AULA 6 - TESTES SOROLOGICOS

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13/05/2025
IMUNODIAGNÓSTICO
TESTES SOROLÓGICOS X TESTES CELULARES
RESPOSTA IMUNE 
ADQUIRIDA
IMUNIDADE 
HUMORAL
ANTICORPOS 
CONTRA M.O. 
EXTRACELULARES E 
TOXINAS
PODEM ATIVAR 
DIFERENTES 
MECANISMOS 
EFETORES
ATIVAÇÃO DO SISTEMA 
COMPLEMENTO
FACILITAM A 
FAGOCITOSE 
(OPSONIZAÇÃO)
LIBERAÇÃO DE 
FATORES 
INFLAMATÓRIOS
MASTÓCITOS
NEUTRALIZAÇÃO
ATIVAÇÃO DOS 
LINFOCITOS NK
IMUNIDADE 
CELULAR LINFOCITOS T CONTRA M.O. 
INTRACELULARES
DESTRUIÇÃO E LISE DAS 
CÉLULAS INFECTADAS 
LINFOCITOS B
IgM
• NEUTRALIZA TOXINAS
• FIXAM COMPLEMENTO
• RECEPTOR DE Ag NOS LINF. B
• PRESENTES NO INÍCIO DA RESPOSTA IMUNE ADAPTATIVA
• PRESENTE NO SORO
• FORMA MONOMÉRICA E PENTAMÉRICA
IgG
• QUATRO SUBCLASSES: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4
• NEUTRALIZA TOXINAS (TODAS)
• FAZEM OPSONIZAÇÃO (IgG1 e IgG3)
• FIXAM COMPLEMENTO (IgG1, IgG2 e IgG3)
• ATRAVESSAM A PLACENTA (IgG2)
• ATIVAM LINFOCITOS NK (IgG1 e IgG3)
• PREDOMINAM NAS RESPOSTAS IMUNES SECUNDÁRIAS
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Características
• Especificidade: Capacidade
de um único sítio
combinatório do anticorpo
reagir com apenas um
epítopo.
• Afinidade: É a força de
ligação entre um único
epítopo e um único sítio
combinatório de anticorpo.
(Afinidade = forças de
atração e repulsão)
Características
IgG IgM• Avidez: É a força de ligação total 
entre um antígeno com muitos 
epítopos e anticorpos 
multivalentes. Portanto, a avidez 
é a medida da estabilidade geral 
dos imunocomplexo entre o 
antígeno e o anticorpo.
Sorologia –
TITULAÇÃO 
Técnicas de imunodiagnóstico
• Teste do Antígeno Acidificado Tamponado (AAT)
• Ensaio de imunoabsorção enzimático/Enzyme-Linked Immunosorbent 
Assay (ELISA);
• Técnica de fixação do complemento (TFC);
• Western Blotting (WB);
• Reação de imunofluorescência indireta (RIFI);
• Imunodifusão em gel de ágar (IDGA)
• Imunocromatográfico.
• Testes celulares 
TESTE DO ANTÍGENO ACIDIFICADO TAMPONADO 
(AAT) OU TESTE DE ROSA BENGALA (RBT)
• Sensibilidade variável com a temperatura;
• Falsos-positivos pela vacinação e reações cruzadas;
• IgG.
Fonte: Arquivo PessoalFonte: Arquivo Pessoal
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ELISA
A detecção da reação antígeno-anticorpo ocorre por meio
da conjugação de um desses componentes com uma
enzima que age sobre um substrato alterando a coloração
do meio, que pode ser mensurada por auxilio de
espectrofotometria.
• ELISA indireto (i)
• ELISA direto (d)
• ELISA competitivo (c) 
ELISAi
• UTILIZAÇÃO DO SORO TESTE (Ac) + UM ANTI-
ANTICORPO CONJUGADO A UMA ENZIMA.
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
ELISAd
• DETECÇÃO DIRETA DO ANTÍGENO NA AMOSTRA
Fonte: Arquivo Pessoal
ELISAc
• UTILIZAÇÃO DE UM ANTICORPO CONJUGADO A ENZIMA JUNTO COM 
O SORO TESTE (Ac) EM UMA PLACA CONTENDO ANTÍGENO.
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
ESPECTROFOTOMETRIA 
Fonte: Arquivo Pessoal
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ESPECTROFOTOMETRIA 
Fonte: Arquivo Pessoal
ESPECTROFOTOMETRIA 
Fonte: Arquivo Pessoal
• Detecção da interação antígeno-anticorpo;
• Detecção de proteínas imunoespecíficas;
• Ferramenta para a tomada de decisões e
interpretações a respeito do resultado
muito mais eficiente (KIM et al., 2014).
Western Blotting
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Ko et al (2012).
Identificação das bandas em gel
Fonte: Arquivo Pessoal
MOPS RUNNIG 
Buffer
Fonte: Arquivo Pessoal
Identificação das bandas em gel
Fonte: Arquivo Pessoal
Coloração por prata (SilverXpress®)
Fonte: Arquivo Pessoal
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Produção das membranas
3x de 20min
Membrana após 
transferência 
Membrana cortada 
após lavagens 
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Execução do ensaio
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Leitura
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Teste de Fixação do Complemento – TFC 
• M’Fadyean & Stckman,
1909;
• Teste confirmatório;
• Possui o emprego de
vários antígenos;
d
i
l
u
i
ç
ã
o
AC
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
FIXAÇÃO DO COMPLEMENTO
=>
=
Ag SORO POSITIVO COMPLEMENTO HEMÁCIA
HEMOLISINA SORO NEGATIVO
= LISE DAS 
CÉLULAS
Fonte: Lanagro-PE
= DEPOSITO DE 
CÉLULAS
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Imunodifusão em gel de ágar
A técnica de IDGA baseia-se na migração radial dupla de
antígeno (Ag) e anticorpo (Ac), através da agarose. O
encontro dos reagentes, em proporções ótimas, leva à
formação de complexos Ag-Ac insolúveis que precipitam,
tornando-se visíveis sob a forma de uma linha ou banda de
precipitação.
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Fonte: Arquivo Pessoal
Teste do anel do leite - TAL
• Detecção de IgA
• Produz reação falso positiva: 
leite ácido, 
colostro e 
leite mastítico
POSITIVONEGATIVO
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SOROALGUTINAÇÃO LENTA EM TUBOS (SAT) e 
TESTE DE 2-MERCAPTOETANOL (2-ME)
• Realização em paralelo
• SAT detecta IgM e IgG e 2-ME 
detecta IgG
• Alta especificidade
• Reação falso-positiva com Ac da 
vacinação
Imunocromatográfico
Apesar do nome complicado, o conceito por trás
do exame é simples. O teste Imunocromatográfico
é um tipo de teste rápido que identifica doenças
infecciosas, hormônios e outros analitos,
por associação específica a anticorpos com
partículas coloridas conjugadas.
Tuberculinização
• Teste da prega caudal – TPC
• Teste cervical simples – TCS
• Teste cervical comparativo – TCC
Departamento de Defesa Animal -
SDA - MAPA
http://www.extension.umn.edu/beef/components/pdfs/cowcalfdays06/BovineTuberculosis.pdf
Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
Teste da Prega Caudal – (TPC)
Inoculação de PPD Bovino
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Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
Reação tuberculínica positiva em bovino.
Teste da Prega Caudal – (TPC)
Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
tricotomia
Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
Medida da Espessura da Dobra da Pele (em mm)
Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
Inoculação intradérmica de PPD: formação de pápula
Departamento de Defesa Animal - SDA -
MAPA
Reação Tuberculínica Positiva em Bovinos
Maleinização
1° teste a ser utilizado a campo na década de
1980;
Reação retardada de hipersensibilidade com
alta especificidade;
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Quando solicitar um exame sorológico?
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