Rotina de Histopatologia Veterinária

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15/08/2025
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Anatomia Patológica Veterinária 
Métodos de Estudos em Patologia
Medicina Veterinária
Prof. Dr. Claudinei da Cruz
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Métodos de Estudo
Compartimertalização 
Biológica
• Organização de 
estruturas e processos em 
células e organismos em 
regiões distintas, 
permitindo que certas 
reações e funções ocorram 
de forma mais eficiente e 
especializada
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ESTRUTURA CELULAR 
HISTÓRICO
Robert Hooke – 1665 – “Eu 
peguei um bom pedaço claro 
de cortiça e, com um estilete 
tão afiado como uma 
navalha, cortei um pedaço e 
então, examinando-o no 
microscópio, eu pude 
perceber que parecia poroso, 
mais semelhante a um “favo 
de mel”
• Celas = Células
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ROTINA DE 
HISTOPATOLOGIA
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Eutanásia
Coleta de 
amostra
Fixação
Manutenção 
em Álcool 
70%
Emblocagem (3 
fases)
5.1. 
Desidratação 
5.2. 
Clarificação 
(Xilol)
5.3. Em bebição (parafina, 
parafina plástica ou 
historesin
6. Microtomia
7. Coloção ou 
reações 
histoquíquimicas
FASES DA ROTINA 
DE 
HISTOPATOLOGIA
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Método de eutanásia - espécie 
envolvida, a idade e o estado fisiológico 
dos animais, meios disponíveis para a 
contenção, a capacidade técnica e o 
número de animais
1. Compatível com os fins desejados 
e embasado cientificamente
2. Seguro para quem o executa
3. Realizado com o maior grau de 
confiabilidade possível
(comprovação da morte do animal)
4. Aprovado institucionalmente na 
Comissão de Ética no Uso de Animais 
(CEUA), no caso de fins científicos
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Eutanásia e Coleta de amostras
Benzocaína
Ethyl 3-aminobenzoate 
methanesulfonate – MS-222
Eugenol ou óleo de cravo (guaiacol 
substituído por uma cadeia de alil) 
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Fixação
Critérios
Intervalo mínimo entre coleta e a fixação (1 a 2h)
Volume do fixador - mínimo 10x maior que o volume da 
amostra (peça)
Fixadores são substâncias químicas que mantém a 
integridade dos tecidos após a morte
1. Inibir ou parar a autólise (8 a 12 h)
2. Impedir a atividade e proliferação bacteriana
3. Coagulacão e tornar difusíveis as substâncias 
insolúveis
4. Preservar e endurecer os tecidos a fim de que 
resistam as etapas seguintes da técnica
5. Para melhorar a diferenciação ótica dos tecidos
6. Facilitar a coloração ou reação histoquímica
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1. Formaldeído (solução aq. 10% 
ou tamponada a 0,1M; pH 7,2; Sol. 
aq. A 4%)
Amplamente utilizada para fixação 
de rotina
Tamponada neutra é preferida para 
preservar a morfologia e evitar a 
formação de pigmentos
2. Glutaraldeído
Mais potente que a formalina, 
usado para preservar a 
ultraestrutura celular e tecidual 
(M.E.T ou M.E.V)
3. Paraformaldeído
Penetrante mais eficiente e rápido
Fixadores Aditivos
Interagem 
quimicamente com 
as moléculas do 
tecido, tornando-se 
parte integrante dele
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Fixadores coagulantes
Removem a água dos tecidos, 
causando a coagulação e 
desnaturação das proteínas
1. Álcoois (etanol e metanol)
Rápidos, usados em algumas 
técnicas especiais e para cortes 
congelados
2. Ácido acético (CH₃COOH)
Usado em conjunto com outros 
fixadores para melhorar a 
preservação de estruturas nucleares
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Fixadores complexos
São soluções que combinam diferentes 
compostos químicos para obter 
resultados específicos
1. Solução Sat. de Bouin (ácido pícrico, 
formaldeído e ácido acético)
Bom para preservar a morfologia de 
tecidos moles, mas pode causar retração 
excessiva
2. Fixador de Zenker (cloreto de 
mercúrio, formaldeído e ácido acético)
Tecidos hematopoiéticos e 
reticuloendoteliais, mas pode causar 
retração 
Descarte cuidadoso devido ao mercúrio
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Emblocagem 
Processo de inclusão de tecidos em um 
bloco de parafina para facilitar o corte
Etapas da emblocagem
1. Desidratação
Água do tecido é removida 
gradualmente com álcool (70,%a 
100,0%)
2. Clarificação ou Diafanização
Álcool é substituído por xilol (prepara o 
tecido para a penetração da parafina)
3. Inclusão
Tecido é infiltrado com parafina líquida, 
(preenche os espaços intercelulares)
4. Bloco
Parafina com o tecido é resfriada para 
solidificar (bloco sólido – corte)
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Microtomia
Consiste basicamente em 
obter cortes sucessivos dos 
blocos de parafina contendo 
fragmentos de órgão
Lâminas descartáveis
Ideal – 3,0 a 5,0 µm
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Coloração 
Processo essencial para 
visualização e estudo de 
tecidos e células sob o 
microscópio
Corantes (material biológico 
após o preparo é incolor)
Diferenciar suas estruturas e 
componentes
Técnica mais comum é a 
coloração com hematoxilina e 
eosina (H&E)
(detalhes intracelulares e 
extracelulares)
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Coloração H&E é a técnica 
mais utilizada em histologia e 
patologia
Hematoxilina
Corante básico que marca as 
estruturas basófilas (ácidas) 
(núcleo celular, em tons de 
azul ou roxo)
Eosina
Corante ácido que marca as 
estruturas acidófilas (básicas) 
(citoplasma, em tons de rosa 
ou vermelho)
Hematoxilina
Eosina
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Figura 1. Coloração H&E para caracterização 
histopatológica de tumores cerebrais (20x)
A seta indica a área de morte celular (tumor foi 
caracterizado com base no exame microscópico)
A: tecido cerebral normal (NBT)
B: ganglioglioma infantil desmoplásico (DIG)
C: meningioma de transição (TMG)
 D: ependimoma (END)
E: astrocitoma anaplásico (APA)
F: glioblastoma multiforme (GBM)
Molecular evidence of apoptotic
death in malignant brain tumors
including glioblastoma 
multiforme: Upregulation of
calpain and caspase-3. 2002. J. of
Neuroscience Research
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Azul de toluidina
Corante metacromático 
básico (propriedade de 
mudar de cor 
(metacromasia) ao se ligar a 
certas estruturas do tecido
Afinidade por componentes 
ácidos do tecido (DNA e 
RNA)
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1. Tumores (mastocitomas e linfomas)
2. Identificar displasias epiteliais e carcinomas
3. Delimitação de margens de tecidos 
neoplásicos
4. Análise de cromatina espermática (antígenos 
de Toxoplasma gondii)
5. Análise de DNA em Swabs vaginais e 
espermático 
6. Avaliação transoperatória de margens em 
mastocitoma Canino
7. Identificação de mastócitos e grânulos de 
heparina
8. Identificação de mastócitos (células que 
liberam histamina e outras substâncias 
inflamatórias)
9. Mucinas (glicoproteínas presentes em 
secreções mucosas)
10. Coloração de cartilagem
11. Detecção de displasias e carcinomas na 
cavidade oral
12. Delimitação de margens de tecidos 
neoplásicos e avaliação de recidivas tumorais
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Tricromicos de 
Masson e de 
Mallory
Utilizados para 
visualizar fibras 
colágenas em 
tecidos 
conjuntivos e 
musculares
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Ácido periódico de Schiff (PAS)
Reação histoquímica - identificar 
substâncias ricas em carboidratos 
(glicogênio, mucinas e glicoproteínas) 
1. Oxidação
Ácido periódico oxida seletivamente 
as ligações 1,2-glicol em moléculas 
de carboidratos, convertendo-as em 
aldeídos
2. Reação com o Reagente de Schiff
Fucsina sulfurosa reage com os 
aldeídos (composto corado de 
magenta - roxo-avermelhado)
3. Contracoloração
Contracoloração com hematoxilina 
(núcleos celulares e facilitar a 
visualização do tecido)
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Identificação de fungos
Identificar e visualizar fungos em 
amostras de tecido, pois cora as 
paredes celulares dos fungos
Detecção de glicogênio
Glicogênio em tecidos como o fígado, 
músculo esquelético e cardíaco 
distúrbios do metabolismo do 
glicogênio)
Identificação de mucinas
Detectar mucinas (um tipo de 
glicoproteína) em tecidos, o que pode 
ser importante no diagnóstico de 
certas doenças
Auxílio diagnóstico
Diagnóstico de doenças (deficiência 
de alfa-1 antitripsina no fígado)
Intestino delgado, adenocarcinoma de células. 
Note-se os ácinos com células epiteliais contendo 
pleomorfismo intenso, núcleos vesiculares com 
nucléolo evidente, variando de polígonos 
alongados com citoplasma esparso e eosinofílico, 
muitos com grandes vacúolos que deslocam o 
núcleo para a periferia.
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Intestino delgado, canino, 
macho. PAS. 
Parte do órgão não 
acometida pelo neoplasma, 
evidenciando asvilosidades 
com as células caliciformes 
marcadas fortemente pelo 
PAS devido a presença de 
mucinas
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Azul de Alcian (pH 
0,5 e 2,5)
Reação 
histoquímica para 
identificar 
mucopolissacaríde
os ácidos e 
mucinas sulfatadas 
em tecidos
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Métodos de Estudo em Patologia
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Exame 
Macroscópico
Análise visual e tátil 
de órgãos e tecidos, 
observando 
tamanho, forma, 
cor, textura e lesões
Métodos de Estudo em Patologia
Úlcera abomasal –
bovino. Mucosa 
apresenta congestão 
grave
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Edema do abomaso bovino (Enterite 
infecciosa)
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Exame Microscópico
Análise de tecidos e 
células ao microscópio, 
utilizando corantes e 
técnicas de coloração 
para identificar 
alterações 
morfológicas
Métodos de Estudo em Patologia
Mycobacterium avium – Íleo Bovino
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Aspergilose – Pulmão de aves
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Citopatologia
Estudo de células soltas, 
obtidas por raspados, 
punções ou outros 
métodos, para identificar 
alterações celulares
Métodos de Estudo em Patologia
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Amostras citológicas e 
histopatológicas tumores 
mamários caninos (CMTs
benignos)
Esfregaços citológicos (Giemsa)
Histopatológico (hematoxilina e 
eosina)
Hiperplasia lobular (A, B–
citologia; C–histopatologia), as 
setas indicam fendas de 
colesterol; Complexo de 
adenomas (D, E–citologia; F–
histopatologia); Tumor misto 
benigno (G, H–citologia; I–
histopatologia), uma seta indica 
a matriz extracelular, uma 
inserção no canto inferior 
esquerdo da Fig. 1H mostra 
osteoclasto. 
(A, C, D, F, G, I) 100x; (B, E, H) 
400x.
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Sistema de classificação de 
Robinson’s (CMTs)
Grau 1 - Células neoplásicas 
uniformes num aglomerado 
(A), com membrana nuclear 
lisa, cromatina vesicular e 
nucléolos indistintos (D). -
Grau 2 - Células ligeiramente 
pleomórficas (B), com 
nucléolos visíveis, margem 
nuclear ligeiramente irregular 
e cromatina granular (E). Grau 
3 - Células pleomórficas num 
aglomerado frouxo (C), com 
nucléolos proeminentes, 
membrana nuclear irregular e 
branqueamento da cromatina 
(F). (Giemsa) (A, B, C) 400x; 
(D, E, F) 1000x.
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Citologia (40x) e histopatologia (40x) 
da massa tumoral (coloração de 
Giemsa e H&E) (A) Células 
pleomórficas redondas a ovoides, 
núcleos ovoides anfofílicos
moderados a grandes, citoplasma 
basofílico pálido abundante e 
vacuolado
(B) Células pleomórficas redondas a 
ovoides, núcleos redondos a ovoides 
excêntrica e centricamente
anfofílicos
(C) Células pleomórficas redondas a 
ovoides dispostas num padrão de 
bainha sólida, nucléolos anfofílicos e 
um citoplasma pálido claro
(D) Citoplasma pálido moderado e 
núcleos redondos a ovoides 
anfofílicos. Barra = 25 µm.
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Métodos de Estudo em 
Patologia
Imuno-histoquímica
Técnica que utiliza anticorpos para 
identificar marcadores específicos 
em tecidos, auxiliando no 
diagnóstico de doenças
Linfoma (linfoma maligno, linfossarcoma, 
leucose linfoide)
Linfoma de células T
Identificação da linhagem de células 
tumorais por imunohistoquímica. Cão. 
Coloração de imunoperoxidase para CD3
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Métodos de Estudo em 
Patologia
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Reação em Cadeia da 
Polimerase (PCR)
Técnica de biologia 
molecular que amplifica 
sequências específicas 
de DNA ou RNA
Detecção de patógenos 
ou alterações genéticas
Métodos de Estudo em Patologia
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Detecção por PCR do rearranjo do 
gene LINE1-c-myc de origem CTVT 
(Tumor venéreo transmissível canino) 
amostras de PAAF derivadas de 
células
Produtos de PCR (550 pb) - gel de 
agarose a 1,5% (m/v). (
Faixa 1 = marcador de ADN de 100 pb
Faixa 2 = controlo positivo
Faixa 3 = controlo negativo
Faixas 4 a 9 são amostras de massa 
vaginal (caso 1), massa cutânea 
(caso 2), massa nasal (caso 7), 
massa nasal (caso 8), massa nasal 
(caso 11) e tecido com inflamação 
crónica (caso 9)
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Métodos de Estudo em 
Patologia
Microscopia Eletrônica de 
Transmissão
Técnica que utiliza feixes de 
elétrons para ampliar imagens de 
tecidos e células, permitindo uma 
análise ultraestrutural detalhada
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Microscopia eletrónica de 
transmissão
a) Epiderme, mostrando 
células de Langerhans
(LC). 4 μm; b) LC na 
epiderme adjacente ao 
histiocitoma cutâneo 
canino, exibindo 
extensões entre os 
queratinócitos. 4 μm; c)
Cristas epidérmicas, 
onde se podem observar 
grupos de LC. 4 μm; d)
relação íntima das 
células tumorais com a 
junção dermoepidérmica. 
5 μm. Cão
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e) Região superficial do 
CCH, as células 
tumorais estão 
frouxamente 
organizadas. 10 μm; f) 
regiões mais profundas, 
as células tumorais 
formam áreas sólidas 
com estroma escasso. 
Núcleos irregulares, por 
vezes com nucléolo 
proeminente. 10 μm; g)
citoplasma da célula 
tumoral (organelas 
citoplasmáticas) 1 μm; 
h) citoplasma da célula 
tumoral (vesículas 
pleomórficas). 2 μm.
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Autópsia (Necropsia)
Exame completo do corpo 
após a morte, com o 
objetivo de determinar a 
causa da morte e investigar 
alterações patológicas
Métodos de Estudo em Patologia
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Métodos de Estudo 
em Patologia
Patologia Cirúrgica
Análise de tecidos e 
órgãos removidos 
cirurgicamente, com o 
objetivo de 
diagnosticar doenças e 
fornecer informações 
para o tratamento
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Métodos de Estudo em 
Patologia
Cultura de Células
Técnica que permite o 
cultivo de células em 
laboratório, auxiliando 
no estudo de doenças e 
no desenvolvimento de 
novos tratamentos
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Métodos de Estudo 
em Patologia
Anamnese e Exame Físico
Avaliação do histórico do 
paciente e exame físico para 
obter informações relevantes 
sobre a doença
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Métodos de Estudo em 
Patologia
Exames Complementares
Realização de exames 
laboratoriais (bioquímica, 
hematologia, microbiologia) 
para auxiliar no diagnóstico
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DIANÓSTICO HISTOPATOLÓGICO GERAL
Hiperplasia mieloide
Medula óssea, área diafisária
média do fémur
Aumento do número de 
células mielóides imaturas 
(mieloblastos e 
megacariocitoblastos), 
poucos normoblastos
Leucocitose devido a 
infecção. Gato adulto.
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Coagulação intravascular 
disseminada (CID)
Rim. Capilares glomerulares 
obstruídos por microtrombos 
hialinos (plaquetas e fibrina), 
provocando oligúria ou anúria. 
Cilindros proteicos no espaço 
de Bowman e na maioria dos 
túbulos. Gotículas hialinas, 
devido à pinocitose proteica 
no citoplasma tubular (seta). 
A necrose tubular aguda 
ocorre frequentemente 
durante a CID (Trypanosoma 
brucei) Coelho. HE
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https://archive.org/details/ColorAtlasOfVete
rinaryPathology2ndEdJ.VanDijkEtAl.Saund
ers2007WW/page/n9/mode/2up
Involução linfóide associada 
à doença (atrofia)
Linfonodo periférico. Áreas 
corticais e paracorticais
relativamente pobres em células 
contendo números aumentados 
de macrófagos (hipertróficos), 
vários dos quais formaram 
células gigantes sinciciais 
(setas). Infeção por circovírus: 
síndrome de emagrecimento 
multissistémico (PMWS). Porco, 
com 3 meses. HE.
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Linfonodo mesentérico (Linfadenite 
granulomatosa crónica) 
Aumento da região cortical por
hiperplasia linfóide paracortical e
infiltração por células epitelióides.
Paratuberculose (Mycobacterium
avium)
Infiltração de grupos de células epitelióides
(macrófagos grandes, citoplasma com 
coloração clara) no paracórtex (esquerda). 
Inserção: bacilos corados de vermelho nas 
células epitelióides. Paratuberculose
(Mycobacterium avium) Cabra. HE e 
coloração de Ziehi-Neelsen
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Linfonodo mandibular - Linfadenite 
piogranulomatosa crónica
Cápsula fibrosa em redor de tecido 
granulomatoso, mole, amarelo-
acinzentado e saliente, contendo 
múltiplos pequenos abcessos. 
Actinobacilose (Actinobaciilus
lignieresii). Bovino
Abcesso miliar na linfadenite 
piogranulomatosa
Colônia de bactérias corada a azul) 
com bordo periférico vermelho regular 
de placas eosinofílicas rodeadas por 
macrófagos e neutrófilos viáveis e 
necróticos(pus). HE.
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Baço - Depleção dos folículos e da bainha 
linfóide periarterial (PALS)
Área da polpa branca em redor da artéria 
central com ausência de números normais 
de linfócitos T e linfócitos B. Polpa vermelha 
normal. Síndrome de Fell-Pony. Cavalo. HE.
Baço - Polpa vermelha. Hiperplasia 
reticuloendotelial acentuada
Macrófagos contendo hemossiderina nas 
cordas de Billroth. 
Infecção experimental por Trypanosoma 
brucei
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Baço. Linfoma (linfoma maligno, 
linfossarcoma, leucose linfóide)
Esplenomegalia extrema, rosa-
acinzentada com zonas vermelho-escuras 
locais (hemorrágicas ou menos 
leucóticas). Cachorro
Linfoma (linfoma maligno, 
linfossarcoma, leucose linfoide)
Bursa de Fabrício. Folículos substituídos 
por linfoblastos tumorais
Perturbação linfoproliferativa causada por 
RNA-vírus. HE. (Aves) HE
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Baço. Mielose eritrémica
(leucose eritroide)
População tumoral é 
constituída por células 
grandes com núcleos 
grandes, a maioria 
provavelmente 
eritroblastos e células 
pequenas com núcleos 
hipercromáticos e 
citoplasma vermelho 
(síntese de 
hemoglobina). Gato. HE.
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Linfonodo periférico -
Metástase de tumor de 
mastócitos
Células tumorais livres nos seios 
subcapsulares e 
paratrabeculares distendidos, 
mostrando a filtragem (ineficaz) 
das células neoplásicas Dois 
focos de células tumorais 
metastáticas sésseis (bordas 
superior e inferior)
Disseminação de tumor primário 
de mastócitos na pele
Cão. Coloração com azul de 
toluidina para grânulos 
metacromáticos de mastócitos
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Fígado. Leucemia 
mieloide
Infiltração portal de 
numerosas células 
mielóides, imaturas 
ou em diferenciação 
para granulócitos 
eosinofílicos
Formação de 
massas tumorais 
Suíno. HE.
56
Obrigado pela 
atenção!!!
57