
Com
e
n
t
á
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i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: D
Comentário: a captação de DNA
livre pode ocorrer submetendo
bactérias a um campo elétrico
de alta tensão. Esse
procedimento é conhecido como
eletroporação. Os protocolos de
eletroporação variam entre as
diferentes espécies bacterianas.
 Pergunta 7
 0,5 em 0,5 pontos
Vetores são:
Respos
ta
Sel
eci
on
ad
a:
c. Moléculas que são capazes de
se ligar covalentemente a um
segmento de DNA e carregá-lo
para o interior das células.
Respos
tas
:
a. Moléculas que degradam ácidos
nucleicos.
b. Moléculas que auxiliam na
replicação.
c. Moléculas que são capazes de se
ligar covalentemente a um
segmento de DNA e carregá-lo
para o interior das células.
d. Moléculas que protegem a célula
hospedeira contra a invasão de
DNA exógeno.
e. Moléculas que impedem a replicação
do DNA endógeno da célula.
Com
e
n
t
á
ri
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: C
Comentário: os vetores são
capazes de carregar moléculas
de DNA exógeno para o interior
das células e são
frequentemente utilizados no
processo de clonagem
molecular.
 Pergunta 8
 0,5 em 0,5 pontos
Os cosmídeos não apresentam:
Resposta
Selecio
nada:
a. Genes que codificam
proteínas virais.
Respostas: a. Genes que codificam
proteínas virais.
b. Origem de replicação.
c. Genes de resistência a
antibióticos.
d. Sítios de reconhecimento para
enzimas de restrição.
e. Sequência cos.
Co
m
e
n
t
á
r
i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Alternativa: A
Comentário: os genes virais são
removidos para “abrir” espaço na
construção, permitindo a
inserção de fragmentos de DNA
de até 45 kb. Os plasmídeos e
os bacteriófagos permitem a
inserção de fragmentos de DNA
de apenas 10 e 20 kb,
respectivamente.
 Pergunta 9
 0,5 em 0,5 pontos
Qual é o papel das enzimas de restrição nas bactérias?
Resposta
Selec
ionad
a:
b. Degradar o DNA de fagos
invasores.
Resposta
s:
a. Degradar o cromossomo
bacteriano durante a replicação.
b. Degradar o DNA de fagos
invasores.
c. Produzir iniciadores de RNA para a
replicação.
d. Degradar o DNA de outras
bactérias durante o processo de
conjugação.
e. Inserir o DNA de fagos invasores
no DNA cromossômico.
Co
m
e
n
t
á
r
i
o
d
a
r
e
Alternativa: B
Comentário: as enzimas de restrição
sintetizadas pelas bactérias
reconhecem sequências
específicas do genoma dos
fagos e promovem a clivagem da
ligação fosfodiéster do DNA viral
nesses pontos. Assim, esse
mecanismo de defesa de
bactérias as protege contra
infecções pelos fagos.
s
p
o
s
t
a
:
 Pergunta 10
 0,5 em 0,5 pontos
“Em 1998, a equipe do biólogo James Thomson, da
Universidade de Wisconsin, Estados Unidos, isolou e
desenvolveu pela primeira vez em laboratório uma
linhagem de células-tronco extraídas de embriões
humanos. Foi um feito técnico e um problema ético para
a pesquisa biológica. Feito, porque os estudos com
essas células podem, em teoria, levar a melhores
tratamentos ou à cura de uma lista quase interminável
de doenças. Se devidamente cultivadas, as
células-tronco embrionárias, e apenas elas, podem dar
origem a todos os tecidos de um organismo, cerca de
220 tipos distintos de células que seriam a matéria-
prima de novas terapias. Problema, porque a forma de
obtê-las ofende a crença de parcelas da sociedade, em
especial os religiosos, e, em alguns países, também as
leis: as células-tronco são retiradas de embriões, que,
ao ceder esse material, tornam- se inviáveis.” (Pesquisa
Fapesp, https:// revistapesquisa.fapesp.br/celulas-tronco/,
2005)
Com relação às células-tronco, é incorreto afirmar:
Respo
st
a
S
el
e
ci
o
n
a
d
a:
d. Quando retiradas de embriões
congelados, eliminam as
questões éticas e religiosas
associadas à obtenção de
órgãos para transplantes,
independentemente do tempo de
congelamento.
Respo
st
a
s:
a. As células-tronco podem ser retiradas
da massa celular interna de
blastocistos.
b. As células-tronco de um paciente
podem ser usadas para regenerar
seus tecidos ou órgãos lesados,
eliminando o risco de rejeição
imunológica.
c. As células-tronco de adulto, caso
recebam estímulo adequado, são
capazes de se diferenciar em outros
tipos de célula, independentemente
do seu tecido de origem.
d. Quando retiradas de embriões
congelados, eliminam as questões
éticas e religiosas associadas à
obtenção de órgãos para
transplantes, independentemente do
tempo de congelamento.
e. As células-tronco embrionárias são
capazes de se diferenciar em outros
tipos de células, desde que
cultivadas sob condições
adequadas.
C
o
m
e
n
t
á
r
i
o
d
a
r
e
s
p
o
s
t
a
:
Resposta: D
Comentário: células-tronco são
células indiferenciadas, ou seja,
são células não especializadas do
corpo humano. Elas são capazes
de se diferenciarem em outros
tipos celulares e têm a capacidade
de se autorrenovar (isso quer
dizer que elas podem se dividir e
originar novas células-tronco).
Células-tronco podem ser obtidas
a partir da massa celular interna
do blastocisto. Foi observado que
tecidos adultos também possuem
populações de células-tronco,
células que, se receberem o
estímulo adequado em
laboratório, podem dar origem a
diferentes tipos celulares. O uso
de células-tronco embrionárias
continua sendo motivo de debate
ético. No Brasil, é permitida
pesquisa com células-tronco
retiradas de embriões humanos
congelados. Para isso, é
necessário que o embrião seja
inviável ou que tenha
permanecido congelado por mais
de 3 anos. Além disso, a utilização
apenas pode ocorrer a partir do
consentimento dos genitores.