Temperamento e Ordenha em Vacas

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Discentes: Katharina de Paula Pinheiro Coelho Feitosa
 Raíssa Elizabeth
1) temperamento ou 2) resposta comportamental aos humanos podem afetar o comportamento, a fisiologia e a produtividade de vacas leiteiras sendo ordenhadas em um ambiente de ordenha familiar e novo. 
 O temperamento de vacas multíparas foi definido com base no tempo de saída de um dispositivo de contenção, como High Responders (HR; n = 10), Medium Responders (MR; n = 10) ou Low Responders (LR; n = 10). A resposta comportamental das vacas aos humanos foi avaliada usando quatro testes: contenção, velocidade de saída, teste de distância de evitação e um teste de aproximação voluntária. 
 As vacas foram ordenhadas de acordo com suas rotinas estabelecidas em uma sala de ordenha rotativa (familiar) e dados comportamentais, fisiológicos e de produção foram coletados ao longo de cinco dias consecutivos, incluindo frequência cardíaca, concentrações de cortisol e ocitocina e produção de leite.
Na semana seguinte, as vacas foram ordenhadas em um ambiente novo (sala de ordenha espinha de peixe dentro da mesma instalação da fazenda) ao longo de cinco dias consecutivos, e o programa de coleta de dados e amostras foi repetido. As vacas receberam então um desafio com hormônio adrenocorticotrófico exógeno (ACTH) para medir a responsividade adrenal
.
O tempo de saída foi negativamente correlacionado com as respostas comportamentais das vacas à contenção e à distância de evitação humana (HAD) no pasto e na arena. A resposta comportamental das vacas ao processo de ordenha foi maior em vacas MR do que em vacas LR e HR nos ambientes de ordenha familiares e novos. 
A produção de leite foi maior em vacas LR do que em vacas HR na sala de ordenha nova, mas não na sala de ordenha familiar. 
As concentrações de ocitocina aumentaram durante a ordenha no ambiente novo, independentemente do temperamento da vaca. 
Nos ambientes familiares e novos, as frequências cardíacas foram maiores em vacas HR do que em vacas LR antes e durante a ordenha e o rMSSD foi menor em vacas HR durante a ordenha em um ambiente novo. 
Não houve diferença nas concentrações de cortisol entre vacas LR e HR em resposta a um desafio com ACTH, mas as vacas HR apresentaram níveis basais de cortisol mais altos do que as vacas LR. 
O número de elevações de perna que as vacas realizaram quando contidas no esmagamento foi associado a várias medidas fisiológicas e de produção de leite. Esses resultados indicam que vacas com temperamentos diferentes variam em sua fisiologia basal, bem como em suas respostas comportamentais e fisiológicas à ordenha e ao estresse associado à ordenha em um ambiente novo.
Introdução
Para ajudar a explicar as diferenças comportamentais e fisiológicas consistentes observadas entre os indivíduos em resposta a um fator estressante ou desafio ambiental, os pesquisadores têm comumente usado os termos personalidade, temperamento e estilo de enfrentamento.
O termo temperamento é frequentemente usado para descrever as diferenças relativamente estáveis ​​na predisposição comportamental de animais e bebês pré-verbais, que podem estar relacionadas a mecanismos psicobiológicos. 
Alternativamente, o termo personalidade parece ser reservado para os padrões comportamentais adquiridos e estáveis ​​encontrados apenas em organismos com capacidades cognitivas sofisticadas. 
Fonte: Google imagem.
Materiais e métodos
 Animais
Trinta vacas leiteiras, multíparas, prenhes, cruzadas com a raça frísia foram selecionadas para este estudo. 
As vacas tinham em média cinco anos de idade. 
O estudo foi conduzido durante o final da lactação (média de 268 dias em lactação) de abril a maio de 2010 em uma fazenda de pesquisa perto de Hamilton, Nova Zelândia.
 Todas as vacas estavam sendo ordenhadas uma vez por dia durante o período do estudo.
 Todos os procedimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal de Ruakura sob o Ato de Bem-Estar Animal da Nova Zelândia de 1999.
Fonte: Google imagem.
Procedimentos gerais e desenho experimental
1. Teste comportamental
Trinta vacas foram submetidas a testes de contenção, velocidade de saída e distância de evitação humana (HAD) tanto no paddock quanto em uma arena, e teste de aproximação voluntária (VA) na arena, antes do início do experimento.
 Todos os testes comportamentais foram conduzidos entre 10h e 14h e os testes foram realizados em dias consecutivos. Os mesmos três tratadores estavam envolvidos em todos os testes comportamentais ao longo do estudo.
O teste de contenção foi realizado movendo uma vaca para uma rampa de compressão (esmagamento). Uma vez que o portão de entrada foi fechado atrás da vaca, os lados do dispositivo foram ajustados para que apenas tocassem os lados da parte mais cheia do abdômen da vaca. Cada vaca foi mantida no esmagamento por 2 minutos antes de ser liberada. 
O número total de elevações de cascos (cascos dianteiros e traseiros) ocorrendo durante o período de contenção foi registrado. Antes de abrir o portão de saída, os lados do esmagamento foram movidos mais afastados para não impedir a capacidade da vaca de sair.
Procedimentos gerais e desenho experimental
1. Teste comportamental
O tempo que cada vaca levou para sair do esmagamento e percorrer uma distância fixa foi registrado usando um dispositivo de medição de velocidade de saída especialmente desenvolvido. 
A unidade era composta por dois feixes de luz e refletores, e uma unidade de leitura. O primeiro feixe de luz foi instalado do lado de fora do portão de saída do esmagamento e o segundo feixe de luz foi instalado a 2,25 m do primeiro feixe de saída. Ambos os feixes foram instalados a 0,8 m acima do nível do solo para que fossem acionados pelo corpo da vaca ao sair do dispositivo de contenção. 
Depois que a vaca passou por ambos os feixes de luz, o tempo de saída foi registrado em segundos pela unidade de leitura. Os tratadores ficaram a aproximadamente 1 m de distância da lateral do esmagamento e atrás do ombro do animal durante os testes de contenção e velocidade de saída.
Procedimentos gerais e desenho experimental
1. Teste comportamental
O teste HAD foi realizado no pasto por duas pessoas treinadas que inicialmente não conheciam as vacas. O teste foi realizado duas vezes por ambas as pessoas, com 4 dias de intervalo, e a distância média do HAD foi calculada para cada vaca. 
Para realizar o teste, a pessoa faria contato visual com a vaca focal diretamente na frente do animal e a aproximadamente 10 m de distância. A pessoa então se aproximava do animal, a uma velocidade de aproximadamente 0,5 m/s, com um braço estendido a 20 a 30 cm do corpo, com a palma da mão e os olhos voltados para baixo. Quando o animal focal começava a se afastar da pessoa, a pessoa parava imediatamente, recuava a uma distância de 10 m e então repetia o processo. 
A distância do HAD foi registrada como a distância de onde a pessoa estava, quando a vaca se movia na segunda abordagem, até o casco dianteiro mais próximo da vaca, pouco antes de se afastar. A distância foi medida usando passadas de 1 m (calibradas no início de cada dia de teste) até o 0,5 m mais próximo.
Procedimentos gerais e desenho experimental
1. Teste comportamental
Para realizar o teste VA na arena, um animal focal foi movido para uma arena cercada (7 × 5 m) onde uma pessoa já estava sentada em uma cadeira na extremidade mais distante. 
O piso da arena (concreto) foi marcado em incrementos de 1 m (zonas) da frente da pessoa sentada. O animal focal não conseguiu ver outros animais durante o período de teste. Durante o período de teste, a pessoa sentou-se parada em uma pose não agressiva (olhos baixos, palmas das mãos no colo) e a aproximação da vaca em direção à pessoa parada foi observada pelos próximos 5 min. 
A zona mais próxima, em relação à pessoa sentada, na qual a vaca ficou em pé por mais de 2 s foi registrada. Na conclusão do teste VA, apessoa sentada levantou-se lentamente, fez contato visual com a vaca e então se aproximou dela usando o mesmo protocolo que foi usado para o teste HAD no paddock, exceto que a vaca foi abordada pela pessoa apenas uma vez e de onde ela estava sentada, independentemente da posição da vaca. 
A distância HAD foi registrada como a distância de onde a pessoa estava, quando a vaca se moveu, até o casco dianteiro mais próximo da vaca, pouco antes de se afastar.
Procedimentos gerais e desenho experimental
2. Classificação das vacas
O temperamento da vaca foi categorizado com base em seus tempos de saída do esmagamento. Vacas com um tempo de saída de mais de 4 s foram denotadas como Low Responders (LR; n = 10), entre 2 e 4 s foram denotadas como Medium Responders (MR; n = 10) e menos de 2 s foram denotadas como High Responders (HR; n = 10).
Procedimentos gerais e desenho experimental
3. Resposta ao ambiente de ordenha
Dados de comportamento, fisiologia e produção de leite foram coletados durante um período de 5 dias, no qual as vacas foram ordenhadas de acordo com as rotinas normais em uma sala de ordenha rotativa uma vez por dia. 
Todas as vacas estavam familiarizadas com a sala de ordenha rotativa, então os dados coletados durante esse período foram usados ​​para fornecer valores de referência. 
Durante a fixação do grupo de ordenha, as vacas receberam uma pontuação geral com base no desempenho dos comportamentos de estremecer, pisar e/ou chutar (FSK) usando uma escala de 4 pontos (1 = nenhum movimento do pé traseiro, a vaca pode estremecer, tremer ou não fazer nada; 2 = perna traseira levantada não mais do que 20 cm, passo ou arrastar de uma perna traseira; 3 = perna traseira levantada mais do que 20 cm, passo ou chute para frente de uma perna traseira; 4 = chute para trás da perna traseira). A ordem em que as vacas entraram na sala de ordenha também foi registrada.
Procedimentos gerais e desenho experimental
3. Resposta ao ambiente de ordenha
No terceiro dia de teste de linha de base, todas as vacas receberam ocitocina para medir o volume de leite residual. Quando as vacas terminaram a descida do leite, o conjunto de ordenha foi removido e 2 mL (40 unidades USP) de ocitocina (Butocin™, Bomac Laboratories Ltd, Auckland, Nova Zelândia) foram injetados intramuscularmente. Um minuto após a injeção, o conjunto de ordenha foi recolocado e o volume de descida do leite residual foi registrado.
Amostras de sangue foram coletadas através dos vasos coccígeos na cauda imediatamente antes e depois da ordenha no segundo e quinto dia do período de referência para análise das concentrações de cortisol e ocitocina.
 Antes da ordenha, todas as vacas experimentais foram levadas para uma área de espera e contidas como um grupo. Várias pessoas coletaram simultaneamente amostras de sangue de todas as vacas para minimizar o tempo de contenção. Imediatamente após saírem da sala de ordenha após serem ordenhadas, as vacas foram movidas para uma área de espera e a amostra de sangue pós-ordenha foi coletada. 
Procedimentos gerais e desenho experimental
3. Resposta ao ambiente de ordenha
Amostras de soro foram analisadas para concentrações de cortisol usando um kit comercial de radioimunoensaio (Siemens Cortisol-A-Count® Kit, Cruinn Diagnostics Ltd., Dublin, Irlanda). Amostras de plasma foram analisadas para concentrações de ocitocina usando um kit comercial de imunoensaio enzimático (Assay Designs, Ann Arbor, MI).
Intervalos contínuos entre batimentos (IBI) foram registrados 30 minutos antes da ordenha e durante a ordenha usando monitores de frequência cardíaca Polar (S810i™, Polar Electro Oy, Helsinki, Finlândia). 
A frequência cardíaca foi registrada duas vezes em cada semana experimental para cada vaca. A frequência cardíaca foi medida em cada vaca durante o primeiro e terceiro dia de ordenha ou o segundo e quarto dia de ordenha, pois não era logisticamente possível medir a frequência cardíaca em todas as vacas nos mesmos dias. 
Procedimentos gerais e desenho experimental
3. Resposta ao ambiente de ordenha
Dois dias antes de serem ordenhadas na sala de ordenha familiar, as vacas foram contidas em um esmagamento e eletrodos de fio de prata (AS 826–32, Cooner Wire, Chatworth, CA) foram inseridos subcutaneamente em dois locais para melhorar a condutividade dos monitores de frequência cardíaca. 
O pelo foi aparado e a pele desinfetada antes da inserção do fio atrás do ombro (distal à cernelha) e diretamente atrás da perna dianteira perto do peito.
 O fio foi enfiado em uma agulha de 18 g que foi gentilmente empurrada através de uma dobra de pele.
 O fio foi então empurrado através do eixo da agulha e a agulha removida, deixando o fio no lugar e as pontas foram então unidas para formar um laço. 
Esses fios permaneceram nas vacas durante o curso do estudo.
Procedimentos gerais e desenho experimental
4. Desafio do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH)
Duas semanas após a conclusão do teste no novo ambiente, as vacas LR e HR receberam um desafio com ACTH. Os desafios com ACTH foram distribuídos por 3 dias por razões logísticas. Vinte e quatro horas antes do desafio com ACTH, as vacas foram contidas em um esmagamento e um cateter jugular foi inserido.
 A frequência cardíaca foi medida por 5 minutos antes e 3 minutos durante o cateterismo usando monitores de frequência cardíaca Polar, conforme descrito acima. Não foi necessário reinserir os eletrodos de fio, pois eles ainda estavam no lugar do período de coleta de dados do ambiente de ordenha.
 No dia do desafio, as vacas receberam um único bolus de ACTH. Experimentos anteriores demonstraram que esta dose de ACTH é suficiente para estimular uma resposta máxima de cortisol em vacas leiteiras que dura aproximadamente 2 h.
 Amostras de sangue sequenciais (5–10 ml) foram coletadas do cateter jugular em intervalos regulares antes e depois da administração de ACTH (− 30, -15, 0, 10, 20, 45, 60, 90, 120, 180 min). 
As amostras foram analisadas para medir as concentrações de cortisol usando um kit de radioimunoensaio disponível comercialmente (Siemens Cortisol-A-Count® Kit, Cruinn Diagnostics Ltd., Dublin, Irlanda).
Procedimentos gerais e desenho experimental
5. Análise Estatística
A análise foi um bloco randomizado fatorial, ajustando os efeitos da categoria de temperamento e ambiente de ordenha e as interações.
 Dados de reatividade comportamental, comportamento em resposta à ordenha, ordem de ordenha e produção de leite nos dois ambientes de ordenha foram coletados de vacas LR, MR e HR. 
Dados de frequência cardíaca, fisiológicos (concentrações de cortisol e ocitocina) e responsividade adrenal (desafio com ACTH) foram coletados apenas das vacas LR e HR por razões logísticas. 
Os dados de frequência cardíaca basal e rMSSD foram definidos como a média em um período de 5 minutos antes da ordenha ou cateterização. 
A frequência cardíaca e o rMSSD durante a ordenha foram calculados em média nos primeiros 5 minutos após a vaca ter entrado no fardo da sala de ordenha. A frequência cardíaca e a resposta do rMSSD à cateterização foram calculadas em média nos primeiros 3 minutos durante o procedimento de cateterização.
RESULTADOS
O efeito do ambiente de ordenha:
Resposta comportamental à ordenha
A pontuação média do FSK foi maior ( Pposição na ordem de ordenha ao entrar na nova sala de ordenha, mas não na sala de ordenha familiar, tendeu (r = 0,35; P = 0,056) a ser positivamente correlacionada com a distância VA na arena. Não houve outras relações entre as respostas comportamentais à ordenha e as respostas comportamentais aos humanos.
RESULTADOS
Produção de leite
No segundo e quinto dia de ordenha na sala de ordenha familiar, a produção de leite não diferiu ( P > 0,05) entre as vacas LR, MR e HR. 
Durante o segundo dia de ordenha na nova sala de ordenha, as vacas LR apresentaram maior produção de leite ( P 0,001) em vacas HR do que LR [LR: Antes: 38,9 ± 4,63, Depois: 80,7 ± 4,63; HR: Antes: 75,8 ± 4,63, Depois: 93,6 ± 4,63].
O rMSSD aumentou ( P