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Pessoa 46, 2021: 63–115 www.ingentaconnect.com/content/nhn/pimj ARTIGO DE PESQUISA ISSN (On-line) 1878-9080 https://doi.org/10.3767/persononia.2021.46.03 Avaliando espécies emBotryosphaeriales W.Zhang1, JZ Groenewald2, L. Lombardo2, R. K. Schumacher3, AJL Phillips4, PW Crous2,5,* Palavras-chave AbstratoOBotryosphaeriales(Dotideomicetos) inclui numerosas espécies endofíticas, sapróbicas e fitopatogênicas associadas a uma ampla gama de sintomas, mais comumente em plantas lenhosas. Em um recente tratamento filogenético de 499 isolados da coleção de culturas (CBS) do Instituto Westerdijk, avaliamos as famílias e gêneros acomodados nesta ordem de fungos importantes. O presente estudo apresenta análises filogenéticas multigênicas para mais 230 isolados usando ITStef1,banheira2, LSU erpb2loci, em combinação com dados morfológicos. Com base nesses dados, 58 espécies são reduzidas à sinonímia e oito novas espécies são descritas. Eles incluem Diplodia afrocarpi( Afrocarpo, África do Sul),Dothiorella diospiricola(Dióspiros, África do Sul),Lasiodiplodia acaciae(Acácia, Indonésia), Neofusicoccum podocarpi(Podocarpo,África do Sul),N.rapaneae(Rapaneia, África do Sul),Phaeobotryon ulmi(Ulmo, Alemanha),Saccharata grevilleae(Grevília,Austrália) eS.Hakeiphila (Hakea,Austrália). Os resultados esclareceram a identidade de numerosos isolados que não possuíam binômios latinos ou que foram depositados com nomes incorretos na coleção da CBS no passado. Eles também fornecem uma base sólida para estudos futuros mais aprofundados sobre os táxons da ordem. Sequências dotef1,banheira2erpb2os genes provaram ser os marcadores mais confiáveis. Ao nível da espécie, os resultados mostraram que os genes mais informativos eram inconsistentes, mas que uma combinação de quatro códigos de barras candidatos (ITS,tef1,banheira2erpb2) forneceu uma resolução confiável. Além disso, dado o grande número de isolados adicionais incluídos neste estudo e os conjuntos de dados de DNA multigênicos recentemente gerados, várias espécies também poderiam ser reduzidas à sinonímia. O estudo ilustra o valor de reavaliar a identidade de coleções mais antigas em coleções culturais utilizando estruturas e métodos taxonômicos modernos. patógenos de cancro e manchas foliares Multi- Locus Sequence Typing (MLST) novos táxons sistemática Citação: Zhang W, Groenewald JZ, Lombard L, et al. 2021. Avaliando espécies em Botryosphaeriales. Personônia 46: 63–115. https:// doi.org/10.3767/persononia.2021.46.03. Publicado efetivamente online: 2 de fevereiro de 2021 [Recebido: 3 de outubro de 2020; Aceito: 18 de janeiro de 2021]. INTRODUÇÃO Dotideomicetos. Esses resultados mostraram que todas as espécies de 'Botryosphaeria' ePhyllostictaagrupados em um único clado que não poderia ser associado a nenhuma ordem de fungos. Consequentemente, a nova ordem,Botryosphaerialesfoi proposta e incluía apenas a família única,Botryosphaeriaceae. Evidência molecular fornecida por Minnis et al. (2012) mostraram posteriormente que uma família separada,Planistromellaceae, também residia noBotryo sphaeriales. Wikee et al. (2013) ressuscitadoFilostictáceas como uma família em BotryosphaerialesacomodarFilost ictae três novas famílias, Aplosporelláceas(Aplosporela eBagnisiella),Melanopsáceas( Melanops) eSaccha ratáceas(Saccharata), foram introduzidos por Slippers et al. (2013). Mais tarde, Wyka & Broders (2016) adicionaram oSeptorioi deaceae(Septorioides) e Yang et al. (2017) apresentou o Endomelanconiopsisáceas(Endomelanconiopsis) e Pseudo fusicoccumáceas(Pseudofusicoccum), resultando em nove famílias emBotryosphaeriales. Chinelos et al. (2017) revisaram os desenvolvimentos históricos da identificação e taxonomia das espécies da ordem e ressaltaram que a biologia dessas espécies ainda é pouco compreendida. Phillips et al. (2019) consideraram um conjunto de dados reduzido (LSU e ITS), e argumentaram que o pedido deveria acomodar apenas o Aplosporellaceae, Botryosphaeriaceae, Melanopsaceae, Phyllostictaceae, Plani stromellaceaeeSaccharatáceas. OBotryosphaeriales(Dotideomicetos) inclui um conjunto filogeneticamente e morfologicamente diverso de fungos que ocorrem em muitos hospedeiros diferentes e têm uma ampla distribuição geográfica global. Eles são encontrados como patógenos ou sapróbios em gimnospermas e angiospermas e ocorrem principalmente nos troncos e galhos de plantas lenhosas (Phillips et al. 2013, Sarr et al. 2014, Zlatkovic et al. 2016, Lawrence et al. 2017, Scarlett et al. 2017, Scarlett et al. 2017, Scarlett et al. 2017). al. 2018, Zhu et al. 2018). No entanto, ocasionalmente também são encontrados nas folhas de plantas herbáceas e até mesmo em líquenes (Denman et al. 2000, Mohali et al. 2007). Algumas espécies comumente ocorrem como endófitos assintomáticos que se tornam evidentes quando suas plantas hospedeiras são submetidas a estresse (Slippers & Wingfield 2007). Curiosamente, sabe-se que algumas espécies causam infecções oportunistas em humanos ou foram isoladas de ervas marinhas em ambientes marinhos (De Hoog et al. 2000, Sakayaroj et al. 2010). OBotryosphaerialesfoi introduzido por Schoch et al. (2006) que construíram uma filogenia multigênica a partir de 96 táxons no 1Escola de Ciências Geográficas, Universidade Normal de Lingnan, Zhanjiang 524048, China. 2Instituto de Biodiversidade Fúngica Westerdijk, Uppsalalaan 8, 3584 CT Utrecht, Os Países Baixos; e-mail do autor correspondente: p.crous@wi.knaw.nl . 3Hölderlinstraße 25, 15517 Fürstenwalde/Spree, Alemanha. 4Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, Biossistemas e Integrativas Instituto de Ciências (BioISI), Campo Grande, 1749-016 Lisboa, Portugal. 5Universidade e Centro de Pesquisa de Wageningen (WUR), Laboratório de Fito- patologia, Droevendaalsesteeg 1, 6708 PB Wageningen, Holanda. Theissen & Sydow (1918) introduziram originalmente oBotryosphae riáceascomo uma subfamília noPseudosphaeriaceae, Incluindo FeobotryoneDibotrion. Numerosos gêneros foram posteriormente incluídos, embora sem o apoio do DNA © 2021 Naturalis Biodiversity Center e Westerdijk Fungal Biodiversity Institute Você é livre para compartilhar – copiar, distribuir e transmitir a obra, nas seguintes condições: Atribuição: Não comercial: Nenhum trabalho derivado: Para qualquer reutilização ou distribuição, você deve deixar claro a terceiros os termos de licença desta obra, que podem ser encontrados em http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/legalcode. Qualquer uma das condições acima pode ser dispensada se você obtiver permissão do detentor dos direitos autorais. Nada nesta licença prejudica ou restringe os direitos morais do autor. Você deve atribuir a obra da maneira especificada pelo autor ou licenciante (mas não de forma que sugira que eles endossam você ou seu uso da obra). Você não pode utilizar esta obra para fins comerciais. Você não pode alterar, transformar ou desenvolver este trabalho. Traduzido do Inglês para o Português - www.onlinedoctranslator.com http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/legalcode http://www.ingentaconnect.com/content/nhn/pimj https://www.onlinedoctranslator.com/pt/?utm_source=onlinedoctranslator&utm_medium=pdf&utm_campaign=attribution 64 Personônia – Volume 46, 2021 dados de sequência. Liu et al. (2012) reexaminaram os espécimes-tipo de 15 gêneros e, com base na morfologia, aceitaram 29 gêneros noBotryosphaeriaceae. Posteriormente, Phillips et al. (2013) forneceram descrições detalhadas e chaves para 17 gêneros e 110 espécies conhecidas na cultura da época. Uma revisão doTiarosporelacomplexo resultou na adição de quatro novos gêneros (Crous et al. 2015), enquantoAlanphillipsia eSardenha foram introduzidos por Crous et al. (2013) e Linaldeddu et al. (2016a), respectivamente. Yang et al. (2017) apresentadoOblongo collomycese reduzidoSpencermartinsia fazer sinonímia com Dothiorella. Após estes vários tratamentos, 33 gêneros são agora reconhecidos emBotryosphaeriales. sequenciado em ambas as direções usando um kit desequenciamento de ciclo BigDye Terminator v. 3.1 (ThermoFisher Scientific) de acordo com as instruções do fabricante. As leituras direta e reversa foram emparelhadas e as sequências de consenso calculadas em MEGA v. 7.0.21 (Kumar et al. 2016) e DNASTAR Lasergene SeqMan Pro v. Todas as novas sequências e sequências que eram mais longas ou apresentavam diferenças de nucleotídeos com as sequências publicadas foram submetidas ao GenBank (Tabela S1). Análises filogenéticas Alinhamentos de sequência dos cinco loci individuais (ITS,tef1, banheira2, LSU,rpb2) para os grupos genéricos foram feitos usando MAFFT v.http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/index.html ) (Katoh & Standley 2013), e foram editados manualmente no MEGA v. Máxima Verossimilhança (ML) e análise bayesiana (BA) foram utilizadas para inferências filogenéticas dos alinhamentos concatenados. As análises de ML foram executadas no portal CIPRES Science Gateway (https://www.phylo.org/) (Miller et al. 2012) usando RAxML-HPC BlackBox v. 8.2.10 (Stamatakis 2014) e as análises bayesianas localmente usando MrBayes v. Para análises de ML, foi definido um modelo de substituição GTR+GAMMA com 1000 iterações de bootstrap. Para as análises Bayesianas, conjuntos de caracteres foram definidos para cada locus, e o MrModel Test v. 2.2 (Nylander 2004) foi usado para determinar as configurações ideais do modelo de substituição de nucleotídeos. As análises bayesianas foram computadas com quatro cadeias de Markov Monte Carlo simultâneas, 100 milhões de gerações e uma frequência de amostragem de 10 gerações ( Botryosphaeria,Neofusicoccum parvum complexo,Neoscitalidium ,Feobotryon,Pseudofusicoccum eSaccharataalinhamentos) ou 100 gerações (Diplódio, Dothiorella,LasiodiplódiaeNeofusicoccum alinhamentos), encerrando a execução automaticamente quando o desvio padrão das frequências divididas caiu abaixo de 0,01. A fração de burn-in foi definida como 0,25, após o que foram calculadas as árvores de consenso da regra majoritária de 50% e os valores de probabilidade posterior (PP). As árvores resultantes foram plotadas usando FigTree v. 1.4.2 (http://tree.bio.ed.ac. reino unido/software/figtree). Alinhamentos e árvores foram depositados no TreeBASE (www.treebase.org; estudo S27596). A coleção de culturas (CBS) do Westerdijk Fungal Biodiversity Institute (WI) em Utrecht, Holanda, acomoda numerosas culturas deBotryosphaeriales. Muitos destes foram objecto de estudos anteriores, mas outros ainda não foram identificados ao nível da espécie ou sujeitos aos quadros e métodos taxonómicos actuais. O objetivo do presente estudo foi nomear os animais não identificadosBotryosphaerialesna coleção CBS que não foram tratados por Yang et al. (2017), e para resolver sua taxonomia à luz dos dados de sequência de DNA atualmente disponíveis e inferência filogenética. MATERIAIS E MÉTODOS Isolados Todos os isolados utilizados neste estudo foram provenientes da coleção de cultura CBS do WI em Utrecht, Holanda, e da coleção de trabalho de Pedro Crous (CPC) alojada no WI (Tabela S1). Sequências de DNA para outras cepas não examinadas aqui, mas publicadas em estudos filogenéticos anteriores, foram recuperadas do GenBank (Tabela S1). Extração de DNA, amplificação por PCR e sequenciamento O DNA genômico total foi extraído de culturas axênicas com 7 dias de idade, cultivadas em ágar extrato de malte a 2% (MEA) em temperatura ambiente, usando o kit de isolamento de DNA Microbial UltraClean (Mo Bio Laboratories, Califórnia, EUA) seguindo os protocolos fornecidos pelo fabricante. Sequências genéticas parciais foram determinadas para os espaçadores transcritos internos 1 e 2, incluindo o nrDNAgene 5.8S (ITS) intermediário, o gene do fator de alongamento de tradução 1-alfa (tef1), o gene da beta-tubulina (banheira2), a grande subunidade do gene do RNA ribossômico nuclear (LSU) e o segundo maior gene da subunidade da RNA polimerase II dirigida por DNA (rpb2), utilizando os primers listados na Tabela 1. Os protocolos de amplificação seguiram os de Pavlic et al. (2009), Phillips et al. (2013), Chinelos et al. (2013) e Cruywagen et al. (2017). Os amplicons foram As árvores genéticas individuais foram avaliadas quanto a conflitos de clados entre as filogenias individuais (ver próximo parágrafo). Para estas avaliações, foram realizadas análises Bayesianas conforme descrito acima (com uma amostragem de cada 10 gerações para todas as análises), bem como análises de parcimónia utilizando PAUP v. 4.0b10 (Swofford 2003) conforme explicado em Braun et al. (2018). Espécies com dados faltantes para um determinado gene foram excluídas da análise daquela região genética. Para todas as potenciais novidades taxonómicas, a sua posição filogenética, comprimento do ramo até à irmã mais próxima tabela 1 Detalhes das combinações de primers utilizadas durante este estudo para amplificação e sequenciamento. Local1 Nome primário Sequência 5'→3' Tm (°C) Referência ISSO É ITS5 ITS4 GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 52 52 Branco e outros. (1990) Branco et al. (1990) LSU LR0R LR5 ACC CGC TGA ATO TAA GC TCC TGA GGG AAA CTT CG 52 52 Rehner e Samuels (1994) Vilgalys e Hester (1990) tef1 EF1-728F EF1-986R GATO CGA GAA GTT CGA GAA GG TAC TTG AAG GAA CCC TTA CC 54 54 Carbone e Kohn (1999) Carbone e Kohn (1999) banheira2 Bt-2a Bt-2b GGT AAC CAA ATC GGT GCT GCT TTC ACC CTC AGT GTA GTG ACC CTT GGC 52 52 Vidro e Donaldson (1995) Vidro e Donaldson (1995) rpb2 RPB26F fRPB27cR RPB2bot6F RPB2bot7R RPB2LasF RPB2LasR TGG GGK WTG GTY TGY CCT GC CCC ATR GCT TGY TTR CCC AT GGT AGC GAC GTC ACT CCC GGA TGG ATC TCG CAA TGC G GGTAGCGACGTCACTCCT GCGCAAATACCCAGAATCAT 60→58→54 60→58→54 60→58→54 60→58→54 60→58→54 60→58→54 Liu et al. (1999) Liu et al. (1999) Sakalidis et al. (2011) Sakalidis et al. (2011) Cruywagen et al. (2017) Cruywagen et al. (2017) 1 ITS: regiões espaçadoras transcritas internas e gene 5.8S nrRNA interveniente; LSU: gene 28S nrRNA parcial, subunidade grande;tef1: gene do fator de alongamento de tradução parcial 1-alfa;banheira2: gene parcial da betatubulina;rpb2: segunda maior subunidade parcial da RNA polimerase II dirigida por DNA. http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/index.html https://www.phylo.org/ http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree http://www.treebase.org http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/index.html http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/index.html http://mafft.cbrc.jp/alignment/server/index.html https://www.phylo.org/ http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree http://tree.bio.ed.ac.uk/software/figtree http://www.treebase.org http://www.treebase.org W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 65 84/- CERC 2298Botryosphaeria wangensis CERC 2299Botryosphaeria wangensis CBS110302Botryosphaeria dothidea CBS 110484Botryosphaeria dothidea CERC 1976Botryosphaeria dothidea CMW7999Botryosphaeria dothidea CBS 115476Botryosphaeria dothidea CBS121557Botryosphaeria dothidea CGMCC3.17724Botryosphaeria sinensis CGMCC3.17723Botryosphaeria sinensis MFLUCC 14-0459Botryosphaeria quercus GZCC 16-0013Botryosphaeria minutispermatia 57/0,86 76/0,91 Botryosphaeria dothidea GZCC 16-0014Botryosphaeria minutispermatia CBS 121769Botryosphaeria auasmontanum CBS123530(Botryosphaeria dothidea) CMW25215(Botryosphaeria dothidea) DAR 78224(Botryosphaeria dothidea) MUCC 500(Botryosphaeria dothidea) MUCC 501(Botryosphaeria dothidea) MUCC 503(Botryosphaeria dothidea) PD 296(Botryosphaeria dothidea) CPC 29048(Botryosphaeriaesp.) CERC 3441Botryosphaeria fusispora CERC 3469Botryosphaeria fusispora MFLUCC 10-0098Botryosphaeria fusispora MFLUCC 11-0507Botryosphaeria fusispora CERC 2006Botryosphaeria fusispora CERC 2930Botryosphaeria fusispora CERC 2949Botryosphaeria fusispora CBS 118831Botryosphaeria fusispora CPC 29629Botryosphaeria fusispora CBS 127193Botryosphaeriafabicerciana CBS 127194Botryosphaeria fabicerciana CBS 135219Botryosphaeria kuwatsukai PSL 5Botryosphaeria kuwatsukai CGMCC3.18008Botryosphaeria rosaceae CGMCC3.18007Botryosphaeria rosaceae 50/- 99/1 90/1 68/0,98 - /1 601/04 Botryosphaeria fabicerciana 86/1 - /1 85/1 Botryosphaeria kuwatsukai - /1 ATCC 22927 CBS 119047 CBS 119048 100/1 Botryosphaeria corticis 94/1 CERC 2946 CERC 2947 Botryosphaeria qingyuanensis 97/00,97 100/1 CERC 1999Botryosphaeria pseudoramosa CERC 2001Botryosphaeria pseudoramosa CBS 122069Botryosphaeria ramosa Botryosphaeria ramosa 96/1 99/1 CBS 124702 CBS 124703 Botryosphaeria scharifii CBS 133992 CBS 141505 MFLUCC 10-0051 100/1 Agaves de Botryosphaeria CBS 134651Eucalipto Cophinforma 0,005 Figura 1Árvore filogenética deBotryosphaeriaresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1ebanheira2alinhamento de sequência. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,85) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas em audaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaEucalipto Cophinforma(CBS 134651). 66 Personônia – Volume 46, 2021 CBS 112555 CBS 113509 CBS119130 CBS 121106 CBS121485 CBS124137 CBS 124138 CBS 124139 CBS 134701 CBS 140891 CBS 215,25 CBS 585,50 CPC 30978 CPC 35496 CPC 30266 CPC 30268 CBS 106,84 CBS110488 CBS 110868 CBS110870 CBS 110879 CBS 112661 CBS 113511 CBS 114796 CBS 121425 CBS 110498 CBS 110854 CBS 114793 CBS 129227 CBS 134016 CBS 119049 CBS 121884 CBS 121885 CBS 134700 CBS 110878 CBS 113506 CBS 113525 CBS 114797 CBS121108 CBS 140890 CBS121110 CPC 29849 CBS 100565 CBS 112876 CBS121107 CBS 121109 CBS 177,26 59/0,90 Diplodia seriata 79/1 0,006 Figura 2Árvore filogenética deDiplódioresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1ebanheira2alinhamento de sequência. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,89) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizada Lasiodiplodia theobromae(CBS 164,96). W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 67 CMW4900(Diplodia scrobiculata) CBS 117836(Diplodia scrobiculata) CBS 139796(Diplodia scrobiculata) CBS 109944(Diplodia scrobiculata) CBS 113297(Diplodia scrobiculata) CBS 113423(Sphaeropsis sapinea) CBS118110Diplodia scrobiculata CMW 189Diplodia scrobiculata CBS119939Diplodia guayanensis CBS 129750Diplodia guayanensis CBS 129760Diplodia guayanensis CMW8746Diplodia guayanensis CBS 129749Diplodia guayanensis CBS124134Diplodia intermediária CBS 124462Diplodia intermediária CBS 112556Diplodia intermediária CBS 141915Diplódia rosácea NB8Diplódia rosácea CBS 114863Diplodia sapinea CBS117348Diplodia sapinea CBS119938Diplodia sapinea CBS121105Diplodia sapinea CPC 32394Diplodia sapinea CBS 393,84Diplodia sapinea CBS 129172Diplodia sapinea CBS 136778Diplodia sapinea CBS 138184Diplodia sapinea CBS 295,38Diplodia sapinea CBS 591,84Diplodia sapinea CPC 29861Diplodia sapinea MFLUCC 14-1007Diplodia itálica CBS 428,71Diplodia itálica 801/07 62/0,91 96/1 Diplodia scrobiculata 79/1 59/- 83/0,93 55/- 86/0,90 64/- Diplodia sapinea 96/1 90/0,95 100/1 CBS 124714 CBS 124715 CBS 124713 Diplódia citricarpa 901/08 BN-55Diplódia insular CBS 140350Diplódia insular88/1 81/- CBS 124907(Diplodia pseudoseriata) CBS 124933(Diplodia alatafruta) GUCC G603-1Diplodia pseudoplatani Diplodia pseudoseriata97/1 80/0,98 CBS 124931Diplodia alatafruta CBS 124932Diplodia alatafruta 99/1 CBS 124906Diplodia pseudoseriata 64/- CBS 125527(Diplodia pseudoseriata) CBS 139666 CBS 139668 CBS 131682 CBS 130408 CBS 130410 CBS 140851 CPC 29680 63/1 99/1 Diplódia estuarina 71/- 100/1 100/1 Diplodia alocelula 100/- Diplodia eriobotryicola 0,006 Figura 2 (cont.) 68 Personônia – Volume 46, 2021 CBS 136012 CBS 431,82 CPC 34847 CPC34848 CPC34849 CPC 35401 CBS 136010 CBS 136011 CAP 257 CBS 121886 CBS 121887 CBS 120835 CBS121104 B 127 CBS 112554 100/1CBS 124129 CBS124130 CBS 124253 CBS116470 CBS 116472 100/1 Diplodia fraxini 72/- 901/08 Diplodia olivarum 99/1 Diplodia africana Diplódia malorum 100/1 Diplódia rosulata CBS 121862TDiplodia piri93/0,98 CPC 29891Diplodia piri CBS 125,37Diplodia mutila CBS 255,79Diplodia mutila CBS 112553Diplodia mutila 75/- CBS 120834Diplodia mutila Diplodia mutila CBS 136015Diplodia mutila CBS 136016Diplodia mutila 70/1 CBS 136017Diplodia mutila CBS 112875Diplodia mutila 83/0,98 CBS 136014Diplodia mutila MFLU 18-2214Diplodia magnoliigena CBS124132 CBS124133 CBS124131 B0032 CBS 138652 CBS 132777 CBS 132778 CBS 132779 CBS 132841 70/- Diplódia subglobosa 86/1 Diplódia neojuniperi 94/1 100/1 Diplódia agrifolia 0,006 Figura 2(cont.) W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 69 CBS 168,87 CBS 261,85 CBS 120693 CBS 121027 CBS 684,79 CBS 120691 CBS 120692 CBS 124135 CBS124136 CBS 124254 CBS 418,64 CBS 112547 CBS 112549 CBS 112071 94/0.95 CBS 112073 Robô 08 CAA 499 CBS 112551 UCROK 946 CAA 691 CBS112548 CBS112550 CBS 112552 CBS 112072 CBS 112074 UCROK 1482 80/1 100/1 Diplodia cupressi 86/1 100/1 Diplódia bulgarica 71/1 91/1 Diplódia tsugae Diplodia cortícola 70/- 100/1 5x 100/1 CBS 133852 CBS 133853 Diplodia quercívora B 36 B 37 CBS119935 Dg1 CBS 163,33 CBS 211.25 CBS 212.25 CBS 213,25 CBS 678,88 UCD 1275Então 96/1 -/1 Diplodia gallae - /0,90 79/1 65/1 Diplódiosp. 1 100/1 MFLU 17-2769 CBS 131681 CBS 164,96Lasiodiplodia theobromae Diplodia arengae Diplodia afrocarpi,sp. novembro. 5x 0,006 Figura 2 (cont.) 70 Personônia – Volume 46, 2021 89/1 CPC 30616Dothiorella itálica CPC 33887Dothiorella itálica CBS 122805Dothiorella itálica CBS 122806Dothiorella itálica CPC 35506Dothiorella itálica CPC35540Dothiorella itálica CBS 115038Dothiorella itálica CBS 910.73Dothiorella itálica MFLUCC 17-0951Dothiorella itálica CBS 128309Dothiorella americana CBS128310Dothiorella americana CBS 164,33Dothiorella sarmentorum CPC 31043Dothiorella sarmentorum IMI 63581bDothiorella sarmentorum 89/1 UCR-DI3 PD257 CBS 115036 CBS 115037 CBS 130984 CBS 113189 CBS 115035 CBS 115039 CBS 115041 CBS115040 54/- 79/0,99 Dothiorella Ibérica UCD1448SLO(Botryosphaeria iberica) CBS 121001(Botryosphaeria iberica)93/0,99 CBS 133500 UCROK 1396 UCROK 1227 CBS 135622 CBS 135623 CBS 135847 CPC 30972 CPC 33923 MFLUCC 13-0497 CPC 30976 CPC 31033 CBS 124716 CBS 188,87 CBS 140349 CPC 30614 DAR 78992 CBS 124718 CBS 124719 CBS 134886 CBS 134888 MFLUCC 17-0242 CBS124720 CBS 124721 CBS 134885 CBS 134887 CBS 119635 CBS 141587 98/0,99 Dothiorella symphoricarpicola 100/1 Dothiorella omnivora 87/0,96 98/1 51/- Dothiorella vidmadera Dothiorella sempervirentis100/1 87/- Dothiorella guttulata 87/- Dothiorella parva 93/99 100/1 Dothiorella californica CBS 140852Dothiorella eriobotryae 86/1 CBS 145976Dothiorella rhamni MFLUCC 14-0902Dothiorella rhamni 89/1 Dothiorella eriobotryae CBS 124723 CBS 124722 Dothiorella prunicola Dothiorella irânica 0,03 Figura 3Árvore filogenética deDothiorellaresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1ebanheira2alinhamento de sequência. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nosnós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas em audaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaNeofusicoccum luteum(CBS 121482). Do th io re lla sa rm en to ru m W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 71 96/-WA10NO03Dothiorella westralis 57/- DAR 80529Dothiorella westralis CBS117008Dothiorella vitícola CBS117007Dothiorella vitícola CBS117009Dothiorella vitícola CPC 33136Dothiorella vitícola CPC33257Dothiorella vitícola CMW37930(Spencermartinsia vitícola) CMW37931(Spencermartinsia vitícola) CMW37933(Spencermartinsia vitícola) CBS 112869(Diplódiosp.) CBS117006(Botryosphaeria vitícola) CBS 120999(Dothiorella plurivora) 98/1 Dothiorella vitícola - /1 91/- 99/- 72/0,96 68/- HNXX 032 KUMCC 18-0137 CBS 124724 Dothiorella acericola Dothiorella plurivora CBS121760Dothiorella rosulata CBS 121761Dothiorella rosulata CBS 124726Dothiorella mangiferica CBS 124727Dothiorella mangiferica 86/0,93 100/0,99 92/0,99 Dothiorella mangiferica 92/0,92 98/1 CBS 130415 CBS 124728 CBS 124729 CGMCC3.17999 CGMCC 3.18000 CFCC51563 CFCC51564 CGMCC3.18001 Dothiorella citricola 100/1 95/- Dothiorella yunnana 94/0,94 Dothiorella magnoliae Dothiorella alpina81/90 63/0,94 98/0,95 100/1 CBS 122067 CBS 122068 CBS 122066 Dothiorella longicollis 90/0,99 Dothiorella diospiricola sp. novembro. 100/1 CPC 34653(Dothiorellasp.) CBS 130411 CBS 130412 MFLUCC 18-0232 MFLUCC 18-0382 74/1 Dothiorella brevicollis 97/1 Dothiorella lampangensis Dothiorella tectonae 100/1 100/1 CBS 124730Dothiorella striata CBS 124731Dothiorella striata DAR 80992Dothiorella neclivorem 100/1 Dothiorella striata89/1 100/1 CBS 124908 CPC 29689 DAR 81012 Dothiorella uruguayensis Dothiorella vineagemmae100/1 CBS 121765Dothiorella oblonga CBS 121766Dothiorella oblonga CBS 130414Dothiorella oblonga CBS 121764Dothiorella dulcispinae CBS 130413Dothiorella dulcispinae 69/- 98/1 Dothiorella dulcispinae 100/1 52/- CBS 133991 CBS 121783 CBS 121784 CBS 121785 MUCC 505 MUCC 509 CBS 130404 CBS125445 CBS 120688 CBS 120689 CBS 120690 100/1CBS 121763 CBS121878 CBS 141295 CBS 138855 CBS 140005 Dothiorella tailândia 100/1 Dothiorellasp. 1100/1 96/- Dothiorella moneti 100/1 Dothiorella santali Dothiorella pretoriensis Dothiorella tripsita 65/- 100/1 Dothiorella casuarinae 98/1 Dothiorella capriamissi Dothiorella acacicola 89/0,94 100/1 Dothiorella ulmacea CBS 141414 CBS 121482Neofusicoccum luteum 0,03 Figura 3(cont.) 72 Personônia – Volume 46, 2021 CMW33252Lasiodiplodia iraniensis 84/1 CMW33311Lasiodiplodia iraniensis CMW33333Lasiodiplodia iraniensis 80/1 CMW35881Lasiodiplodia iraniensis CBS 124710Lasiodiplodia iraniensis Lasiodiplodia iraniensis 86/0,96 CBS111005Lasiodiplodia jatrofólica 94/0,98 87/0,97 CBS111008Lasiodiplodia jatrofólica CMM 3610Lasiodiplodia jatrofólica 93/0.95 CBS 124711Lasiodiplodia jatrofólica CBS 138653Lasiodiplodia tailândia 89/0,98 95/0,95 92/0,98 - /0,92 CBS 138760Lasiodiplodia tailândia MFLUCC 18-0244Lasiodiplodia swieteniae Lasiodiplodia tailândia CGMCC3.17975Lasiodiplodia hialina CGMCC3.18383Lasiodiplodia hialina CBS 136434(Lasiodiplódiaesp.) Lasiodiplodia acaciae sp. novembro. Lasiodiplodia plurivora98/1 CBS121103 STE-U 5803 CBS117454 CMM 1277 Lasiodiplodia ponta 100/1 63/1 CBS 116459 CBS 116460 CBS 130991 CBS 304,79 CGMCC3.18047 CBS 121772 CBS 121773 CFCC51997 CFCC51998 92/1 Lasiodiplodia pseudotheobromae 76/1 100/1 Lasiodiplodia cinnamomi 93/0,98 CBS 134112Lasiodiplodia lignicola 81/0,94 80/- 80/1 CGMCC3.18449Lasiodiplodia tenuiconidia CBS127106Lasiodiplodia sterculiae 87/0,99 100/1 Lasiodiplodia lignicolaCBS 342,78Lasiodiplodia sterculiae CGMCC3.18044Lasiodiplodia chinensis 62/0,96 CGMCC3.18061Lasiodiplodia chinensis 58/0,94 CGMCC3.18485 CGMCC3.18477 Microconídios Lasiodiplodia Lasiodiplodia tropica 100/1 52/0,99 CBS 124704Lasiodiplodia gilanensis CBS 124705Lasiodiplodia gilanensis 100/0,93 - /0,96 Lasiodiplodia gilanensisCBS 128311Lasiodiplodia missouriana CBS 128312Lasiodiplodia missouriana 100/1 CBS 128313 CBS 128314 CBS 137783 CBS 137784 CBS 124060 Lasiodiplodia vitícola- /0,96 98/- Lasiodiplodia mediterrânea Lasiodiplodia vitis - /0,96 0,01 Figura 4Árvore filogenética deLasiodiplódiaresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1,banheira2erpb2alinhamento de sequência. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas em audaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. As espécies em blocos laranja são sinônimos potenciais das espécies sob as quais esses blocos são mostrados. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaNeodeightonia fenicum (CBS 122528). W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 73 CBS115447 CBS 120395 CBS 129754 CBS 129756 CBS 129758 CMM 4015 CMW35884 97/1 Lasiodiplodia brasiliensis CBS 164,96Lasiodiplodia theobromae CBS 306,58Lasiodiplodia theobromae 66/0,94 CPC 27690Lasiodiplodia theobromae CPC 28505Lasiodiplodia theobromae CBS111530Lasiodiplodia theobromae 96/1 CBS 130989Lasiodiplodia theobromae Lasiodiplodia theobromae CBS 138868Lasiodiplodia theobromae CBS 139728Lasiodiplodia theobromae CBS 214,50Lasiodiplodia theobromae 91/1 CGMCC3.18464Lasiodiplodia laosensis CGMCC3.18473Lasiodiplodia laosensis 93/1 BOT29Lasiodiplodia egyptiacae 94/1 CBS 130992Lasiodiplodia egyptiacae Lasiodiplodia laeliocattleyae CBS 167,28Lasiodiplodia laeliocattleyae 56/0,96 CBS 124708 CBS 124709 CBS 133510 CBS 168,28 CBS 139638 CBS 139669 CMW42480 CMM3833 CMM 4564 CMM 4565 CMM3872 CMM 4046 100/1CMW41467 LAS199 Lasiodiplodia hormozganensis 100/1 Lasiodiplodia bruguierae - /0,94 Lasiodiplodia macrospora Lasiodiplodia gravistriata 99/1 92/0,90 100/1 - /0,96 Lasiodiplodia subglobosa Lasiodiplodia aviceniae 0,01 Figura 4(cont.) 74 Personônia – Volume 46, 2021 89/0,91 CBS 124925Lasiodiplodia maajangana CBS 124926Lasiodiplodia maajangana - /0,95 74/- CMW33261Lasiodiplodia maajangana MFLUCC 16-0265Lasiodiplodia pandanicola91/0,96 CMM 1325Lasiodiplodia caatinguensis 51/0,93 IBL 381Lasiodiplodia caatinguensis CBS 190,73Lasiodiplodia caatinguensis CBS 112874(Lasiodiplodia theobromae) 74/1 CBS 125266(Lasiodiplódiasp.) BL184Lasiodiplodia exigua 98/1 CBS 137785Lasiodiplodia exigua 93/0,99 CMW33323Lasiodiplodia macroconídios Lasiodiplodia maajangana CMW36172Lasiodiplodia macroconídios CBS 125262Lasiodiplodia irregularis CMW26699Lasiodiplodia irregularis CBS 125267Lasiodiplodia irregularis CBS 138554Lasiodiplodia irregularis CGMCC3.18468Lasiodiplodia irregularis 73/0,96 LAS16Lasiodiplódiasp. CMW26710Lasiodiplodia irregularis CGMCC3.18479Lasiodiplodia macroconídios 81/- CGMCC3.18456Lasiodiplodia curvata CGMCC3.18476Lasiodiplodia curvata CBS 136925 CBS 136926 CMM 3609 CMW33268 CMW33350 CMW36231 CBS 456,78 CBS 494,78 82/0,91 Lasiodiplodia euphorbiaceicola 76/0,99 96/0,99 99/0,99 Lasiodiplodia parva CBS 124706Lasiodiplodia citricola 72/0,99 CBS 124707Lasiodiplodia citricola ALG111Lasiodiplodia mitidjana Lasiodiplodia citricola ALG39Lasiodiplodia mitidjana 81/1 CGMCC3.19022Lasiodiplodia vaccinii CGMCC3.18471 CBS 115812 CBS 116355 CBS 138654 Lasiodiplodia aquilariae 69/- 100/1 Lasiodiplodia gonubiensis 0,01 Figura 4(cont.) W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 75 98/1 CBS 121770Lasiodiplodia piriformeCBS 121771Lasiodiplodia piriforme CBS 118741Lasiodiplodia crassispora 71/- CBS 125626Lasiodiplodia crassispora CMW33262Lasiodiplodia crassispora 10x Lasiodiplodia crassispora 100/1 CMW33266Lasiodiplodia crassispora CBS 125627Lasiodiplodia crassispora CMM 4583Lasiodiplodia crassispora 80/- 88/0,98 CMM 4585Lasiodiplodia crassispora CMW 13488Lasiodiplodia crassispora CBS 122519 CBS 138289 CBS 138290 CBS 138291 CBS 122065 100/- Lasiodiplodia margaritacea 99/1 MFLUCC 19-0219.1 GUCC 9719.2 GUCC 9719.3 CBS 120512 RB07 CBS118740 WAC12536 CBS 118739 CBS 129755 CBS 129757 CBS 129759 CMW 13512 92/0,94 Lasiodiplodia syzygii 100/1 99/1 100/1 Lasiodiplodia rubropurpurea 99/1 100/1 Lasiodiplodia venezuelensis CBS 122528Neodeightonia fenicum 0,01 (cont.)Figura 4 76 Personônia – Volume 46, 2021 CPC 33052 CPC 32017 CPC 31418 CPC 29026 CPC 29004 CPC 28892 CPC 28886 CBS 130996 CBS 115185 CBS113220 CBS 113077 CBS 110865 CPC 32259 CPC 29050 CPC 29036 CPC 28980 CPC 28205 CBS 125786 CBS 119133 CBS 119132 CBS115502 CBS 113521 CBS 113219 CBS 110851 CMW6837 CBS 113218 CBS 112877 CPC32263 CPC 32013 CPC 31414 64/0,95 Neofusicoccum australe 91/1 99/1 96/0,91 CPC 35437Neofusicoccum luteum CPC 35429Neofusicoccum luteum CPC 32641Neofusicoccum luteum CPC32388Neofusicoccum luteum CPC 32279Neofusicoccum luteum 95/1 CPC32247Neofusicoccum luteum CPC32245Neofusicoccum luteum CBS 562,92Neofusicoccum luteum CBS 133502Neofusicoccum luteum 100/1 CBS 118842Neofusicoccum luteum Neofusicoccum luteumCBS 110862Neofusicoccum luteum 75/0,98 CPC 32647Neofusicoccum mangroviorum CBS111492Neofusicoccum mangroviorum CPC32580Neofusicoccum mangroviorum CPC32482Neofusicoccum mangroviorum CMW42481Neofusicoccum mangroviorum 100/1 CMW41365Neofusicoccum mangroviorum CBS140740Neofusicoccum mangroviorum CBS 140739Neofusicoccum mangroviorum CBS 140738Neofusicoccum mangroviorum 0,02 Figura 5Árvore filogenética deNeofusicoccumresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1,banheira2erpb2alinhamento de sequência. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudacioso sobrescrito. A árvore estava enraizadaBotryosphaeria dothidea(CBS 115476). W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 77 CMW41469 CMW41228 CBS 139676 CBS 139675 CBS 143481 CBS 143480 CPC 35288 CBS 145873 CPC32578 CPC 35286 CPC 28950 CBS 110866 CBS121116 CPC 29767 CBS 189,28 CBS 139666 CBS 133326 CBS 118839 CBS 110864 CBS 122813 100/1 901/09 Neofusicoccum lumnitzerae 87/0,99 Neofusicoccum variável 97/1 Neofusicoccum rapaneae,sp. novembro.100/1 84/0,98 71/0,99 100/1 Neofusicoccum stellenboschiana Neofusicoccum criptoaustrale CBS 130998Neofusicoccum vitifusiforme 59/0,99 CBS 130993Neofusicoccum vitifusiforme CBS 121562Neofusicoccum vitifusiforme 81/- CBS 125790Neofusicoccum vitifusiforme 67/1 CBS 125789Neofusicoccum vitifusiforme Neofusicoccum vitifusiformeCBS121113Neofusicoccum vitifusiforme CBS 110887Neofusicoccum vitifusiforme 98/1 CB110880Neofusicoccum vitifusiforme CBS121112Neofusicoccum pruni CBS 120081Neofusicoccum corticosae CBS 115481 CBS 115480 CBS 113079 CBS 115499 CBS 113076 CBS 113071 CBS 113058 CBS 114176 CBS111200 CPC 29008 CPC 28239 CBS 115198 CBS 115177 CBS 122812 CBS 122811 CBS 131680 CBS 131679 100/1 74/0,99 68/0,98 Neofusicoccum protearum 88/1 52/- 100/1 100/1 94/1 901/09 100/0,99 Neofusicoccum ursorum 55/- CBS 125264 CBS 125263 97/1 Neofusicoccum terminaliae 98/1 CBS 113084Neofusicoccum pistaciarum CBS 113083Neofusicoccum pistaciarum Neofusicoccum mediterraneumCBS 113089Neofusicoccum pistaciicola 100/1 100/1 CBS 121718Neofusicoccum mediterraneum CERC 1948 CERC 1947 Neofusicoccum hellenicum Neofusicoccum pistaciae Neofusicoccum viticlavatum 83/1 CBS 595,76 CBS 112977 CBS 112878 0,02 Figura 5 (cont.) 78 Personônia – Volume 46, 2021 BOT136Neofusicoccum parvum CBS 113072Neofusicoccum parvum CBS 117923Neofusicoccum parvum CAA322 Neofusicoccum algerienseNeofusicoccum parvum PE32Neofusicoccum italicumNeofusicoccum parvum CBS 719,85 Neofusicoccum italicumNeofusicoccum parvum MFLUCC 15-0900 Neofusicoccum italicumNeofusicoccum parvum CBS119937Neofusicoccum algerienseNeofusicoccum parvum CBS 137504Neofusicoccum algeriense Neofusicoccum parvum CAA 322Neofusicoccum algeriense Neofusicoccum parvum CMW 14087Neofusicoccum pandanicola Neofusicoccum parvum CERC 3509Neofusicoccum pandanicola Neofusicoccum parvum CCF109Neofusicoccum pandanicola Neofusicoccum parvum CBS 118832Neofusicoccum pandanicola Neofusicoccum parvum KUMCC 17-0184Neofusicoccum pandanicola Neofusicoccum parvum 57/0,99 CMW 9081Neofusicoccum parvum CMW 9080Neofusicoccum parvum CPC 34760Neofusicoccum parvum CBS 371,79Neofusicoccum parvum CBS 133503Neofusicoccum parvum CBS 130995Neofusicoccum parvum CBS 130994Neofusicoccum parvum CBS 139673Neofusicoccum parvum CBS 139672Neofusicoccum parvum CBS 139671Neofusicoccum parvum CPC 35861Neofusicoccum parvum CPC 34761Neofusicoccum parvum CPC32275 Neofusicoccum parvum CBS 161,29 Neofusicoccum parvum CBS 140887 Neofusicoccum parvum CBS 112931 Neofusicoccum parvum CBS 112879 Neofusicoccum parvum CMW 9071 Neofusicoccum parvum EFA 470 Neofusicoccum parvum 66/0,98 Neofusicoccum parvumcomplexo de espécies (ver também Fig. 6) - /1 BOT 113Neofusicoccum parvum CBS 140889Neofusicoccum italicumNeofusicoccum parvum 88/1 CERC 2973Neofusicoccum hongkongense CERC 2967Neofusicoccum hongkongense CERC 2968Neofusicoccum hongkongense 85/1 CBS 131678Neofusicoccum podocarpi CBS 131677Neofusicoccum podocarpi CPC32265Neofusicoccum podocarpi CBS 115065Neofusicoccum podocarpi NpAaBR Neofusicoccum podocarpi 67/0,97 97/1 0,02 Figura 5(cont.) W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 79 99/0,99 96/1 CBS 123646Neofusicoccum umdonicola CBS 123645Neofusicoccum umdonicola 53/0,94 CBS 118822Neofusicoccum umdonicola 87/- 79/1 CPC 29626Neofusicoccum umdonicola CPC 29625Neofusicoccum batangarum 63/0,97 CPC 29624Neofusicoccum batangarum CBS 124924Neofusicoccum batangarum Neofusicoccum ribis CBS 124923Neofusicoccum batangarum 60/1 CBS 114306Neofusicoccum ribis CBS 121.26Neofusicoccum ribis CBS115475Neofusicoccum ribis CBS 122553(Neofusicoccum ribis) CBS 117915(Botryosphaeria parva) MUCC 286 CPC 32162 CBS 519,74 CBS128008 CERC 3415 CGMCC3.18752 CBS 123635 CBS 123634 CBS 123641 CBS 123639 CBS 115184 CMM 1338 CMM 1285 CGMCC3.18315 CBS 129518 CGMCC3.18311 CGMCC3.18310 72/0,98 Neofusicoccum occulatum 99/1 Neofusicoccum sinoeucalypti Neofusicoccum cordaticola100/1 - /1 100/1 Neofusicoccum kgambonambiense 67/- 99/0,97 Neofusicoccum brasiliense Neofusicoccum sinense Neofusicoccum grevilleae- /1 89/1 Neofusicoccum illicii 100/1 CBS 117453Neofusicoccum andinum 100/1 CBS117452Neofusicoccum andinum 75/1 Neofusicoccum arbutiCBS 117090Neofusicoccum arbuti 100/1 CBS 116131Neofusicoccum arbuti CBS 133501 PD301 CBS 126655 CBS 118223 Neofusicoccum nonquaesitum Neofusicoccum macroclavatum 100/1 79/0,97 93/1 CBS 115791 CBS 115768 CMW 10126 CPC 29338 CBS 145975 CBS115770 CBS 115767 CBS 115766 CBS 115679 CGMCC3.18751 CGMCC 3.18750 CBS 118821 CBS 118532 CBS 118531 MUCC 510 CBS 116,75 CBS 113714 Neofusicoccum eucalyptorum 100/1 100/1 8x 100/1 100/1 Neofusicoccum eucalypticola 97/1 100/1 100/1 Neofusicoccum microconidium 96/1 Neofusicoccum mangiferae Neofusicoccum pennatisporum Neofusicoccum buxi 98/0,98 100/1 CBS 115476Botryosphaeria dothidea 8x 0,02 Figura 5 (cont.) 80 Personônia – Volume 46, 2021 CPC 34760(Neofusicoccumsp.) CBS 371,79Dothiorella reniformisCBS 133503(Neofusicoccum parvum) CBS 130995(Neofusicoccum parvum) CBS 130994(Neofusicoccumsp.)CMW 9071(Neofusicoccum parvum) EFA 470(Neofusicoccum parvum) CMW 9081Neofusicoccum parvum CMW 9080Neofusicoccum parvum CMW 14087Neofusicoccum pandanicola CERC 3509Neofusicoccum pandanicola CCF 109Neofusicoccum pandanicola CBS 118832Neofusicoccum pandanicola KUMCC 17-0184Neofusicoccum pandanicolaBOT136(Neofusicoccum parvum) CBS 113072(Botryosphaeriaesp.)CBS 117923(Botryosphaeria parva) 80/0.97 51/- CBS 140889Neofusicoccum italicum PE32Neofusicoccum italicum CBS 719,85Neofusicoccum italicum MFLUCC 15-0900Neofusicoccum italicum Neofusicoccum parvum CBS119937Neofusicoccum algeriense CBS 137504Neofusicoccum algeriense CAA 322Neofusicoccum algeriense CBS 139673(Neofusicoccumsp.) CBS 139672(Neofusicoccumsp.) CBS 139671(Neofusicoccumsp.)CBS 112931(Neofusicoccum parvum) CBS 112879(Neofusicoccum parvum) CPC 35861(Neofusicoccumsp.) CPC 34761(Neofusicoccumsp.) CPC32275(Neofusicoccumsp.) CBS 161,29(Neofusicoccum ribis) CBS 140887(Neofusicoccum parvum) BOT 113(Neofusicoccum parvum) 58/- 99/00,99 92/0,96 CBS 123646Neofusicoccum umdonicola CBS 123645Neofusicoccum umdonicola CBS 118822Neofusicoccum umdonicola CPC 29626Neofusicoccum umdonicola CPC 29625Neofusicoccum batangarum CPC 29624Neofusicoccum batangarum CBS 124924Neofusicoccum batangarum CBS 124923Neofusicoccum batangarum CBS 121.26Neofusicoccum ribis CBS115475Neofusicoccum ribis CBS 114306Neofusicoccum ribis CBS 117915(Botryosphaeria parva) CBS 122553(Neofusicoccum ribis) 51/- 78/1 66/0,97 Neofusicoccum ribis 65/0,98 57/- 86/0,99 CGMCC3.18315 Neofusicoccum sinense Neofusicoccum occulatum MUCC 286 CPC 32162 CBS 519,74 CBS128008 CGMCC3.18311 CGMCC3.18310 CERC 3415 CERC 2005 CBS 123641 CBS 123639 CBS 115184 CMM 1338 CMM 1285 CBS 123635 CBS 123634 65/0.94 94/0,91 8x Neofusicoccum illicii Neofusicoccum sinoeucalypti 99/1 69/0,93 95/1 Neofusicoccum kgambonambiense 100/1 100/1 Neofusicoccum brasiliense Neofusicoccum cordaticola Neofusicoccum grevilleaeCBS 129518 90/1 CBS 131678 CBS 131677 CPC32265 CBS 115065 NpAaBR CERC 2973 CERC 2967 CERC 2968 CBS 115476Botryosphaeria dothidea 66/0,95 96/1 Neofusicoccum podocarpi,sp. novembro. Neofusicoccum hongkongense 98/0,99 8x Árvore filogenética deNeofusicoccum parvumcomplexo de espécies resultante de uma análise Bayesiana do ITS combinado,tef1,banheira2erpb2seqüência 0,005 Figura 6 alinhamento. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaBotryosphaeria dothidea(CBS 115476). W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 81 CBS 125611 CBS 125617 CBS 125619 COUFAL 0146 COUFAL 0144 278 DE 1606 DP 104 2-D79 CBS 125608 CBS125610 CBS 499,66 CBS 662,77 COUFAL 0145 CMM 3649 CMM 3616 CMM 3607 CMM 3566 3-F68 63/0,98 3-F67 282 2-D61 CBS 125609 9-F36 7-H09 5-B45 2-D77 2-D76 2-D56 2-D54 2-D53 10-J86 10-J83 10-J81 10-J79 10-H59 10-B10 10-B08 10-B05 Neoscytalidium dimidiatum MFLUCC 12-0533Neoscytalidium orquídeacearumCBS 122070Neoscytalidium novaehollandiae - /1 CBS 122071Neoscytalidium novaehollandiae CBS 122072Neoscytalidium novaehollandiae CBS122610Neoscytalidium novaehollandiae - /0,98 CBS 125695 7E63 7E62 7E61 CBS 125622 CBS125808 CBS 601,85 CBS 137,77 CBS 312,90 99/1 97/1 1/- 69/1 PD105 3-F70 CBS 125623 CBS 145,78 CBS 251,49 PD103 3-F71 3-F69 2-D57 2-D60 Couve4-C Arp2-D CBS117451Eucalipto Cophinforma 10x 88/- Neoscitalidiumsp. 1 10x 0,002 Figura 7 valores de suporte de bootstrap (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaBotryosphaeria dothidea(CBS 117451). Árvore filogenética deNeoscitalidiumresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1,banheira2alinhamento de sequência. Probabilidade máxima 82 Personônia – Volume 46, 2021 84/- CBS 114123 CBS 174,63 CBS 123,30 CBS 138854Phaeobotryon ulmi,sp. novembro. PB 11f CMH 299 94-13 100/1CBS 122980 CPC 12442 CAA 797 CAA 798 CAA 799 CPC 33384 CPC 33388 CPC34752 MFLUCC 15-0436 100/1 CBS 124700 CBS 124701 CFCC52449 CFCC52450 CFCC53773 CFCC53774 CFCC53776 CFCC53775 CFCC 89662 CFCC 89663 69/- 100/1 Phaeobotryon mamane 100/1 Phaeobotryon negundinis Feobotryon 63/0,94 Phaeobotryon cupressi Phaeobotryon rhoinum 100/1 100/1 Phaeobotryon aplospora 100/1 70/- 100/1 Phaeobotryon rhois 100/- 82/1 CBS 124698 CBS 124699 MFLUCC 14-1190 MFLUCC 14-1164 CBS 137786 Barriopsis iraniana 100/1 Barriopsis tailandica Barriopsis archontophoenicis Barriopsis tectonae Barriopsis99/1 100/1 CBS 174,26 CBS 100163 CBS 122526 CBS 122527 CBS 186,97 CPC 33386 CPC 35421 CPC35525 CBS 110496 CBS 110574 CBS 133993 MFLUCC 11-0654 ICMP16812 ICMP16818 CBS 136409 CBS 138896 CBS 136410 Barriopsis stevensiana 61/- 100/1 Sphaeropsis visci 93/0,99 Sphaeropsis 100/1 100/1 Sphaeropsis porosa 100/1 100/1 Sphaeropsis eucaliptocola Sphaeropsis citrigena 100/1 78/0,95 Alanphillipsia aloetica Alanphillipsia aloeicola Aloés Alanphillipsia Alanphillipsia aloeigena Alanphillipsia euphorbiae 52/0,93 Alanphillipsia 97/1 CBS 136408 CBS 136411 CBS 121775 100/1CBS 121776 99/1 Oblongocollomyces variabilis Oblongocol- lomyces CBS121774 CBS 164,96Lasiodiplodia theobromae 0,03 Figura 8 ITS, LSU etef1alinhamento de sequência. Valores de suporte de bootstrap de máxima verossimilhança (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaEucalipto Cophinforma(CBS 117451). Árvore filogenética deFeobotryon,Alanphillipsia,Barriopsis,OblongocollomyceseSphaeropsisresultante de uma análise bayesiana do combinado W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 83 MFLUCC 17-2533 CBS 138655 CBS 122062 CBS 122063 CBS 122064 CBS 115453 CBS 115594 CBS 124936 CBS 124937 CBS 124938 CPC 29627 CBS 122058 CBS 122059 CBS 122060 CBS 122061 CMW48027 CMW48028 CMW48030 CBS 122057 CBS 122053 CBS 122054 CBS 122055 CBS 122056 CBS 138362 CBS 117448 99/1CBS117449 CPC34655 CBS 124939 CBS124940 CBS124720Dothiorella sarmentorum Pseudofusicoccum calophylli Pseudofusicoccum artocarpi Pseudofusicoccum ardesiacum 100/1 78/- Pseudofusicoccum violaceum 92/1 Pseudofusicoccum kimberleyense 86/1 97/- 100/1 Pseudofusicoccum africanum 5x 100/1 Pseudofusicoccum adansoniae 86/0,97 Pseudofusicoccum stromaticum 61/- Pseudofusicoccum olivaceum 5x 0,03 Figura 9 valores de suporte de bootstrap (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. A árvore estava enraizadaDothiorella parva(CBS124720). Árvore filogenética dePseudofusicoccumresultantede uma análise bayesiana do ITS, LSU,tef1alinhamento de sequência. Probabilidade máxima 84 Personônia – Volume 46, 2021 CBS 122693 CBS 122694 CBS 125546 Saccharata capensis Saccharata leucospermi Saccharata intermediária 61/- 95/1 97/1 CBS 111787Saccharata hawaiiensis CBS114570Saccharata hawaiiensis Saccharata hawaiiensis 99/1 CBS 114569Saccharata protearum CBS 115490 CBS 119218 CBS121406 CBS121410 CBS 115384 CBS 115498 CBS121422 CBS 115206 CBS 116174 CBS 123537 - /0,99 91/0,99 98/1 Saccharata proteae Saccharata kirstenboschensis Saccharata eucalipto Saccharata eucaliptorum Saccharata hakeigena CBS 140665 CBS 142122 CBS143405 CBS142121 CBS 142167 CBS 142168 CBS 142169 CBS 143167 CPC 32607 100/1 100/1 100/1 100/1 Saccharata hakeae Saccharata hakeiphila,sp. novembro. 3x 98/1 Acácia Saccharata CBS29230 CBS 142125 CPC 29264 CBS 142124 100/1CBS 142172 CBS 142173 CBS 142120 CBS 142137 CBS 143408 CBS 142138 CBS 142171 CBS 142123 CPC 29228 CBS 145998 CPC 29521 CBS 732,79Aplosporella hesperidica 100/1 Saccharata petrophilicola 88/1 71/- Saccharata hakeicola 81/0,94 Saccharata daviesiae Saccharata Banksiae Saccharata epacridis84/0,99 Petrófilos Saccharata 100/1 Saccharata lambertiae - /0,94 - /0,97 85/0,95 Saccharata grevilleae,sp. novembro. 3x 0,06 Figura 10 valores de suporte de bootstrap (ML-BS > 50%) e probabilidades posteriores bayesianas (PP > 0,90) são mostrados nos nós. Cepas do tipo Ex e novidades taxonômicas são indicadas emaudaciosoa fonte e as espécies são delimitadas por blocos coloridos. Os últimos nomes de espécies aceitos, ou nomes de espécies funcionais entre parênteses, são mostrados em sobrescrito onde as espécies foram sinonimizadas neste estudo; os nomes das espécies nas quais o nome do clado se baseia estão emaudaciososobrescrito. A árvore estava enraizadaAplosporella hesperidiaca(CBS732.79). Árvore filogenética deSaccharataresultante de uma análise bayesiana do ITS combinado,tef1erpb2alinhamento de sequência. Probabilidade máxima W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 85 foram avaliadas espécies e valores de suporte para o agrupamento. Para as análises de parcimônia, a primeira árvore igualmente mais parcimoniosa foi usada como referência quando foram obtidas múltiplas árvores igualmente mais parcimoniosas (árvores não mostradas, disponíveis no TreeBASE no estudo S27596). Esses resultados são discutidos nas notas das espécies e as estatísticas das árvores são apresentadas na Tabela S2. As árvores Bayesianas são mostradas na Fig. S1–S10 e também estão disponíveis no TreeBASE no estudo S27596. Para determinar a similaridade de sequência, pesquisas blast2 foram realizadas no site blast do NCBI usando a sequência de consulta (da cepa ex-type da novidade proposta) contra todas as outras sequências no alinhamento para um determinado gene em cada alinhamento de gênero após a remoção de todas as lacunas em o alinhamento. Espécies deBotryosphaeriaceaeforam reconhecidos com base nos seguintes critérios: i Árvores filogenéticas foram construídas para genes individuais e alinhamentos concatenados para identificar linhagens distintas e verificar conflitos de posição na árvore; ii Por linhagem ou espécie previamente aceita nessa linhagem, uma matriz de distância entre a cepa do tipo ex ou uma cepa representativa na ausência de uma sequência para a cepa do tipo ex foi construída usando Geneious v. 11.1.5 (ambos mostrando semelhança de sequência de pares, bem como número de diferenças) e pesquisas blast2 também foram usados no site de explosão do NCBI (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) para comparações de sequências. Os valores na matriz de distância foram coloridos condicionalmente no Microsoft Excel para dois cenários: No primeiro cenário, todos os valores de similaridade superiores a 99,4% (simula uma situação de 'critérios estritos' onde um pequeno número de diferenças de nucleotídeos devido a erros de sequenciamento são permitidos, em neste caso, três ou quatro nucleotídeos em 600 nucleotídeos) foram coloridos em vermelho e as espécies que coloriram vermelho para todos os loci disponíveis foram consideradas sinônimos; no segundo cenário, os valores de similaridade inferiores a 99% foram coloridos em verde e os superiores a 99% foram coloridos em vermelho. Qualquer espécie que tivesse células verdes para todos os genes disponíveis foi considerada distinta. Finalmente, todas as espécies restantes (ou seja, aquelas com valores verdes e vermelhos dependendo do gene) foram novamente examinadas observando-se a sua posição nas diferentes árvores, as suas diferenças de nucleótidos e a publicação original para determinar a base sobre a qual os autores descreveram o espécies. Em muitos casos, descobriu-se que apenas um gene, na maioria das vezes tef1, foi responsável pela separação de determinada espécie de seus parentes e, nesses casos, a espécie foi aceita provisoriamente. Os valores de apoio provaram ser um critério fraco no presente estudo, uma vez que muitos dos clados apresentaram pouco ou pouco apoio. Isto deve-se em parte à falta de dados presentes no conjunto de dados, uma vez que nem todos os loci estavam disponíveis para todas as espécies, mas também em parte devido à semelhança genética extremamente próxima de muitas das espécies incluídas. Polimorfismos fixos de nucleotídeo único (SNPs) também nem sempre eram úteis, pois o número de sequências disponíveis para uma determinada espécie variava. Em complexos de espécies estreitamente relacionados nem sempre foi possível atribuir posições fixas de nucleotídeos inequívocas, exceto talvez para os dois vizinhos mais próximos. Morfologia Para induzir a esporulação, os isolados foram inoculados em agulhas de pinheiro estéreis (Smith et al. 1996) e colocados em ágar sintético pobre em nutrientes (PNA), ágar dextrose de batata a 2% (PDA), MEA, ágar de aveia (OA) e incubados a 25°. C sob luz UV próxima por 2–4 semanas (ver Crous et al. 2019 para receitas). As preparações das lâminas foram feitas em ácido láctico transparente. Observações morfológicas de estruturas reprodutivas foram feitas usando um microscópio de dissecação Nikon AZ100 e um microscópio composto Nikon Eclipse 80i com iluminação de contraste de interferência diferencial (DIC), ambos equipados com um microscópio digital colorido de alta definição Nikon DSRi2.m es a 2M od el os d e su bs tit ui çã o ut ili za do s pa ra a ná lis es B ay es ia na s ne st e es tu do . An ál is e Fi gu ra nú m er o N úm er o de em g ru po se qu ên ci as N úm er o de ge ra çõ es N úm er o de ár vo re s us ad as M od el os d e su bs tit ui çã o us ad os pa ra a ná lis es B ay es ia na s1 / N úm er o de p ad rõ es d e si te e xc lu si vo s IS SO É G TR +I /5 5 te f1 G TR +G /9 6 ba nh ei ra 2 H KY +I / 45 LS U rp b2 Bo tr yo sp ha er ia 3 ge ne s Di pl ód io 3 ge ne s Do th io re lla 3 ge ne s La sio di pl ód ia 4 ge ne s N eo fu sic oc cu m 4 ge ne s N eo fu sic oc cu m 4 ge ne s N eo sc ita lid iu m 3 ge ne s Fi gu ra 1 Fi gu ra 2 Fi gu ra 3 Fi gu ra 4 Fi gu ra 5 Fi gu ra 6 Fi gu ra 7 50 25 5. 00 0 38 25 2 17 9 12 2 55 15 00 0 18 20 00 0 82 72 8 27 30 2 G TR +I +G / 12 8 H KY +I +G / 14 1 G TR +I +G / 12 6 – – – – – – – – G TR +G /1 55 G TR +G /1 49 G TR +G /4 9 – H KY +I +G / 13 0 G TR +G /2 13 G TR +I +G / 14 1 14 7 31 80 00 0 47 70 02 SI M +I +G / 75 H KY +I +G / 11 8 G TR +I /9 8 20 7 13 58 50 00 20 37 78 G TR +I +G / 12 8 H KY +G / 17 1 G TR +I +G / 12 7 74 25 20 00 0 37 80 02 G TR +I +G / 52 H KY +G / 72 G TR +I +G / 53 65 47 0. 00 0 70 50 2 F8 1/ 78 H KY +I / 24 F8 1/ 21 Al an ph ill ip sia ,B ar rio ps is, O bl on go co llo m yces , Fe ob ot ry on eS ph ae ro ps is3 g en es Fi gu ra 8 53 94 00 00 14 10 02 SI M +I +G / 11 4 H KY +G /2 42 – H KY +I +G / 59 – Ps eu do fu sic oc cu m 3 ge ne s Fi gu ra 9 29 38 5. 00 0 57 75 2 K8 0+ I / 5 2 H KY +I / 62 G TR +I /3 2 – – Sa cc ha ra ta 3 ge ne s Fi gu ra 1 0 40 62 5. 00 0 93 75 2 G TR +I +G / 16 2 H KY +G / 15 0 – – G TR +G / 29 6 1I TS : r eg iõ es e sp aç ad or as tr an sc rit as in te rn as e g en e 5. 8S n rR N A in te rv en ie nt e; te f1 : g en e do fa to r d e al on ga m en to d e tr ad uç ão p ar ci al 1 -a lfa ;b an he ira 2: g en e pa rc ia l d a be ta -tu bu lin a; L SU : g en e nr RN A 28 S pa rc ia l, su bu ni da de g ra nd e; rp b2 : s eg un da m ai or s ub un id ad e pa rc ia l d a RN A po lim er as e II di rig id a po r D N A. https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi 86 Personônia – Volume 46, 2021 Câmera. Medições de conidiomas, conidióforos e células conidiogênicas foram feitas para determinar os menores e os maiores valores. Para os isolados selecionados como holótipo, foram determinados os comprimentos e larguras de 50 conídios por isolado, e foram feitas 25 medições para os demais isolados de cada táxon. Média (média), desvio padrão (DP), mínimo As medidas (min) e máxima (máx) são apresentadas como (min–) (média–DP)–(média+DP) (–máx). A morfologia das colônias foi caracterizada a partir de culturas cultivadas em MEA, OA e PDA após 1 semana a 25 ° C no escuro, e a cor das colônias foi determinada usando as tabelas de cores de Rayner (1970). Figura 11Botryosphaeria dothidea(CBS 123530). a. Colônia esporulando em PNA; b-c. células conidiogênicas e conídios em desenvolvimento; d. conídios maduros e marrons. — Barra de escala: b = 10 μm, a barra de escala de b aplica-se a b – d. Figura 12Botryosphaeria dothidea(CBS 145971). a. Colônia esporulando em PNA; b-c. células conidiogênicas e conídios em desenvolvimento; d. conídios hialinos; e. conídios septados, pigmentados de marrom. — Barra de escala: b = 10 μm, a barra de escala de b aplica-se a b – e. W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 87 RESULTADOS Isolar CPC 29048. Conidiomaspicnídeo, produzido no PNA, solitário, globoso a ovóide, marrom escuro a preto, até 610 μm de largura, 540 μm de altura, incrustado em tecido agulhado, semiimerso a superficial, unilocular, com ostíolo central.Conidióforos ausente. Células conidiogênicasholoblástica, discreta, hialina, cilíndrica a lageniforme, fialídica com espessamento periclinal, (8,5–) 10–17(– 18,5)×2–3(–3,5) μm.Paráfisesnão visto.Conídios hialino, de paredes finas, liso com conteúdo granular, asseptado, estreitamente fusoide, base subtruncada a rombamente arredondada, ápice subobtuso, (17–)19–23(–25)× (4,5–)5,5–6,5(–7,5) μm (méd. = 21× 6,2 μm, n = 50; C/L = 3,4).Dicômeramorfologia sinassexual com conídios marrons pigmentados, paredes finas, transversalmente 2–7 septados, com 1–2 septos oblíquos, (11–)13,5–17(–19,5)× (5–)5,5– 6,5(–7) μm (méd. = 15,4×6,1 μm, n = 50; C/L = 2,5). Características da cultura - As colônias no BDA apresentam micélios aéreos fofos com margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cinza-fumado a cinza-ferro, cobrindo a placa após 4 dias a 25 °C no escuro. As colônias no MEA possuem micélios fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, cinza esfumaçado, cobrindo a placa após 6 dias a 25 ° C no escuro. As colônias em OA possuem micélios aéreos fofos com margem irregular, com tapete micelial comprimido e moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, centro oliváceo preto cercado por uma margem cinza-fumaça, cobrindo a placa após 4 d a 25°C no escuro. No total, foram geradas 10 filogenias multigênicas (Fig. 1–10) (ver TreeBASE; estudo S27596). As estatísticas e os modelos utilizados para os diferentes conjuntos de dados são mostrados na Tabela 2. A árvore bayesiana de cada alinhamento é apresentada, com os valores de suporte de bootstrap das análises RAxML plotados adicionalmente nos nós. As análises filogenéticas trataram os seguintes gêneros: Botryosphaeria(Figura 1),Diplódio(Figura 2),Dothiorella(Figura 3), Lasiodiplódia(Figura 4),Neofusicoccum(Figura 5, 6),Neoscyta lipídio( Figura 7),Feobotryon,Barriopsis,Sphaeropsis,Alan Philipsiae Oblongocollomyces(Figura 8),Pseudofusicoccum (Fig. 9) eSaccharata( Figura 10). Novidades taxonômicas foram reveladas em Botryosphaeria(uma espécie)Diplódio(uma espécie),Dothiorella(uma espécie),Lasiodiplódia(uma espécie), Neofusicoccum(duas espécies), Feobotryon(uma espécie) e Saccharata(duas espécies). Taxonomia Com base nas análises filogenéticas realizadas neste estudo, oito espécies são delineadas como novas, com descrições morfológicas fornecidas abaixo. Vários isolados pareciam representar táxons distintos com base nas análises multigênicas, mas não foram formalmente nomeados. Isso se deveu ao número limitado de diferenças morfológicas ou de nucleotídeos, ou ao fato de que várias linhagens crípticas pareciam representar nomes mais antigos e bem estabelecidos. No entanto, são fornecidas descrições e ilustrações desses isolados para facilitar uma revisão destes gêneros no futuro. A justificativa para reduzir espécies anteriormente aceitas à sinonímia é fornecida abaixo. Isolados examinados.AustAliA, Austrália Ocidental, Albany, Gull Cove, em Grevilleasp., conidiomas induzidos em meio PNA, 20 de setembro de 2015,PW Crous(CBS H-24114, cultura CBS 145971 = CPC 29048). –épara foraAfrica, província de Western Cape, Stellenbosch, emDiospyros glabra, conidiomas induzidos em meio PNA, 22 de maio de 2008,F. Roets(CBS H-24116, cultura CBS 123530 = CPC 15186).Botryosphaeria dothidea(Moug.: Pe.) Ces. & De Not., Com- mento. Soc. Crittog. Italiano. 1: 212. 1863 - Fig. Notas-Quatro espécies publicadas recentemente são reduzidas a sinonímia comBotryosphaeria dothidea(Figura 1, S1A-C; análises de parcimônia não mostradas) e duas espécies adicionais, a saber B.auasmontanumeB. minutispermatia, provisoriamente retido como separado com base em valores de similaridade de sequência mais baixos. As duas últimas espécies são indicadas como possíveis sinônimos deB. dothideaacima e agrupam-se em ramos mais longos noB. dothideaclado (Fig. 1). Três das espécies, nomeadamente B. minutispermatia,B. quercuseB. sinensis, foram publicados no mesmo ano. A cultura ex-tipo deB. dothidea tinha as seguintes semelhanças de nucleotídeos com as sequências dos ex-tipos deB.auasmontanum,B. minutispermatia, B. quercus,B. sinensiseB. wangensis. Sobre ITS: 410/415 (98,80%, incluindo três lacunas), 454/457 (99,34%, incluindo três lacunas), 456/456 (100%), 455/457 (99,56%, incluindo duas lacunas; com base em CGMCC 3.17723 ) e 455/457 (99,56%, incluindo duas lacunas), respectivamente. Sobretef1: 223/244 (91,39%; incluindo um indel de 21 nucleotídeos), 239/244 (97,95%, incluindo uma lacuna), semtef1 disponível paraB. quercus, 244/244 (100%; com base em CGMCC 3.17723) e 244/246 (99,59%, incluindo duas lacunas). Sobrebanheira2: nãobanheira2disponível paraB.auasmon tanum,B. minutispermatiae B. quercus, 368/370 (99,46%, incluindo duas lacunas) e 383/384 (99,74%), respectivamente. Uma comparação das sequências do tipo ex deB. qinlingensis(SEU: MK434301,tef1: MK425020,banheira2: MK425022; não incluída nas árvores filogenéticas) revelou que esta espécie também é sinônimo deB. dothidea: a sequência ITS diferia em um nucleotídeo de várias outras espécies (comoB. 'wangensis', B. 'quercus',B. 'sinensis'eB. dothidea); otef1sequência é idêntica aB. 'sinensis'eB. dothideae diferiucom duas lacunas deB. 'wangensis'enquanto obanheira2sequência é idêntica a B.qingyuanensis,B. fabicerciana,B. dothideaeB. rosáceas. Embora CBS 123530 tenha se agrupado além doB. dothidea clado (Fig. 1), o baixo número de diferenças de sequência nos impediu de introduzir uma nova espécie para ele: em ITS diferiu com Basiônimo.Sphaeria dothideaMoug. In: Batatas fritas, Syst. Mycol. (Lundae) 2 (2): 423. 1823. Novos sinônimos.Botryosphaeria auasmontanumFJJ van der Walt et al., Persononia 33: 162. 2014. Botryosphaeria minutispermatiaAriá. et al., Phytotaxa 275: 40. 2016. Botryosphaeria quercusWijayaw. et al., Diversidade Fúngica 77: 63. 2016. Botryosphaeria sinensisYP Zhou e Y. Zhang ter (como 'sinensia'), Phytotaxa 245: 45. 2016. Botryosphaeria wangensisGQ Li & SF Chen, Personia 40: 84. 2017 (2018). Botryosphaeria qinlingensisCM Tian & LY Liang, Mycotaxon 134: 469. 2019. Isolar CBS 123530. Conidiomaspicnídeo, produzido no PNA, solitário, globoso a ovóide, marrom escuro a preto, até 730 μm de largura, 680 μm de altura, incrustado em tecido agulhado, semiimerso a superficial, unilocular, com ostíolo central. Conidióforos ausente ou reduzido a uma célula de suporte. Células conidiogênicas holoblástica, discreta, hialina, cilíndrica a lageniforme, fialídica com espessamento periclinal, (9–)12,5– 18,5(–20,5)× (2–)2,5–3,5(–4) μm.Paráfisesnão visto.Conídios hialino, de paredes finas, liso com conteúdo granular, asseptado, fusoide estreito ou irregular, base subtruncada a arredondada, ápice subobtuso, tornando-se marrom quando maduro, (9–)10,5– 14(–16)× (3,5–)4–5(–6) μm (méd. = 12,5×4,8 μm, n = 50; C/L = 2,6). Características da cultura — As colónias em BDA apresentam micélios aéreos fofos com margem irregular, com tapete micelial moderadamente denso, cinzento fumo a oliváceo, cobrindo a placa após 6 dias a 25 °C no escuro. As colónias em MEA têm micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, cinzento esfumaçado no centro, branco na margem, cobrindo a placa após 5 dias a 25 ° C no escuro. As colônias em OA possuem micélios aéreos fofos com margem irregular, com tapete micelial comprimido e centro moderadamente denso, cinza claro com região branca, cobrindo a placa após 5 dias a 25 ° C no escuro. 88 Personônia – Volume 46, 2021 um único nucleotídeo deB. dothidea,B. fusispora,B.kuwatsukai,B. minutispermatia,B. quercus,B. rosáceas,B. sinensis eB. wangensis. A filogenia bayesiana não a resolveu como uma nova espécie (Fig. S1A), ao passo que formou uma linhagem não suportada em um ramo curto na filogenia da parcimônia (dados não mostrados). Sobretef1diferia com um único nucleotídeo de B. wangensise com dois nucleotídeos deB.qingyuanensis. A filogenia Bayesiana colocou-a intimamente relacionada com as outras espécies (Fig. S1B), assim como a análise de parcimônia (dados não mostrados). Sobrebanheira2é idêntico aB. dothidea,B. fabicerciana, B.qingyuanensiseB. rosáceas. Nem a análise bayesiana (Fig. S1C) nem a parcimônia (dados não mostrados) resolveram essas espécies. Notas -Botryosphaeria fusispora(Figura 1, S1A-C; análises de parcimônia não mostradas) é reduzida a sinonímia comB. fabi cerciana. A cultura ex-tipo deB. fabicercianatem as seguintes semelhanças de nucleotídeos com as sequências do tipo ex deB. fusispora. No seu,tef1ebanheira2, respectivamente: 455/455 (100%), 246/246 (100%) e 383/384 (100%). É possível que, quando Liu et al. (2012) publicadoB. fusispora, os autores não tinham conhecimento da existência deB. fabicercianacomo não incluíram esta espécie em sua árvore filogenética, também não fizeram qualquer referência a ela. Botryosphaeria kuwatsukai(Hara) GY Sun & E. Tanaka, Diversidade Fúngica 71: 225. 2014 Da mesma forma, o clado contendo CPC 29048 agrupou-se além doB. dothideaclado (Fig. 1), mas o baixo número de diferenças de sequência nos impediu de introduzir uma nova espécie para ele: no ITS ele diferia com um único nucleotídeo deB. fabicerciana, B. fusispora,B.kuwatsukaieB. rosáceas. Tanto a análise Bayesiana (Fig. S1A) quanto a de parcimônia (dados não mostrados) colocaram- no em um clado distinto, que também incluiuB. corticisem um longo galho. Sobretef1diferia com dois nucleotídeos de CBS 123530 e com três nucleotídeos deB. wangensis. Formou uma linhagem distinta nas filogenias bayesiana (Fig. S1B; PP = 1,0) e parcimônia (dados não mostrados; 86% de suporte bootstrap). Sobrebanheira2 diferia em dois nucleotídeos deB. dothidea,B. fabicerciana, B.qingyuanensiseB. rosáceas. Formou uma linhagem distinta nas filogenias bayesiana (Fig. S1C; PP = 1,0) e parcimônia (dados não mostrados; 86% de suporte bootstrap). Basiônimo.Macrofoma kuwatsukaiHara, Prática de Patologia de Culturas (Tóquio): 482. 1930. Novo sinônimo.Botryosphaeria rosaceaeYP Zhou e Ying Zhang, Micosfera 8: 167. 2017. Notas -Botryosphaeria rosaceaeé reduzido a sinônimo de B.kuwatsukai(Figura 1, S1A-C; análises de parcimônia não mostradas). A cultura ex-tipo deB.kuwatsukaitem as seguintes semelhanças de nucleotídeos com as sequências do tipo ex de B. rosáceas. Em ITS etef1, respectivamente: 455/455 (100%) e 206/206 (100%). Zhou et al. (2017) não incluiuB.ku watsukai em sua árvore filogenética nem fizeram qualquer referência a isso. Botryosphaeria ramosa(Pavlic et al.) AJL Phillips &A. Alves, Viga. Mycol.76: 77. 2013 Botryosphaeria fabicerciana(SF Chen et al.) AJL Phillips & A. Alves, Stud. Mycol. 76: 77. 2013 Basiônimo.Fusicoccum ramosumPavlic et al., Mycologia 100: 861. 2008. Novo sinônimo.Botryosphaeria pseudoramosaGQ Li & SF Chen, Personia 40: 83. 2017 (2018). Basiônimo.Fusicoccum fabicercianumSF Chen et al., Pl. Patol. 60: 746. 2011. Novo sinônimo.Botryosphaeria fusisporaBoonmee et al., Diversidade Fúngica 57: 171. 2012. Notas -Botryosphaeria pseudoramosaé reduzido a sinônimo deBotryosphaeria ramosa(Figura 1, S1A-C; análises de parcimônia não mostradas). A cultura ex-tipo deB. ramosatem Figura 13Diplodia afrocarpi(CBS 131681). a. Colônia esporulando em PNA; b-c. células conidiogênicas; d. conídios jovens e hialinos; e. conídios maduros, marrons, 1 septados. — Barra de escala: b = 10 μm, a barra de escala de b aplica-se a b – e. W. Zhang et al.: Avaliando espécies emBotryosphaeriales 89 as seguintes semelhanças de nucleotídeos com as sequências do tipo ex deB. pseudoramosa. No seu,tef1ebanheira2: 451/453 (99,56%), 246/247 (99,60%) e 386/386 (100%), respectivamente. Li et al. (2018) mencionou queB. ramosaeB. pseudo ramosaeram filogeneticamente intimamente relacionados e que podiam ser distinguidos com base na morfologia de seus conídios. semelhanças de nucleotídeos com as sequências dos ex-tipos de D. magnoliigenaeD. piri. Nos ITS: 475/478 (99,37%, incluindo uma lacuna) e 477/477 (100%), respetivamente. Sobretef1: nãotef1 disponível paraD. magnoliigenae 249/259 (96,14%; incluindo um indel de nove nucleotídeos), respectivamente. Sobre banheira2: 343/346 (99,13%; com base na cepa MFLUCC 18-1554, GenBank MK412873.1) e 384/385 (99,74%), respectivamente. Diplodia afrocarpiW.Zhang & Crous,sp. novembro. –– MycoBank MB838092; Figura 13 Diplodia pseudoseriataCA Pérez et al., Diversidade Fúngica 41: 63. 2009 - Fig.Etimologia. Nome refere-se aAfrocarpo, o gênero hospedeiro do qual este fungo foi coletado. Novos sinônimos.Diplodia alatafrutaMehl & Chinelos, Mycologia 103: 542. 2011. Diplodia pseudoplataniWijayaw. et al., Diversidade Fúngica 77: 108. 2016. Diplódia insularLinald. et al., Mycosphere 7: 968. 2016. Tipo.épara foraAfrica, província de Western Cape, Knysna, a partir de galhos saudáveis deAfrocarpus falcatus, conidiomas induzidos em PNA, 5 de fevereiro de 2009, EM Cruywagen(holótipo CBS 131681, preservado como cultura metabolicamente inativa, cultura ex-tipo CBS 131681 = CMW 35506). Isole CBS 125527:Conidiomaspicnídeos, produzidos em PNA, solitários ou agregados, conidiomas individuais globosos, superficiais ou semiimersos, cobertos por hifas, uniloculados,de paredes espessas, até 350 μm de largura, até 370 μm de altura.Células conidiogênicashialino, liso, cilíndrico, às vezes ligeiramente inchado na base, holoblástico, proliferando percorrentemente para formar duas ou três anelações distintas ou proliferando internamente dando origem a espessamentos periclinais, (5–)6–9,5(–11,5)× (2,5–)3–4(–5,5) μm. Paráfisesausente.Conídiosinicialmente hialino tornando-se pigmentado mesmo enquanto ainda ligado à célula conidiogênica, marrom escuro quando maduro, 0–1 septado, elipsóide a ovóide, parede finamente rugosa na superfície interna, (19–)21–25,5(–29,5)× ( 7,5–)8,5–11,5 (–15) μm (méd. = 23,2×9,8 μm, n = 50; C/L = 2,4). Características da cultura — As colónias em BDA têm micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, cinzento fumo a cinzento rato rodeado por uma margem branca, cobrindo a placa após 6 dias a 25 °C no escuro. As colônias no MEA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, branco com um centro cinza esfumaçado, cobrindo a placa após 5 dias a 25 ° C no escuro. As colônias em OA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com tapete micelial comprimido e branco, moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cinza claro a cinza esfumaçado, cobrindo a placa após 5 dias às 25 horas. °C no escuro. Conidiomaspicnídeo, produzido em PNA, solitário ou agregado, conidiomas individuais globosos, superficiais ou semi-imersos, cobertos de pêlos hifais, uniloculados, de paredes espessas, exsudando conídios em massa mucóide amarela, até 1245 μm de largura, até 1100 μm de altura.Células conidiogênicashialino, de paredes finas, liso, cilíndrico a subcilíndrico, discreto, holoblástico sem evidência de anelações, (9–)10–14(–17,5)× (3–)3,5–5(–5,5) μm. Paráfisesausente.Conídiosredondo a ovóide, ambas as extremidades amplamente arredondadas, inicialmente hialinas, asseptadas, tornando-se marrom-escuras e 1-septadas com a idade, paredes espessas, parede externamente lisa, rugosa na superfície interna, (20–)22,5– 24,5(–26)× (15–)16,5–19(–20) μm (méd. = 23,5×17,8 μm, n = 50; C/L = 1,3). Características de cultura - As colônias no BDA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, cinza-rato, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cobrindo a placa após 6 d a 25°C no escuro. As colônias no MEA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cinza claro a cinza esfumaçado, cobrindo a placa após 5 d a 25°C no escuro. As colônias em OA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com tapete micelial comprimido, branco, moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cinza- rato, cobrindo a placa após 5 dias a 25 °C em o escuro. Isole CBS 124933:Conidiomaspicnídeo, produzido em PNA, solitário ou agregado, conidiomas individuais globosos, superficiais ou semiimersos, cobertos de pêlos hifais, uniloculados, de paredes espessas, até 890 μm de largura, até 840 μm de altura.Células conidiogênicasholoblástico, fialídico, discreto, determinado, doliiforme, cilíndrico a subcilíndrico, hialino, de parede lisa, (5–)5,5– 10(–12,5)×3–4,5(–5,5) μm.Paráfisesausente.Conídiosovóide a elipsóide, ápice arredondado, base truncada ou arredondada, asseptada, inicialmente hialina, tornando-se marrom, parede espessa, parede externamente lisa, rugosa na superfície interna, (19,5–)23–27 (–30,5)× (8–)10,5–12,5(–14) μm (méd. = 25,1×11,4 μm, n = 50; C/L = 2,5). Características da cultura - As colônias no BDA apresentam micélios aéreos fofos com margem irregular, com uma esteira micelial comprimida que é esparsa a moderadamente densa, cinza vináceo, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cobrindo a placa após 5 d a 25°C no escuro. As colônias no MEA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com um tapete micelial comprimido que é esparso a moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, cinza fumaça a cinza rato, cobrindo a placa após 4 d a 25°C no escuro. As colônias em OA possuem micélios aéreos fofos com uma margem irregular, com tapete micelial comprimido, branco, moderadamente denso, alguns micélios aéreos algodoados alcançando a tampa da placa de Petri, sépia acinzentada a cinza esfumaçado, cobrindo a placa após 5 dias às 25 horas. °C no escuro. Notas - Filogeneticamente,Diplodia afrocarpiaglomerados em uma linhagem separada em comparação com todas as outras espécies incluídas no gêneroDiplódio(Fig. 2), representando um novo táxon emPus afrocar. Com base nos dados da sequência ITS, difere em oito posições (incluindo dois indels) deD. estuarinaeD. alatafruta. Representa uma linhagem filogeneticamente distinta tanto na filogenia bayesiana (Fig. S2A) quanto na parcimônia (dados não mostrados). Para otef1dados,a melhor correspondência no conjunto de dados tinha uma similaridade de 90% comD. pterocarpi. Formou uma linhagem basal distinta nas filogenias bayesiana (Fig. S1B) e parcimônia (dados não mostrados). Nobanheira2 comparação, a melhor correspondência no conjunto de dados foi uma similaridade de 96% comD. cortícola. Formou uma linhagem basal distinta nas filogenias bayesiana (Fig. S1C) e parcimônia (dados não mostrados). Diplodia mutila(Pe.: Pe.) Pe., Summa Veg. Escândalo. 2: 417. 1849 Basiônimo.Sphaeria mutilaPe.: Pe., Sist. Mycol.(Lundae) 2 (2): 424. 1823. Novos sinônimos.Diplodia piriTao Yang e Crous, Fung. Biol. 121: 329. 2016, Nom. ilegítimo., art. 53.1. Diplodia magnoliigenaJayasiri et al., Mycosphere 10: 135. 2019. Notas -Diplodia pirieD. magnoliigenasão reduzidos a sinonímia comD. mutila(Figura 2, S2A-C; análises de parcimônia não mostradas). A cultura ex-epítipo deD. mutilatem o seguinte 90 Personônia – Volume 46, 2021 Isolados examinados.épara foraAfrica, província de Mpumalanga, Reserva Natural Buffelskloof, dePterocarpus angolensis, conidiomas induzidos em meio PNA, dezembro de 2005,JWM Mehl e J. Roux(CBS H-24119, cultura CBS 124933 = CMW 22721). –vocêruguAy, Paysandu, Três Bocas, deHexachlamis edulis, conidiomas induzidos em meio PNA, 1º de agosto de 2006,C. Perez(CBS H-24118, cultura CBS 125527 = CMW 26742). cultura deD. pseudoseriatatem as seguintes semelhanças de nucleotídeos com as sequências dos ex-tipos deD. alatafruta,D. em sulariseD. pseudoplatani, respectivamente. Nos ITS: 470/473 (99,37%), 471/473 (99,58%, incluindo uma lacuna) e 473/474 (99,79%, incluindo uma lacuna), respetivamente. Sobretef1: 232/233 (99,57%, incluindo uma lacuna), 228/230 (99,13%) e nenhuma tef1paraD. pseudoplatani, respectivamente. Sobrebanheira2: 384/385 (99,74%), 383/385 (99,48%; com base na cepa BL132, GenBank MG015810.1) e nãobanheira2paraD. pseudoplatani, respectivamente. Notas — Três espécies,D. alatafruta, D. pseudoplatanie D. insularissão reduzidos a sinonímia comD. pseudoseriata (Fig. 2, S2A-C; análises de parcimônia não mostradas). O ex-tipo Figura 14Diplodia pseudoseriata(CBS 125527). a. Colônia esporulando em PNA; b-d. células conidiogênicas e conídios em desenvolvimento; e-f. conídios; caramba. conídios marrons em dois planos de foco diferentes para mostrar a superfície interna finamente verruculosa da parede. — Barra de escala: b = 10 μm, a barra de escala de b aplica-se a b – h. Figura 15Diplodia pseudoseriata(CBS 124933). a. Colônia esporulando em PNA; células conidiogênicas b – c; d. conídios jovens e hialinos misturados com conídios maduros e marrons; e-f. conídios marrons em dois planos de foco diferentes para mostrar a superfície interna finamente verruculosa
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