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Capítulo 10 • Tecnologia de DNA recombinante moderna 353 dos com plantas. Na verdade, certas características de plantas as tornam espe- cialmente acessíveis para os métodos de DNA recombinante. Quando um pedaço de tecido vegetal é cultivado em um meio estéril con- tendo nutrientes e reguladores de crescimento apropriados, algumas das células são estimuladas a proliferar indefinidamente de maneira desorganizada, produ- zindo uma massa de células relativamente indiferenciadas chamada de calo. Se os nutrientes e os reguladores do crescimento são cuidadosamente manipulados, pode-se induzir a formação de um broto dentro do calo, e em várias espécies, uma planta nova completa pode ser regenerada a partir dessas células. Em várias plantas – incluindo tabaco, petúnia, cenoura, batata e Arabidopsis –, uma única célula de um desses calos pode ser cultivada até um pequeno aglomerado de células a partir do qual uma planta completa pode ser regenerada (ver Figura 8-2B). Assim como um camundongo mutante pode ser originado por manipu- lação genética a partir de células-tronco embrionárias em cultura, as plantas transgênicas podem ser criadas a partir de células vegetais transfectadas com DNA em cultura (Figura 10-37). A capacidade de produzir plantas transgênicas acelerou muito o progresso em várias áreas da biologia celular de plantas. Ela tem uma parte importante, por exemplo, no isolamento de receptores para os reguladores do crescimento e na análise de mecanismos de morfogênese e da expressão gênica nas plantas. Essas técnicas também abriram várias novas possibilidades na agricultura que pode- riam beneficiar tanto o produtor quanto o consumidor. Elas tornaram possível, por exemplo, modificar a proporção entre lipídeo, amido e proteína nas semen- tes, conferir às plantas resistência a pestes e a vírus e criar plantas modificadas que toleram ambientes extremos, como pântanos salgados ou solos alagados. Uma variedade de arroz foi modificada geneticamente para produzir β-caroteno, o precursor da vitamina A. Caso esse arroz substituísse o arroz convencional, esse “arroz de ouro” – assim chamado pela sua cor levemente amarela – poderia aliviar a deficiência grave de vitamina A, que causa cegueira em centenas de milhares de crianças nos países em desenvolvimento a cada ano. Discos removidos de folhas de tabaco Discos de folhas incubados por 24 horas com Agrobacterium modificado geneticamente O meio de seleção permite apenas a proliferação de células vegetais que adquiriram DNA das bactérias Calo Meio indutor de brotos Broto Transferência do broto para meio indutor de raízes Crescimento da muda enraizada Planta adulta de tabaco carregando o transgene que originalmente estava presente no plasmídeo bacteriano Figura 10-37 Plantas transgênicas podem ser produzidas utilizando téc- nicas de DNA recombinante otimiza- das para plantas. Um disco é cortado de uma folha e é incubado em uma cul- tura de Agrobacterium que carrega um plasmídeo recombinante com um mar- cador de seleção, e o gene desejado modificado geneticamente. As células vegetais lesionadas nas extremidades do disco liberam substâncias que atraem as bactérias, que injetam seu DNA nas células das plantas. Apenas aquelas células vegetais que captam o DNA apropriado e expressam o gene do marcador de seleção sobrevivem para proliferar e formar o calo. A ma- nipulação dos fatores de crescimento suplementados para o calo o induzem a formar brotos que, subsequentemen- te, formam raízes e crescem em plantas adultas carregando o gene modificado. Alberts_10.indd 353Alberts_10.indd 353 16/01/2017 10:23:5116/01/2017 10:23:51
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