46

Prévia do material em texto

Para que se consiga amplificar um gene com eficiência e especificidade, alguns princípios devem ser seguidos na escolha dos oligonucleotídeos. Dentre as propriedades dos oligonucleotídeos usados em reação de cadeia da polimerase dispostas a seguir, assinale a única que está descrita corretamente para se alcançar o desenho ótimo do oligonucleotídeo. 
Alternativas
Tamanho: a região do oligonucleotídeo complementar ao DNA molde deve ter entre 5 e 10 nucleotídeos, no máximo. 
Composição de bases: o conteúdo G+C deve estar entre 40% e 60%, com uma distribuição equilibrada das quatro bases ao longo do comprimento do oligonucleotídeo. 
Sequências autocomplementares e repetitivas: sequências palindrômicas ou repetitivas com mais de 5 pares de bases podem estar presentes, contanto que estejam na região 5’. 
Temperatura de desnaturação (Melting, Tm): os valores calculados de Tm dos membros de um par de oligonucleotídeos podem diferir em até 8º C. 
Terminal 3’: a natureza dos terminais 3’-OH dos oligonucleotídeos não é tão importante quanto a do terminal 5’-PO4 , que deve sempre terminar em G ou C, mas nunca em GC ou CG.