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Disciplina: Biologia Celular e Molecular Profa: Ana Beatriz G Duarte 1 Núcleo Maior organela celular Várias funções Armazenamento e controle informação genética Duplicação e transcrição DNA Nucléolo: ▪ Montagem de ribossomos ▪ Proteínas específicas e RNA 2 Massa amorfa viscosa circundada por envoltório ▪ DNA ▪ cromatina (interfase) Matriz nuclear ▪ rede fibrilar de proteínas nucléolos ▪ Forma irregular ▪ Síntese do RNAr Nucleoplasma ▪ Substância fluida com solutos dissolvidos 3 4 2 membranas paralelas Barreira ▪ Íons, solutos, macromoléculas ▪ Espaço perinuclear ▪ Poros Nucleares Membrana externa ▪ Polirribossomos aderidos ▪ Contínua com RER Membrana Interna ▪ Proteínas ▪ Lâmina nuclear associada cromatina 5 Rede de fibras proteicas Superfície interna do envoltório nuclear ▪ Suporte mecânico, formação do envoltório ▪ Sítio ligação cromatina fixação ▪ Filamentos de lamina filamentos intermediários ▪ Ligada a receptores na Memb. Nuclear interna Papel na Mitose ▪ Fosforilação ▪ desorganização da membrana nuclear 6 7 Poros nucleares Pontos de fusão entre as membranas nucleares Passagem mRNAs, t RNAs, proteínas, enzimas Núcleo citoplasma Complexo proteico Forma de cesta Simetria octagonal Protrusão para citoplasma e nucleoplasma No e densidade variáveis 8 Estrutura: 3 anéis: ▪ Citoplasmático ▪ Membrana nuclear externa ▪ Fibrilas projetadas citoplasma ▪ Mediano ▪ ptns transmembrana ▪ Bloqueiam a fluidez ▪ Nuclear ▪ Membrana nuclear Interna ▪ Filamentos ▪ Anel distal 9 10 Estrutura: Filamentos anel citoplasmático ▪ Reconhecimento moléculas Arranjo octogonal ▪ 8 partículas Anel distal + filamentos cesta nuclear 11 Complexo do poro mecanismos transporte 1) difusão ▪ Sem gasto de energia ▪ Tamanho máximo 50 kDa ▪ Equilíbrio entre compartimentos 2) difusão facilitada ▪ Interação com moléculas do complexo poro ▪ Sem gasto de energia 12 Complexo do poro mecanismos transporte 3) Importação mediada por sinal ▪ Sinais de localização nuclear (NLS) ▪ Receptores citoplasmáticos medeiam interações com complexo do poro ▪ Fibrilas no anel citoplasmático 4) Exportação mediada por sinal ▪ Depende de interações com poro ▪ Requer sinais de exportação nuclear (NES) ▪ Receptores ▪ Dependente de energia 13 Organização física Cromatina ▪ DNA + Proteínas ▪ Diferentes configurações da molécula ▪ Controle DNA e bases nitrogenadas ▪ Código genético Histonas ▪ Proteínas ligadas ao DNA 14 15 Cromatina Organizada ▪ não sobrepostos ▪ compartimentalizados Locais específicos: ▪ Cromossomo X inativo ▪ Corpúsculo barr ▪ Centrômeros e telômeros ▪ próx. Envoltório Matriz nuclear com rede de filamentos interativos 16 Todas as informações no DNA de um organismo Genoma Sequência de nucleotídeos de 1 gene pequeno ½ página de livro Sequência completa genoma inteiro 1.000 livros de 1.000 páginas Como toda a informação do genoma pode ser compactada em cada núcleo celular? 17 1 célula Toda informação de 1 organismo 1,5 a 2m de DNA 18 Células eucarióticas Cromossomos Moléculas de DNA fita dupla empacotadas ▪ Armazenamento no núcleo ▪ Segregação da informação na divisão celular Empacotamento ▪ Proteínas especializadas ▪ Ligam e dobram DNA Cordões e alças Diferentes níveis organizacionais ▪ Acesso à informação ▪ Replicação ▪ Reparo ▪ Expressão gênica 19 DNA e Histonas: 5 tipos histonas: ▪ H1, H2A, H2B, H3, H4 Octâmero Unidade estrutural básica da cromatina ▪ Nucleossomos 1 cromossomo 1 milhão de nucleossomos Histonas H1 se ligam a região de espaçamento H3 e H4 modificações pós-traducionais ▪ Modificam padrão de armazenamento DNA ▪ Alteram expressão gênica 20 Nucleossomo 8 proteínas histônicas H2A, H2B H3 e H4 Uma fita dupla ~147 pb circundam o octâmero 21 4 histonas do cerne Pequenas proteínas carregadas positivamente (Arginina e Lisina) Ligação com fosfato e açucares Ligação das histonas a regiões inespecíficas do DNA 22 longas caudas N- terminal se estendem para fora do nucleossomo Modificações químicas covalentes Controle da estrutura cromatina 23 24 Fibra de nucleossomo (histonas) - 140 pb Espaçamento: 20-60pb DNA dupla hélice Estrutura condensada em solenoide 25 26 2 cromátides com 10 voltas cada 1 volta c/ 30 rosetas 1 Roseta c/ 6 alças 1 alça com 70.000 pb Fibra de 30 nm Nucleossomos em colar de contas DNA dupla hélice 27 Genoma humano 46 cromossomos contém genes Cromossomo mitocondrial 1 cromossomo 1 molécula contínua e única de DNA Cromatina DNA + proteínas Célula em divisão Condensação DNA Cromossomos ▪ Cromatina altamente condensada ▪ Visível microscopicamente 28 29 Genoma Humano 3,2 x 109 nucleotídeos 1 cél. Humana diplóide ~ 2m de DNA Adulto = 2x1011 Km de DNA Condensação máxima cromatina Divisão celular metáfase Cromossomos 22 pares de cromossomos autossomos 1 par sexual 30 31 Cromossomos Organização funcional não-aleatória de genes Regiões ricas/pobres em genes Anormalidades cromossômicas Em regiões ricas consequências clínicas + graves Projeto Genoma Humano (2003) Organização complexa 3 bilhões pb ▪ < 1,5% proteínas ▪ 5% elementos regulatórios expressão gênica 32 DNA único Sequência de nucleotídeos representados 1 vez 25.000 genes DNA cópia única DNA repetitivo Sequências repetidas ~ 1 milhão de vezes (tandem) ▪ Mantém estrutura cromossômica ▪ Fonte de variação individual (testes DNA) ▪ Controle expressão gênica ▪ Predisposição a eventos patológicos no genoma 33 Sequências em tandem Repetições DNA não codificante DNA satélite 10-15% das sequências DNA repetitivo Agrupadas em centrômeros Região organizadora nucléolo RON ▪ Associada ao nucléolo na prófase ▪ RNA ribossômico 34 Braços curtos e longos Centrômero Divisão celular Ponto de fixação de proteínas ▪ Fuso mitótico ▪ Cópias em tandem ▪ Asseguram a segregação cromossômica correta Telômeros Estabilização da molécula DNA Sequências repetidas 35 Extremidades dos cromossomos 3 a 20 Kb Sequência TTAGGG repetidas Região associada à proteínas Previne fusão dos cromossomos Locais de ligação de proteínas 36
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