Curva de Calibração de Glicose

Prévia do material em texto

Curso: BIOMEDICINA UNIP Disciplina: BIOQUÍMICA CLÍNICA UNIVERSIDADE PAULISTA Instituto de Ciências da Saúde Prof: Evandro Ricardi Campus São José do Rio Preto RELATÓRIO AULA PRÁTICA Turma: Nome dos alunos: 1. R.A. 2. Fani R.A. 3. Save R.A. 4. Leonardo R.A. 5. Ivana R.A. DATA: / / NOTA: AULA 01 CURVA DE CALIBRAÇÃO INTRODUÇÃO A curva de calibração é a representação gráfica entre valores das absorbâncias com OS valores das concentrações de um conjunto de soluções padrão. A curva de calibração demonstra a linearidade da reação até uma determinada concentração, na qual pode ser determinado um fator de calibração (Fc), de acordo com a Lei de Beer. OBJETIVOS Recordar princípio de funcionamento do espectrofotômetro, demonstrando funcionamento do aparelho e funções. Analisar a aplicação da Lei de Lambert- Beer. Montar a curva de calibração. Determinação da concentração de uma solução problema por fotometria. PRINCÍPIO A glicose oxidase (GOD) catalisa a oxidação da Glicose de acordo com a seguinte reação: GOD Glicose + O₂ + Ácido Glucônico + H₂O₂ peróxido de hidrogênio formado reage com 4-aminoantipirina e fenol, sob ação catalisadora da peroxidase, através de uma reação oxidativa de acoplamento, formando uma antipirilquinonimina vermelha cuja intensidade de cor é proporcional à concentração da glicose na amostra. 2H₂O₂ + 4-Aminoantipirina + fenol Antipirilquinonimina + EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSÁRIOS: Solução de Glicose Padrão (200mg/dl) Reativo de Trabalho (Kit Glicose Enzimática) Espectrofotômetro Teste Banho-maria 37°C abs. 4 Pipetas de vidro = + 0,0225 Pipetas automáticas e ponteiras Tubos de ensaio médio Água destilada 2 Planilha Excel se 1 significa que a e' uma 1 gli mg/de= 0,0038 X -0,0815 - = 0,0815 0,0038.x 0,0815 x = 0,333 +0,0815 + X = 109,07 7 mgPROCEDIMENTO: Curva de glicose A- Determinar a concentração de glicose em uma solução problema: 2000 1. Tomar 6 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Y Tubos Solução Padrão Glicose Água Reagente Absorbância Problema Concentação de (200mg/dl) Destilada Trabalho (D.O.) Glicose (mg/dl) Branco 2,0 ml A 5 15 2,0 ml 50,0 10 10 2,0 ml 100,0 C 15 5 2,0 ml 150,0 D 20 2,0 ml 200,0 Teste 20 2,0 ml 2. colocar em banho-maria a 37 durante minutos. nível da água no banho deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio. 3. Determinar as absorbâncias do teste e padrão em 505 nm, acertando o zero com o branco. A cor é estável por 60 minutos. 4. Construir, em planilha Excel, a curva padrão (absorbâncias na ordenada e concentrações na abscissa), considerando os pontos zero de absorção e de concentração. 5. Determinar a concentração de glicose do Tubo Teste (solução problema) através da equação de regressão linear. Y Abs (Abs) C B de T A 150 200 0 [glicose] mg/de a Abs 15-3-16 Tubo A,B,C = 2Pipeta 0,5 200 mg/de -D AD- - - tuho de - de maria - Teste do Tow) - tubos bue - c Teste Um tuber com D Tube A & de geicose l AD 15 com a Tube B 10 de glicose AD 10 ul. C D idem Tubo D-D Teste todo, - leva as - - 100 - 1000 Espectro A 0.127 Teste 0.333