PDF - AULA 6 - COLORAÇÃO

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Função da coloração: 
Melhora a visualização da morfologia da bactéria 
e suas estruturas 
Tipos de coloração 
- Coloração simples: Coloração com um 
corante, que cora a bactéria por inteiro, sem 
visualização das estruturas, para identificar uma 
morfologia bacteriana 
- Coloração diferencial: Utiliza mais de um 
corante, evidenciando estruturas e fazendo uma 
diferenciação para a definição da morfologia 
Coloração de Gram – Padrão ouro 
1. Fixação: A fixação é feita com calor, 
prendendo as bactérias na lâmina. 
2. Cristal Violeta (30 segundos a 1 minuto):O 
cristal violeta interage com a parede celular 
e o peptidoglicano, fazendo com que tanto 
as bactérias gram-negativas quanto as 
gram-positivas fiquem roxas, pois ambas 
possuem peptidoglicano. 
3. Lava com água destilada 
4. Lugol: O Lugol atua como fixador, 
mantendo o cristal violeta preso à parede 
celular. Assim, tanto as bactérias gram-
negativas quanto as gram-positivas 
permanecem roxas devido à presença de 
peptidoglicano em ambas. 
5. Lava com água destilada 
6. Descorante (10s): O descorante remove o 
cristal violeta das bactérias que possuem 
pouco peptidoglicano. Ou seja, as bactérias 
gram-negativas ficam incolores, enquanto as 
gram-positivas permanecem roxas. 
7. Lava com água destilada 
8. Contra-Corante (Safranina): O contra-
corante safranina colore as bactérias gram-
negativas de rosa, enquanto as gram-
positivas continuam roxas. 
 
Morfologia 
Cocos: Gram + (Exceção: Gênero Neisseria – 
gonococo e meningococos) 
Bastonetes: Gram – (Excessão: Gênero 
Corynbacterium, Listeria (cocobacilo), bacillus e 
clostridium) 
Ziehl-Neelsen: BAAR 
Nem todas as bactérias podem ser coradas 
com a coloração de Gram. Isso ocorre devido a 
dois fatores principais: algumas, como o 
Micoplasma, não possuem parede celular e, 
portanto, não têm peptidoglicano para serem 
coradas; outras, como as micobactérias, 
possuem uma parede celular com 
características únicas que tornam a técnica de 
Gram ineficaz. 
As micobactérias (Mycobacterium tuberculosis e 
Mycobacterium leprae) possuem uma camada 
espessa de lipídios em sua parede celular, que 
inclui o ácido micólico, um componente que 
confere à superfície celular propriedades 
hidrofóbicas. Essa camada lipídica impede a 
entrada de corantes aquosos utilizados na 
coloração de Gram, como azul de algodão e 
safranina. Além disso, durante a etapa de 
descoloração com álcool ácido na coloração de 
Gram, o álcool não consegue penetrar na 
parede celular dessas bactérias devido à 
resistência proporcionada pelo ácido micólico. 
Como resultado: 
- Micobactérias não descoloram e permanecem 
coradas. 
Na coloração de Ziehl-Neelsen, utiliza-se a 
fucsina como corante primário, pois ela 
consegue penetrar na camada lipídica e corar 
as micobactérias em tons de vermelho ou rosa. 
Quando aplicado o álcool ácido como 
descolorante, apenas as micobactérias 
permanecem coradas devido à resistência ao 
álcool, enquanto outras bactérias perdem a cor. 
Para finalizar, aplica-se o azul de metileno, que 
cora somente as bactérias não BAAR, que 
ficaram incolores após o descolorante. 
Processo de coloração Ziehl-Neelsen: 
1. Fixar o material pelo calor. 
2. Cobrir a lâmina com fucsina aquecida 
(cora micobactérias). 
3. Lavar com água. 
4. Descolorir com álcool ácido 
(micobactérias não descoloram). 
5. Lavar com água. 
6. Aplicar azul de metileno (cora bactérias 
não BAAR). 
7. Lavar. 
8. Observar no microscópio. 
Interpretação dos resultados: 
 0 bactérias: Resultado negativo. 
 ½ bactéria por campo microscópico: 
Resultado duvidoso, recomenda-se 
repetir o exame. 
 
 
Tribondeau 
- Sífilis e leptospirose 
- não é um método de coloração verdadeiro, 
mas sim uma técnica de impregnação pela 
prata. 
- Objetivo: Visualização de bactérias espiraladas, 
que são muito finas para serem 
suficientemente coradas pelo método de Gram. 
A espessura reduzida impede que retenham o 
corante. 
- Alternativas modernas: microscopia de campo 
escuro e técnicas de imunofluorescência 
 ALBERT-LAYBOURN 
- Utilizada para visualizar células bacterianas e 
seus grânulos metacromáticos. 
- Corantes Utilizados: Azul de Toluidina, tinge o 
citoplasma bacteriano e Verde Malaquita, colore 
os grânulos metacromáticos em marrom. 
- Processo de Coloração: 
1. Fazer esfregaço e fixá-lo pelo calor. 
2. Cobrir o esfregaço com a solução de 
Albert-Laybourn por 3 a 5 minutos. 
3. Escorrer o excesso (não lavar). 
4. Cobrir com solução de Lugol forte por 
2 minutos. 
5. Lavar com água e deixar secar. 
6. Observar no microscópio