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AULA 01 – IMUNOLOGIA CLINICA 15/08 – METODOS IMUNOLOGICOS → Nossa imunidade gera SINAIS (Sintomas) para o nosso sistema imune detectar algo de errado. - A presença de anticorpos permite o diagnóstico da doença. Ex: Uma alergia é um sinal, microrganismos, doenças infecciosas e doenças autoimune. EXEMPLO DE CASO CLINICO: → Sr Francisco mora em uma zona rural, começou a se sentir mal, teve falta de apetite, dores no corpo e febre de 38,5. - A cidade em que reside esta com surto de covid. - Medico solicitou os seguintes exames: → HEMOGRAMA / SOROLOGIA PARA: ZIKA / CHINKUNGUYA & TESTE PARA ANTGENO DE COVID. - Neste caso pela quantidade de exames o medico não tinha uma hiptose de diagnostico do paciente. E esta se baseando no momento epidemiológico em que aquela região onde o Sr Francisco reside. - Estes testes são imunológicos; SOROLOGIA → é a pesquisa de moléculas de anticorpos. TESTE DE ANTIGENOS → é a pesquisa de moléculas de antígenos. NO HEMOGRAMA: → primeira coisa que aparece no exame é o tipo de material utilizado na testagem. Neste caso foi usado EDTA – anticoagulante. OBS: em todo laudo terá o método utilizado. ERITOGRAMA: →é a parte do hemograma que avalia quantitativamente e qualitativamente os eritrócitos. → Observa células vermelhas; EX: hemácias RESULTADOS DO SR FRANCISCO APÓS A COLETA: → Observamos que as plaquetas caíram, damos o nome de trombocitopenia (ocorre quando a medula óssea produz quantidades insuficientes de plaquetas ou quando plaquetas demais são destruídas ou se acumulam dentro do baço aumentado. Podem ocorrer hemorragias na pele e hematomas). Valores de referência: 150 a 400 mil. - Sr Francisco estava com 135 mil/m³ LEUCOGRAMA: → avalia a série branca do hemograma, ou seja, avalia a quantidade e a qualidade de leucócitos, as células responsáveis pela defesa do nosso organismo. Valores de referência: 4,5 – 11,0 - Sr Francisco 1,57mil/mm³ Neste caso os leucócitos estão baixos, para isso damos o nome de leucopenia (redução do número de leucócitos no sangue). OBS: para confirmarmos a leucopenia devemos fazer a confirmação na lâmina. - Não conseguimos dar um diagnóstico somente com o hemograma, pois precisamos da certeza antes de afirmar algo. MAIS RESULTADOS DOS EXAMES DO SR FRANCISCO: SOROLOGIA PARA DENGUE: Material: soro / Metódo: Elisa Resultado: Não reagente SOROLOGIA PARA ZIKA: Material: soro / Metódo: Elisa Resultado: Não reagente SOROLOGIA PARA CHINKUNGUNYA: Material: soro / Metódo: Elisa Resultado: Não reagente TESTE DE ANTIGENO PARA COVID: Material: SWAB NASOFARINGE / Metódo: IMUNOCROMATOGRAFICO Resultado: Não reagente RESULTADO: → nenhum dos testes foram conclusivos para um possível diagnostico. - Dengue, zika e Chikungunya possuem sintomas parecidos. PASSOS PARA COMPREENDER OS TESTES: 1 → precisamos entender como os sinais (sintomas) estão se manifestando. 2 → como os métodos testados (testes) funcionam e como os seus resultados são vistos. METÓDO ELISA: → serve para identificação de doenças infecciosas. - Baseia-se em reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas (teste imune enzimático). ELISA INDIRETO: → O antígeno é imobilizado na placa, é uma detecção em 2 passos. Primeiro um anticorpo primário é ligado ao antígeno específico depois é adicionado um segundo anticorpo ligado à uma enzima que se liga ao anticorpo primário. ELISA SANDUICHE: → é realizada utilizando um antígeno aderido a um suporte sólido, como a placa de ELISA (geralmente deixado para se ligar à placa previamente, o que comumente chamamos de sensibilizar a placa) e a seguir coloca-se sobre este os soros em teste ( ex. soro humano), na busca de anticorpos contra o antígeno. ELISA COMPETITIVO: → Utiliza um antígeno marcado para competir com o alvo. O antígeno marcado se liga menos quando houver mais antígeno não-marcado (da amostra) e assim, a cor fica mais fraca quando houver muito do alvo na amostra. QUESTÕES: 1- O que os métodos imunológicos detectam? 2- Como a imunidade ajuda nos diagnósticos? 3- Como os métodos imunológicos são desenvolvidos? 4- Como os métodos imunológicos funcionam? RESPOSTAS: 1- Meios de pesquisa, detecta através da interação de antígeno e anticorpo. → Antígeno é uma molécula capaz de ativar o sistema imune através da imunogenicidade. - célula do sistema imune que ativa linfócito B e linfócito T. IMUNOGENICIDADE: → é a capacidade de ativar linfócitos B e linfócitos T. Ambos possuem seus receptores específicos. → Ativando linfócito B e T teremos a ativação da imunidade adquirida, gerando uma resposta imunológica, essa resposta ira gerar clones que formaram a memoria imunológica, assim quando houver um segundo contato com um mesmo patógeno o sistema imune já estará pronto para atacar de forma mais rápida. LINFÓCITO B: → produz anticorpos. - Receptor do linfócito B é anticorpo de superfície. - Secreta anticorpo semelhante ao que ele tem. - Se ligam a antígenos. - Cada clone irá produzir anticorpo para se produzir. - A ligação entre antígenos e anticorpos é uma ligação específica. ANTICORPOS: → São moléculas produzidas pelos linfócitos B. → Em um teste de COVID deveremos detectar proteína N. Para captar a proteína usaremos anticorpos contra essa proteína durante o teste. NOTA ADICIONAL: Em testes de antígenos não faria sentido coletarmos sangue, pois o vírus esta no trato-respiratório e não na corrente sanguínea. 2- ELEMENTOS DA IMUNIDADE. → Estão envolvidos nos testes. → Sorologia IgM e IgG – imunoglobulinas que são isótipos. - anticorpos possuem diferentes isótipos. → molécula pentâmera. → molécula monomérica. → possui 5 anticorpos ligado a ela. → possui 1 anticorpo ligado a ela. → produzido primeiro na resposta imune, → IgG vai ter afinidade melhor por por linfócitos B. conta da maturação que passou. → afinidade vai melhorando com o tempo, → possui melhor encaixe com o é o linfócito B começa a secretar IgG aos antígeno, por isso passa de IgM poucos contra o mesmo antígeno. para IgG. → tem vários tipos de ligação. → molécula monomérica. → moléculas dímera. → possui 1 anticorpo ligado a ela. → possui 2 anticorpo ligado a ela. → associada a alergias. → encontrada em mucosas. REGIÃO FC: se liga na célula do sistema imune EX: macrófagos REGIÃO FAB: possui afinidade com antígeno. → DOENÇA CRÔNICA: detecta IgG. → DOENÇA AGUDA: detecta IgG e IgM. - Quando devemos detectar anticorpo ou antígeno? → vacina tem antígeno contra o vírus então ira produzir anticorpos. OBS: sorologia não poderia ser usado neste caso. 3- METODOS → avalia-se: conhecimento sobre a doença, qual será o melhor tipo de diagnostico para a doença e a necessidade do diagnóstico.