Reação Em Cadeia Da Polimerase Da Transcrição Reversa Em Tempo Real (RT-qPCR)

Prévia do material em texto

Adriana H; Camila SN; Caroline SN; Danielle GM; Élisson GS; Juan CM; Maira JS
CENTRO UNIVERSITÁRIO DAS FACULDADES
METROPOLITANAS UNIDAS
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE DA 
TRANSCRIÇÃO REVERSA EM TEMPO REAL (RT-qPCR)
Introdução à RT-qPCR
A reação em cadeia da polimerase da transcrição reversa em tempo real, ou RT-qPCR, é uma 
das técnicas de mensurar a expressão gênica mais confiável e mais utilizada atualmente. Ela 
envolve a transcrição reversa (RT da sigla), a reação em cadeia da polimerase (PCR da sigla) e
a análise em tempo real por meio de dados quantitativos (o “q” da sigla).
Como a técnica funciona
Primeiro faz-se a extração de RNAm para poder realizar a fase RT (transcrição reversa). Na fase 
RT, a enzima transcriptase reversa sintetiza o cDNA correspondente de cada fita de RNA e, em
seguida, inicia-se a qPCR. Na qPCR, então, ocorre a amplificação de um sitio especifico no
conjunto de cDNA por meio do uso de uma DNA polimerase termoestável (ex.: Taq polimerase), 
onde dois oligômeros específicos servem como primers e um fluoróforo (ex.: SYBR Green) serve 
como emissor de luz. Ao decorrer dos ciclos da qPCR no termociclador, o fluoróforo vai se ligando 
às cadeias duplas de cDNA sintetizadas e emitindo luz proporcional à quantidade de cDNA
presente. E através da análise do gráfico gerado e ilustrado pelo monitor ligado ao termociclador 
que realizou essa PCR, é possível quantificar a amostra inicial.
Aplicações
A RT-qPCR é utilizada para a validação de resultados de microarray, identificação de mutações
pontuais, genotipagem e discriminação alélica, farmacogenética (auxilia na análise da expressão
gênica em resposta a determinados tratamentos medicamentosos), e etc.
Na detecção da Leucemia Mielóide Crônica (LMC), por exemplo, essa técnica quantifica a
expressão elevada do transcrito BCR-ABL. E na detecção da Peste Suína Africana (PSA), a
RT-qPCR detecta sequências do gene da proteína VP27 do capsídeo desse vírus.
Figura 1. Princípios básicos da RT-qPCR. Figura 2. Sistema de detecção de qPCR.
Referências bibliográficas
LADEIRA, Pedro Ribeiro Soares de; ISAAC, Cesar; FERREIRA, Marcus Castro. “Reação em cadeia da
polimerase da transcrição reversa em tempo real”. Revista de Medicina: São Paulo, 2011.
RIBEIRO, Eduardo L. et al. “Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR em tempo real 
(qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana”. Pesquisa Veterinária Brasileira: Rio de Janeiro, 
2016.
NASCIMENTO, Sabrina; SUAREZ, Eloah Rabello; PINHAL, Maria Aparecida da Silva. “Tecnologia de PCR 
e RT-PCR em tempo real e suas aplicações na área médica”. Revista Brasileira de Medicina: São 
Paulo, 2010.