2 Métodos de estudo da Célula

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MÉTODOS DE ESTUDO DA CÉLULA 
Microscópio óptico ou microscópio de luz; 
Microscópios eletrônicos. 
Microscopia de Luz 
 Microscopia convencional 
 Microscopia de contraste de fase 
 Microscopia de contraste interferencial 
 Microscopia de campo escuro 
 Microscopia de polarização 
 Microscopia de fluorescência 
 Microscopia confocal a laser 
Microscopia eletrônica 
 Microscopia eletrônica de transmissão 
 Microscopia eletrônica de alta voltagem 
 Microscopia eletrônica de varredura 
Outros tipos de microscópio 
 Microscopia de tunelamento quântico 
 Microscopia de força atômica 
TIPOS DE MICROSCÓPIO 
Microscópio 
Sistema combinado 
de lentes, que são 
colocadas de forma 
a ampliarem a 
imagem do objeto. 
Microscópio (do 
grego micron, 
pequeno; scopein, 
examinar). 
Fig. 01. Microscópio óptico moderno, binocular, com iluminação 
embutida. 
MICROSCÓPIO ÓPTICO AUMENTO: OBJ X OCULAR 
 Fonte luminosa → luz 
branca (tungstênio) 
 
 Óptica → 3 sistemas de 
lentes: condensador, 
objetiva e ocular. 
 Mecânica: suporte. 
Tubo ou 
Canhão 
Braço, coluna, 
estativa ou asa de 
transporte 
Platina 
AS PARTES DO MICROSCÓPIO 
Oculares 
 
Charriot 
Botão 
Liga/Desliga 
Indicador da 
Intensidade 
Luminosa 
 
Presilha ou 
pinça 
Presilha, pinça 
ou garra 
Parafuso 
Micrométrico 
Parafuso 
Macrométrico 
 
Revólver 
4x = Vermelha 
10x = Amarela 
40x = Azul claro 
100x = Preta / branca 
Objetivas à seco: aquelas que 
entre a lâmina ou lamínula e a 
objetiva existe o ar; 
Objetivas de imersão: são as que 
nesse meio, se coloca um óleo 
transparente (cedro ou sucedâneo 
sintético) de índice de refração o 
mais próximo possível da lente. 
A finalidade do óleo é tornar 
mais claro o campo do 
microscópio. As objetivas do 
100X são sempre de 
imersão. 
Aumento total 
 
Aumento visual total: Aumento da objetiva X Aumento da ocular 
10x 
10x 
10x 
4x 
10x 
40x 
Canhão ou tubo: local 
onde se fixam as lentes 
(oculares e objetivas) e 
abriga um prisma. 
Base, suporte ou pé: é o 
suporte do microscópio, peça 
que sustenta todas as outras. 
Forma variada podendo ser 
retangular ou oval. 
Braço, coluna, asa de transporte 
ou estativa: sustenta o tubo do 
microscópio e liga a base. Local 
onde se deve segurar o 
microscópio para ser 
transportado. 
2. Revólver ou porta objetivas: peça 
giratória encontrada abaixo do canhão 
que permite a troca e afixação das 
objetivas. 
1. Ocular ou lentes oculares: aumenta a 
imagem do objeto após o aumento já 
proporcionado pela objetiva. É através desta 
lente que o observador vê a imagem do 
objeto. 
3. Objetivas ou lentes objetivas: situadas 
próximas ao objeto. Formam uma 
imagem real e invertida do mesmo. Estão 
presas ao canhão e movem-se conforme 
movimenta-se o revólver. 
Aumentos: 4X, 10X, 40X e 100X. 
5. Charriot: sistema de botões de 
deslizamento - para movimentar a 
lâmina no plano horizontal (da frente 
para trás e da esquerda para a direita, 
ou vice-versa) e assim permitir a 
observação de toda a sua área. 
4. Mesa ou platina: mesa em miniatura que 
apresenta um orifício central para a passagem 
da luz. O objeto que será observado é 
colocado sobre uma lâmina de vidro e esta, 
sobre a platina, exatamente em cima do 
orifício - presa por meio de pinças ou garras. 
6. Condensador: situado entre a platina e 
a base, converge os raios luminosos 
provindos da lâmpada e projeta-os como 
um cone de luz sobre o material que está 
sendo examinado. Ao concentrar os raios 
luminosos, aumenta a quantidade de luz 
que atravessa o objeto. 
8. Fonte de luz: localizada na base 
do microscópio. Fornece os raios 
luminosos necessários para a 
observação do material. 
7. Diafragma: localizado acima da fonte 
de luz, regula a intensidade do feixe 
luminoso que chega ao objeto, 
possibilitando maior nitidez da imagem. 
9. Parafuso macrométrico: botão 
giratório que permite movimentos 
mais amplos da platina em direção às 
objetivas ou vice-versa. Localiza-se 
lateralmente na coluna do 
microscópio. É utilizado na focalização 
inicial do material em estudo na 
lâmina. 
10. Parafuso micrométrico: botão 
giratório que permite movimentos mais 
delicados da platina em direção às 
objetivas, ou vice-versa, utilizado para a 
focalização final do objeto. Localiza-se 
próximo ao macrométrico ou acoplado a 
ele. Atua no ajuste final. 
FINALIDADE DO CONDENSADOR 
 A finalidade do condensador 
é projetar um cone de luz 
sobre as células que estão 
sendo examinadas no 
microscópio. 
 Após atravessar as células, o 
feixe luminoso, em formato 
de cone, penetra na objetiva, 
que projeta uma imagem 
aumentada, no plano focal da 
ocular, que, novamente, a 
amplia. 
 
“Capacidade de uma lente (ou do próprio 
microscópio) em formar imagens com detalhes 
mínimos” 
“Capacidade de separar detalhes”. 
 Na prática, é expresso pelo limite de resolução, 
que é a menor distância que deve existir entre 
dois pontos para que eles apareçam 
individualizados. 
• Riqueza de detalhes  limite de resolução e não 
pelo aumento dos objetos; 
 O limite de resolução depende da objetiva, a 
ocular não pode acrescentar detalhes à imagem. 
PODER DE RESOLUÇÃO 
Unidade de medida bastante familiar é o milímetro 
(mm). Se dividirmos: 
 
1 milímetro por 10 vezes = 0,1 mm (abaixo do limite 
do poder de resolução do olho humano). 
1 milímetro por 1000 vezes = 0,001 mm  o 
equivalente a 1 micrômetro (1 µm) 
 
Unidade de medida que se encontra no poder de 
resolução do microscópio de luz. 
Unidades de medida 
• Embora seja possível a observação de uma variada 
gama de células e tecidos com um microscópio de 
luz, a maioria das estruturas celulares é menor que 
o poder de resolução deste equipamento. 
• Para estuda-las é necessária a utilização de 
microscópio mais potente, o microscópio 
eletrônico. Neste caso, se dividirmos: 
1 micrômetro em 1000 partes = 0,001 µm  o 
equivalente a 1 nanômetro (1 nm) 
 
Unidade de medida que se encontra no poder de 
resolução do microscópio eletrônico. 
Unidades de medida 
UNIDADE DE 
MEDIDA 
SÍMBOLO EQUIVALÊNCIA 
Milímetro mm 0,001 m (milésima parte do metro) 
Micrômetro µm 0,001 mm (milésima parte do milímetro) 
Nanômetro nm 0,001 µm (milésima parte do micrômetro) 
TABELA 01 – Unidades de medida frequentemente utilizadas em biologia celular. 
Fig. 03. As principais unidades de medida usadas em biologia celular sao o micrometro (µm) e o nanômetro (nm). O quadro acima mostra a 
equivalência entre essas unidades, comparando-as também com o milimetro (mm). As setas indicam os limites (aproximados) de resolução do 
olho humano, do microscópio óptico e do microscópio eletrônico. 
• O microscópio de polarização é semelhante a 
microscópio de luz, acrescido de dois prismas 
ou dois discos polaróides, que permitem 
estudar certos aspectos da organização 
molecular dos constituintes celulares. 
 
 
 
 
 
• O microscópio de polarização serve para 
individualizar a estrutura que se quer analisar. 
MICROSCÓPIO DE POLARIZAÇÃO 
Um disco polaróide no condensador: 
funciona como polarizador – ilumina o 
material com o feixe de luz. 
Um disco polaróide na ocular 
(analisador): verifica o efeito do 
feixe sobre o material. 
MICROSCÓPIO DE 
CONTRASTE DE FASE 
• É empregado no 
estudo de células 
vivas. 
• Conforme a 
densidade do 
material, a luz o 
atravessa com maior 
ou menor 
intensidade, 
diferenciando a 
coloração do objeto. 
Fase positiva Fase negativa 
• Iluminação feita por 
feixes de raios laser; 
• Soluciona o 
problema da 
imagem borrada 
fornecidapelo 
microscópio óptico. 
MICROSCÓPIO CONFOCAL 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO 
• Feixe de elétrons, acelerados por diferença 
de potencial, possui um comprimento de 
onda de 0,005 nm; 
 
• Dificuldades em se preservar as células e 
em se obter cortes extremamente finos. 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO 
FUNCIONAMENTO DO MICROSCÓPIO 
ELETRÔNICO DE TRANSMISSÃO 
1. Os e- são produzidos devido ao aquecimento 
de um filamento de tungstênio (cátodo) que 
emite e-. 
2. As partículas são aceleradas devido a 
diferença de potencial entre cátodo e ânodo 
(placa perfurada que permite somente a 
passagem de parte dos e- formando um 
feixe). 
3. Os e- passam por um bobina condensadora 
que os dirige em um feixe uniforme na 
direção do objeto. 
4. Após atravessar o objeto, onde muitos e- 
são desviados , o feixe passa por uma 
bobina, a objetiva. 
5. Por fim, uma terceira bobina, a projetora, 
projeta os e- sobre uma tela ou sobre um 
filme, formando a imagem. 
1 
2 
3 
4 
5 
5 
• Os elétrons são obtidos pelo 
aquecimento de um 
filamento de tungstênio- o 
cátodo- que emite elétrons; 
• Estruturas elétron-densas: 
estruturas nas células que 
não formarão imagem; 
• Tela fluorescente de ZnS 
(sulfeto de zinco) ou um filme 
fotográfico. 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE 
TRANSMISSÃO 
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO DE VARREDURA 
• Usa também um feixe de 
elétrons; 
• Fornece imagens 
tridimensionais, mas não 
tem alto poder de 
resolução quanto o microsc. 
eletrônico de transmissão; 
• O material não precisa ser 
cortado - objetos de 1cm ou 
+ podem ser observados 
inteiros. 
• Estudo da superfície de 
células mantidas em 
cultivo. 
CONFECÇÃO DE CORTES PARA ESTUDO 
NOS MICROSCÓPIOS ÓPTICO E 
ELETRÔNICO 
• Células fixadas e coradas  melhor demonstração 
dos seus componentes; 
Um preparado ideal deve mostrar as células com a • 
mesma 
química 
estrutura microscópica e composição 
que possuíam quando vivas. 
Lâminas permanentes 
1ªETAPA: FIXAÇÃO 
Evitar autólise; 
Impedir atividade e proliferação de bactérias; 
Endurecer as células; 
Aumentar a afinidade das estruturas celulares 
• 
• 
• 
• pelos 
corantes usados na microscopia óptica e aumentar o 
contraste na microscopia eletrônica. 
FORMOL GLUTARALDEÍDO 
• Formol e aldeído glutárico (glutaraldeído) fixam as 
células por se combinarem com os grupamentos 
amínicos das proteínas. 
• O Tetróxido de Ósmio e o glutaraldeído são os 
fixadores mais usados em microscopia eletrônica por 
que coagulam as proteínas causando modificações 
mínimas na estrutura celular. 
2ª 
em 
ETAPA: 
fatias. 
MICROTOMIA 
• Cortes 
Fig. 2.2 Micrótomo moderno, especialmente ergonornico, 
para cortes de tecidos incluidos em parafina ou em resina 
plastica. Modelo ErgoStar HM 200. 
• O fragmento de tecido 
fixado deve ser protegido 
em um material que o 
envolve e nele penetra; 
Microscópio óptico: 
inclusão em parafina ou 
em resinas plásticas 
especiais utilizando-se 
navalhas de aço para corte; 
Microscópio eletrônico: 
inclusão em resinas epóxi 
utilizando-se navalhas de 
vidro ou diamante para 
corte. 
3ª ETAPA: COLORAÇÃO 
• Quase todas as organelas são transparentes e 
incolores; 
Corantes básicos- grupamento • Químico é catiônico 
Responsável 
pela cor 
combinam-se com os 
grupamentos ácidos (aniônicos) 
Ex.: DNA, RNA são Basófilos (afinidades por 
corantes básicos) 
 
Azul de toluidina, azul de metileno, hematoxilina. 
• Corantes ácidos- grupamento Químico é aniônico 
combinam-se com os grupamentos básicos (catiônicos) 
Ex.: Proteínas citoplasmáticas são acidófilos 
 (afinidades por corantes ácidos) 
 
Eosina, Orange G e Fucsina ácida 
Responsável 
pela cor 
3ª ETAPA: COLORAÇÃO 
QUESTÕES DE REVISÃO 
1. O que é um microscópio? 
2. Quais as partes constituintes de um microscópio 
óptico? Diga suas principais funções. 
3. Como se obtém o aumento visual total em um 
microscópio óptico? 
4. Qual a finalidade do condensador? 
5. Qual a unidade de medida em que se encontra 
no poder de resolução do microscópio de luz? E 
do eletrônico? 
6. Como funciona o microscópio eletrônico de 
transmissão?