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Roteiro de Aula Prática Introdução à Biologia Celular e do Desenvolvimento Disciplina: Introdução à Biologia Celular e do Desenvolvimento ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 1 Unidade: 3 Aula (White Label)/Seção (KLS): 3.1 SOFTWARE ☐Software / ☒ Acesso on-line ☐Pago / ☒ Não Pago Infraestrutura: O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER ACESSADO POR CELULAR OU TABLET. O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB. SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA. 1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome; 2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox; 3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador; 4. Verifique se o seu navegador está atualizado; 5. Realize teste de velocidade da internet. Descrição do software: Laboratório Algetec ATIVIDADE PRÁTICA 1 Atividade proposta: Extração e purificação de DNA e RNA Objetivos: Analisar as funções e as finalidades de cada reagente e/ou material descritos no protocolo de extração e purificação de DNA ou RNA; Definir cada etapa descrita no protocolo de extração e purificação de DNA ou RNA. Procedimentos para a realização da atividade: Materiais necessários: Jaleco; Luvas; Máscara; Óculos; Centrífuga de Eppendorf; Vórtex; Incubadora; Tubo de coleta com amostra de sangue; Tubo Eppendorf; Tubo spin; Hipoclorito de sódio; Ponteira para micropipeta; Micropipeta; Nanodrop (espectrofotômetro); Água Mili-Q; Notebook; Álcool 96%; Kit de extração DNA – Tampão de lise S; Kit de extração DNA – Tampão de lavagem SI; Kit de extração DNA – Tampão de lavagem SII; Kit de extração DNA – Tampão de eluição SI; Kit de extração DNA – Proteinase K tipo L; Kit de extração DNA – Tampão de proteinase. PROCEDIMENTO 1. Segurança do experimento Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”. Visualize a pia clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Pia” localizada dentro do painel de visualização no canto superior esquerdo da tela. Se preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+1”. Abra a torneira clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pia. Abra o armário de EPI clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas. Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas máscaras e óculos. Feche as portas do armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre elas. 2. Etapa da Lise Nesta etapa, você deverá pipetar 25 μl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipetar 200 μl da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último, pipetar 200 μl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min. Para isto, siga as etapas ilustradas a seguir: Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”. Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior esquerdo digite o volume e, em seguida, clique em “OK”. Posicione a pipeta no tubo de Proteinase K clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Proteinase K”. Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior esquerdo, em seguida, clique em “OK”. Posicione a pipeta no tubo com a amostra de sangue clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Amostra de sangue”. Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Posicione a pipeta no tampão de lise S clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tampão de lise S”. Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Tampe o tubo Eppendorf clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Homogeneíze o eppendoff no vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo. Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Pular tempo”. Retire o tubo do vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo. Coloque o tubo na incubadora clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo. Feche a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela. Ligue a incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar. Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Pular tempo”. Abra a tampa da incubadora clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ela. Retire o tubo da incubadora cliquando com o botão direito do mouse sobre a mesma. 3. Etapa da Ligação Nesta etapa, você deverá pipetar 210 μl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneízar de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 μl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. Para isto, siga as etapas ilustradas: Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior esquerdo, em seguida, clique em “OK”. Posicione a pipeta no recipiente de álcool 96% pura clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Álcool 96%”. Posicione a pipeta no tubo Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Tampe o tubo Eppendorf clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Homogeneíze o eppendoff no vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo. Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”. Retire o tubo do vortex clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo. Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior esquerdo, em seguida, clique em “OK”.Posicione a pipeta no Eppendorf clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Eppendorf”. Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tubo spin”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Ajuste a velocidade de rotação clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a seta para cima. Ajuste o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a seta para cima. Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa. Ligue a centrífuga clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar. Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”. 4. Etapa da Lavagem Nesta etapa, você irá retirar o Eppendorf da centrífuga, descartar o tubo de coleta e colocar o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 μl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 μl o tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente. Siga as ilustrações abaixo: Abra a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa. Retire o conjunto de tubos clicando com o botão direito do mouse sobre a centrífuga. Retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Retirar tubo spin”. Descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Descartar”. Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior esquerdo, em seguida, clique em “OK”. Posicione a pipeta no tampão lavagem SI clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tampão lavagem SI”. Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tubo spin”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa. Na sequência, repita os passos de centrífuga descritos acima. Ao finalizar a centrifugação, retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Retirar tubo spin” e descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Descartar”. Lembre-se estas orientações já estão descritas no roteiro. Em seguida, ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Posicione a pipeta no tampão lavagem SII clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tampão lavagem SII”. Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tubo spin”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa. Na sequência, repita os passos de centrífuga descritos acima. Ao finalizar a centrifugação, retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Retirar tubo spin” e descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Descartar”. Lembre-se estas orientações já estão descritas no roteiro. Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa. Na sequência, repita os passos de centrífuga descritos acima. 5. Etapa da Eluição Nesta etapa, retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 μl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra. Observe as orientações e lembre-se que estas etapas já foram ilustradas acima. • Ao finalizar a centrifugação, retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Retirar tubo spin” e descarte o tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Descartar”. • Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume” para 200 μl (conforme já demonstrado) e posicione a pipeta no tampão eluição S clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tampão eluição S”. • Posicione a pipeta no tubo spin clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tubo spin”. • Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. • Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”. • Coloque o tubo spin dentro do tubo de coleta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. • Coloque na centrífuga o conjunto de tubos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. • Feche a tampa clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de abrir e fechar a tampa. Ligue a centrífuga clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar. • Pule o tempo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box “Avançar”. 6. Realizando a mensuração da amostra Nesta etapa, retire o Eppendorf da centrífuga, e retire o tubo spin de dentro do tubo de coleta. Em seguida, abra o espectrômetro e limpe-o, depois pipete 10 μl de água mili-q no mesmo e feche o espectrômetro. Ligue o notebook, clique na opção “Nucleic acid” e depois na opção “blank”. Por último, limpe o novamente o espectrômetro e pipete 10 μl da amostra, feche o espectrômetro e selecione a opção “Measure”. Retire o conjunto de tubos clicando com o botão direito do mouse sobre a centrífuga. Retire o tubo spin do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre o tubo de coleta e selecionado o box “Retirar tubo spin”. Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Espectrofotômetro” ou atravésdo atalho do teclado “Alt+7”. Abra o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre o mesmo. Limpe o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o mesmo. Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”. Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Mude o volume da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o box no canto inferior esquerdo, em seguida, clique em “OK”. Posicione a pipeta na água ultra pura clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Água Ultra Pura”. Posicione a pipeta no espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Espectrofotômetro”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Feche o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre ele. Visualize o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Notebook” ou através do atalho do teclado “Alt+8”. Ligue o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o botão de ligar. Selecione “Nucleic Acid” no notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela. Selecione “Blank” no notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela. Visualize o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Espectrofotômetro” ou através do atalho do teclado “Alt+7”. Abra o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre ele. Limpe o espectrofotômetro clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+3”. Ajuste o volume da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Reajustar volume”. Posicione a pipeta no tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Tubo de Coleta”. Posicione a pipeta no espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Colocar em Espectrofotômetro”. Troque a ponteira da pipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a mesma e, em seguida, selecione “Trocar ponteira”. Feche o espectrofotômetro clicando com o botão direito do mouse sobre ele. Visualize o notebook clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Notebook” ou através do atalho do teclado “Alt+8”. Selecione “Measure” no notebook clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a tela. Checklist: Observar e analisar as etapas realizadas nos procedimentos focando na compreensão da técnica e reagentes. Resultado: Aluno, você deverá entregar: Um arquivo contendo as respostas para os questionamentos a seguir: 1. No que consiste a etapa de eluição da purificação? 2. Qual a diferença entre os tampões de lavagem SI e SII? 3. Na etapa de ligação, porque se utiliza o álcool 96%? Referências: WATSON, J. D. Biologia molecular do gene. 7. ed. Porto Alegre: Artmed, 2015. MENCK, C. F. M. Genética molecular básica: dos genes aos genomas. 1. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2017. GRIFFITHS, A. J. F. Introdução à genética. 12. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2022. ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 2 Unidade: 4 Aula (White Label)/Seção (KLS): 4.1 SOFTWARE ☐Software / ☒ Acesso on-line ☐Pago / ☒ Não Pago Infraestrutura: O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER ACESSADO POR CELULAR OU TABLET. O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB. SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA. 1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome; 2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox; 3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador; 4. Verifique se o seu navegador está atualizado; 5. Realize teste de velocidade da internet. Descrição do software: Laboratório Algetec ATIVIDADE PRÁTICA 2 Atividade proposta: Analisar as lâminas do aparelho reprodutor feminino e masculino, bem como as características de cada órgão como pênis, ductos genitais, glândulas acessórias, testículo, epidídimo e ovário. Objetivos: Observar as estruturas dos aparelhos reprodutores feminino e masculino; Analisar as características de cada órgão como pênis, ductos genitais, glândulas acessórias, testículo, epidídimo e ovário; Identificar os tecidos presentes nestas estruturas. Procedimentos para a realização da atividade: Materiais necessários: Microscópio óptico Kit de lâminas; Laminário; Óleo de imersão; Solução de limpeza (50% éter sulfúrico e 50% clorofórmio); C2H6O (álcool etílico); Cotonete; Algodão; Papel macio. PROCEDIMENTO 1. Segurança do experimento Higienize as mãos na pia e coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs: jaleco e luvas”. 2. Escolhendo a lâmina Abra o laminário, selecione uma lâmina e mova para o microscópio. No laminário contém as seguintes lâminas: testículo, epidídimo, próstata, vesícula seminal, pênis e ovário. Selecione a lâmina clicando com o botão esquerdo do mouse na lâmina. 3. Visualizando a lâmina no microscópio Ligue o microscópio. Visualize a lâmina na objetiva de 4x, 10x e 40x. Atente-se à instrução que, para movimentação do revólver ou para efetuar as configurações de posicionamento dos parafusos, condensador ou diafragma, deve-se clicar com o botão esquerdo do mouse sobre a área desejada e movimentar o cursor do mouse para direita ou esquerda. Coloque uma gota do óleo de imersão sobre a lâmina no microscópio e mude para a objetiva de 100x. Retorne a lâmina para o laminário. Selecione as demais lâminas para observação. Visualize a lâmina na objetiva de 4, 10 e 40x pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o revólver e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. Para visualização na objetiva de 100x coloque o óleo de imersão clicando com o botão esquerdo do mouse no conta-gotas. Visualize a lâmina na objetiva de 100x pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o revólver e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. Retire a lâmina do microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse na lâmina de vidro. Repita as etapas para as demais lâminas. 4. Ao finalizar, feche o laminário e desligue o microscópio. Limpe o microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse no cotonete, algodão e lenço e papel filtro. Checklist: Observar as lâminas específicas para o experimento; Observar e analisar as principais características estruturais dos tecidos observados; Observar e esquematizar as lâminas estudada. Resultados da aula prática: Aluno, você deverá entregar: Um arquivo contendo o desenho esquemático das estruturas observadas bem como a resposta para os questionamentos a seguir: 1. Quais os órgãos envolvidos com o sistema reprodutor feminino e masculino? 2. Qual a importância das células de Sertoli e Leydig? 3. Quais os estágios de maturação dos folículos ovarianos? Referências: JUNQUEIRA, L. C. U. Biologia celular e molecular. 9.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2012. GARTNER, L. P. Atlas coloridode histologia. 7. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2018. PAWLINA, W. Ross histologia texto e atlas: correlações com biologia celular e molecular. 8. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2021. SADLER, T. W. Langman, embriologia médica. 14. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2021.
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