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AD1 BIO CEL I COM GABARITO – 2013/2 OFICIAL 1- (3,0 pontos) As células em geral são transparentes, frágeis e de tamanho diminuto. Para estudá- las podemos utilizar a microscopia óptica e eletrônica. Com a microscopia óptica podemos observar as células vivas ou fixadas, coradas ou não. Porém quando dispomos da microscopia eletrônica de transmissão é preciso que as células sejam fixadas, desidratadas, microtomadas e, por fim, contrastadas. Descreva estes quatro processos, justificando a importância de cada um deles. Seja objetivo! A fixação é uma etapa fundamental, pois mantém o tecido preservado, inibindo sua decomposição. 0,75 ponto É a etapa inicial no processamento de uma amostra para visualização no microscópio, sendo os fixadores mais utilizados o glutaraldeído e o formaldeído a 4%. Em microscopia eletrônica, além de fixação existe também a etapa de pós-fixação, na qual o tecido é embebido em uma solução de tetróxido de ósmio, uma substância que se impregna em fosfolipídios, funcionando como um fixador e ao mesmo tempo, um contrastante. Como as amostras precisam ser muito finas para serem visualizadas, elas precisarão ser cortadas em um ultramicrótomo, que cortará o tecido em fatias de espessura de poucos nanômetros, o suficiente para que o feixe de elétrons consiga atravessar a amostra. 0,75 ponto Entretanto, as células são muito frágeis e hidratadas, o que impossibilita o corte. Para que seja possível, a água deve ser removida e substituída por uma resina que tornará o tecido mais rígido. Como a água e a resina não se misturam, inicialmente toda a água das células deve ser retirada, num processo conhecido como desidratação, onde o tecido já fixado passa por soluções alcoólicas cada vez mais concentradas, até que toda a água da célula seja substituída e a partir daí podemos fazer a inclusão em resina. 0,75 ponto Uma vez que as células são formadas basicamente por átomos leves (carbono, hidrogênio, oxigênio e nitrogênio) se faz necessária a impregnação da amostra com sais de metais pesado como urânio e chumbo. Dessa forma, menos elétrons atravessarão diretamente a amostra, melhorando o contraste, por isso essa etapa é conhecida como contrastação. 0,75 ponto 2- (3,0 pontos) Discuta o conceito de linhagem celular estabelecida e dê dois exemplos de aplicações onde estas culturas sejam utilizadas. Um dos grandes entraves no início dos trabalhos com cultura de células era o tempo de vida finito das células. Isso foi resolvido com o desenvolvimento de linhagens celulares estabelecidas, que nada mais são do que tipos celulares que sofreram alguma modificação genética tornando ilimitada a sua capacidade de proliferação. 0,75 ponto Diferentemente do câncer, cujas células também possuem tal capacidade proliferativa, as células de linhagens estabelecidas mantêm as mesmas funções que desempenhavam no organismo do qual foram retiradas. 0,75 Linhagens celulares estabelecidas podem ser utilizadas para diversos fins. Dois bastante conhecidos são: para a produção de anticorpos através de hibridomas 0,75 ponto e para a produção de biofármacos. 0,75 ponto 3- (4,0 pontos) O modelo de membrana estabelecido por Singer e Nicholson em 1972 ganhou o nome de “Mosaico Fluido”. Pesquise qual era o modelo de membrana aceito anteriormente e compare os dois, justificando a escolha dos nomes dos modelos. O modelo de membrana aceito anteriormente ao estabelecido por Singer e Nicholson era o modelo trilaminar de Hugh Davson e James Danielli. Nesse, a membrana celular era constituída de uma bicamada de fosfolipídios flanqueada por duas camadas de proteínas globulares, uma voltada para o meio intracelular e uma voltada para o meio extracelular. Estudos com microscopia eletrônica de transmissão mostravam a membrana como uma estrutura trilaminar, corroborando o modelo de Davson e Danielli. Entretanto, investigações posteriores mostraram que muitas das proteínas presentes na membrana possuíam caráter anfipático, o que inviabilizava o modelo, uma vez que nele a parte hidrofílica das proteínas estava em contato com o grupamento polar dos fosfolipídios e, consequentemente, a parte hidrofóbica estaria em contato com a água. Além disso, observações por criofratura mostravam uma distribuição irregular de proteínas na membrana. 2,0 pontos Assim, surgiu o modelo proposto por Singer e Nicholson, que elimina as proteínas flanqueadoras e insere proteínas transmembranas. Neste modelo os fosfolipídios continuam formando uma bicamada, mas agora as proteínas estão inseridas nesta ou associadas perifericamente. Os fosfolipídios que constituem a bicamada tem livre movimentação, se deslocando continuamente, e as proteínas podem navegar por entre os fosfolipídios, o que denota uma grande fluidez. Pela presença de lipídios, proteínas e glicídios, a membrana se torna um grande mosaico e assim, a partir dessas duas características, surge o nome desse modelo, Mosaico Fluido. 2,0 pontos
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