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FISIOLOGIA BACTERIANA NUTRIÇÃO – Garantir o crescimento celular METABOLISMO – Fornecer energia para a biossíntese de macromoléculas e garantir o crescimento REPRODUÇÃO – Garantir o crescimento populacional NUTRIÇÃO n Composição química das bactérias n Tipos nutritivos n Fatores de crescimento n Mecanismos de absorção de nutrientes n Curva de crescimento Composição química das bactérias Macroelementos ou macronutrientes Elementos nutritivos necessários em quantidades maiores Composição química das bactérias Microelementos ou micronutrientes (traços) Requeridos em pequenas quantidade, mas necessários para a maioria dos micro-organismos Manganês Zinco Cobalto Molibdênio Participantes da estrutura das Níquel enzimas e/ou Cobre cofatores enzimático (ativadores) Fatores de crescimento Compostos orgânicos que a célula necessita para crescer, mas que é incapaz de sintetizar n Essenciais n Fator V (nicotinamida adenina dinucleotídeo) n Fator X (Heme) nHaemophilus influenzae n Vitaminas, aminoácidos, purinas e pirimidinas. n Estimulantes n Vitaminas do complexo B nBactérias lácticas Microrganismos fastidiosos: necessitam de muitos fatores orgânicos do crescimento (exigentes nutricionalmente) Tipos nutritivos bactérias de importância na saúde Mecanismos de absorção de nutrientes n Difusão osmótica (simples, facilitada) n diferença no gradiente de concentração n passagem livre sem gasto energético n água, oxigênio, gás carbônico e ácidos graxos pequenos Mecanismos de absorção de nutrientes n Transporte ativo n contra o gradiente – da região de menor concentração do soluto para região de maior concentração do soluto, n com gasto energético. n aminoácidos e vitamina ¡ Exoenzimas digestão extracelular: n Proteases, peptidases n Polissacaridases (amilase) n Mucopolissacaridases (hialuronidase) n Nucleases (DNase) n Lipases, fosfolipases Curva de crescimento As populações de bactérias seguem uma série sequencial de fases de crescimento: • Latência ou lag • Logarítmica, exponencial ou log • Estacionária • Declínio ou morte Importante para: • Compreensão da dinâmica e controle das populações no curso de doenças infecciosas • Preservação e deterioração de alimentos • Processos microbiológicos industriais Curva de crescimento Fase latência • Alta atividade metabólica Fase logarítmica ou exponencial • Células mais ativas nas melhores condições. • Estudos colorações, antibiograma, enzimáticos, componentes celulares. Reprodução - divisão binária simples (fissão) Streptococcus mutans METABOLISMO Metabolismo bacteriano Quimiotróficos Fermentação e/ou Respiração 1.Homolática ou acidugênica • Produzem ácido lático a partir da deterioração de alimentos • Streptococcus mutans e Lactobacillus 2. Alcoólica • Produção de dióxido de carbono e o etanol. • Bactérias e leveduras – Saccharomyces • Uso produção de bebidas alcoó-licas e pães Metabolismo Quimiotróficos Fermentação e/ou Respiração 1. Aeróbia • Requer oxigênio • Aceptor final: oxigênio • Alto rendimento energética (38 ATPs) 1. Anaeróbia • Não requer oxigênio • Aceptor final da reação são os compostos inorgânicos • Baixo rendimento energético (2 ATPs) Fatores que influenciam o crescimento Físicos • Temperatura • pH • Pressão osmótica • Atmosfera gasosa Químicos • Água • Macronutrientes • Micronutrientes • Fatores de crescimento Temperatura ó+ma de crescimento - Bactéria termófila e formadora de esporos - Fontes termais associadas à a7vidade vulcânica pH Acidófilas ou acidúrico pH < 6,0 Neutrófilas pH 6,5 e 7,5 Alcalinófilas pH > 8,0 Pressão osmótica 1. 2. 3. 4. 5. Atmosfera gasosa Tipos respiratórios Afinidade por O2 1. Aeróbios estrito 2. Anaeróbios estritos 3. Anaeróbios facultativos 4. Microaerófilos 5. Anaeróbios aerotolerantes Afinidade por CO2 1. Capnofílicos Meio líquido: tioglicolato 1. 2. 3. 4. 5. Tipos respiratórios e exemplos 1. Mycobacterium tuberculosis Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter spp 2. Clostridium tetani C. botulinum 3. Enterobactérias G. Staphylococcus 4. G. Streptococcus S. mutans Campylobacter Meio liquido: tioglicolado Cultivo de micro-organismos in vitro Meios de cultura • Necessidades para cultivo 1. Água 2. Nutrientes (micro e macro), fatores de crescimento 3. Condições físico-químicas • Grande variedade de meios, dependente da finalidade. • bactérias, fungos, protozoários e algas. Cultivo de micro-organismos in vitro Meios de cultura Classificação q Líquidos – caldo (sem ágar *) • Fácil absorção nutrientes • Várias finalidades q Sólidos (1,5% de ágar p/v) • Isolamento, identificação e visualização de colônias q Semi-sólidos (0,5 a 0,75% de ágar p/v) • Identificação por meio de provas bioquímicas específicas * Ágar: polissacarídeo obtido algas • Agente solidificante. • Sem função nutritiva Tipos de meios de cultura 1. Meios de transporte: • Stuart • Cary Blair: material fecal 2. Meio nutriente (simples): • TSA: trypticase soy agar – triptona de soja • TBS: trypticase soy broth – caldo triptona de soja 3. Meios ricos Ágar sangue • Isolamento de micro-organismos não fastidiosos • Tipo de hemólise dos Streptococcus spp • Prova de satelitismo (identificação presuntiva de Haemophilus spp) Composição: Base do meio com 5% de sangue de carneiro em temperatura ambiente Hemácias íntegras Ágar chocolate • Crescimento de micro- organismos fastidiosos (exigentes nutricionalmente) • Haemophilus spp., Neisseria spp. Composição: Base do meio com 5% de sangue de carneiro “achocolatado” em banho-maria a 75-80°C por 15min. Hemácias destruídas: liberação hemina e hematina (fatores de crescimento) 4. Meios seletivos e diferenciais Ágar MacConkey • Isolar bacilos Gram-negativos (enterobactérias e não fermentadores) • Verificar a fermentação lactose. Princípio: • Corante cristal violeta e sais biliares: inibição Gram-positivas • Lactose: diferencia fermentação (colônias rosas) ou não (colônias transparentes) Ágar Salmonella-shigella (SS) • Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em amostras de fezes, alimentos e água Princípio: • Sais de bile, verde brilhante, citrato de sódio: inibição Gram-positivas • Lactose: diferencia fermentação (colônias rosas) ou não (colônias transparentes) • Tiossulfato de sódio e citrato férrico: detecção de H2S (colônias cor negra centro) 5. Meios diferenciais para identificação Ágar Citrato Simmons Diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias e não fermentadores Princípio Verifica a capacidade da bactéria de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono Ágar Fenilalanina Diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias. Princípio Verifica a capacidade da bactéria de produzir ácido fenilpirúvico a partir da fenilalanina por ação enzimática. Negativo Negativo Positivo Positivo 6. Meios de enriquecimento: Caldo tetrationato Meio de enriquecimento para Salmonella spp. Princípio Sais de bile: inibem Gram-positivas Solução de iodo e verde brilhante: inibem microbiota intestinal normal Caldo Todd-Hiwett Meio de enriquecimento para Streptococcus agalactiae (beta -hemolítico do grupo B) Princípio Peptonas para um Dextrose para estimulação da produção de hemolisina Tampões Antibióticos: gentamicina e ácido nalidixico 7. Meios de conservação : Agentes crioprotetores: • Leite desnatado • Caldo nutritivo tamponado com glicerol