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Técnicas Parasitológicas utilizadas na rotina de laboratório clinico 
Conceitos parasito
Principais Sintomas causados por parasitos
• Os sintomas mais frequentes e comuns, dependendo da infestação, são: dores
abdominais, diarreia, gases, falta de apetite, vômito, náuseas, perda de peso, tosse, anemia e prurido anal
Métodos ou técnicas de exames
parasitológicos
Conceitos dos Métodos ou técnicas de exames parasitológicos 
• Protozoários Sanguíneos
TÉCNICAS EM PARASITOLOGIA
Adriana Voyagioglou RA: C66526-6
Ana Meire RA: B7718D-3
Brenda Alves RA C0596E-9
Michelle Dias RA: A760BF- 7
Renata Caioni RA: C20JHE-5
Professora: Márcia Pena
Parasitologia e Principais Técnicas
Parasitologia é a ciência que estuda os parasitas, seus hospedeiros e relações entre eles. 
EXAME DE FEZES
Macroscopia: Consistência, odor, vermes adultos, muco, sangue. É importante examinar macroscopicamente o material a ser examinado, afim de verificar a consistência da amostra, se há presença de ovos .
Microscopia: Visualizar as formas parasitárias. 
Pode ser: Quantitativo ou Qualitativo
EXAME  MACROSCÓPICO:
Procedimentos:
1- Observar a consistência da amostra.
Fezes moles ou líquidas sugerem a possível presença de trofozoítos de protozoários intestinais. Cistos de protozoários são encontrados com mais freqüência em fezes formadas. Ovos e larvas de helmintos podem ser encontrados tanto em fezes líquidas quanto em fezes formadas.
2- Examinar a superfície da amostra para observar a presença de proglotes de tênias, ancilostomídeos ou oxiúros adultos, por exemplo.
3- Examinar a amostra fecal com auxílio de um palito (sorvete) para verificar a presença de outros helmintos adultos.
4- Examinar as fezes quanto à presença de sangue e/ou muco.
a) sangue fresco (vermelho vivo) indica hemorragia aguda no trato intestinal.
b) muco sanguinolento sugere ulcerações e uma porção desse material deve, de preferência, ser examinada, ao microscópio, para a procura de trofozoitos.
EXAME MICROSCÓPICO Permite a visualização de trofozoitos, cistos e oocistos de protozoários e de ovos e larvas de helmintos. É recomendável, como rotina, o emprego de 03 procedimentos distintos a) exame direto a fresco, para observação dos movimentos do trofozoito, b) técnicas de concentração de parasitas c) um esfregaço de fezes com coloração permanente O exame pode ser quantitativo ou qualitativo. Os métodos quantitativos são aqueles nos quais se faz contagem de ovos para avaliação da carga parasitária. O mais conhecido é o de Stoll, mas, o mais empregado atualmente é o de KatoKatz. Os métodos qualitativos são os mais utilizados para a demonstração da presença das formas parasitárias. Freqüentemente o número das formas parasitárias é pequeno, assim é necessário recorrer a processos de enriquecimento dessas formas para concentrá-las.
HOFFMANN,PONS & JANER
Técnica de sedimentação/ qualitativo.
Detecção de ovos e larvas de helmintos.
Técnica mais eficiente na pesquisa de ovos de helmintos.
Método de concentração por sedimentação espontânea (Hoffmann, Pons & Janer, 1934)
A técnica de sedimentação é um teste qualitativo para a detecção de ovos e larvas de helmintos. A sedimentação espontânea, conhecida como método de Lutz ou Hoffman, Pons & Janer, foi desenvolvida para o diagnóstico das enteroparasitoses.  É uma técnica útil para ensaios preliminares visando identificar que grupos de parasitas estão presentes em uma amostra.
O principal objetivo da técnica é o aumento da concentração de ovos (operculados e não-operculados), larvas, cistos e o isolamento de óleos e gorduras da maior parte dos detritos. Por serem pesados, ovos e larvas são sedimentados espontaneamente, lavados e concentrados e em seguida examinados. 
A sedimentação apresenta uma ação contrária quando comparada com a flutuação. Os cistos, oocistos, ovos e larvas são retidos no fundo do recipiente, enquanto os detritos são suspensos para a superfície, não interferindo no diagnóstico final. Esta tem sido indicada como uma técnica mais eficiente na pesquisa de ovos de helmintos do que na detecção de cistos de protozoários.
TÉCNICA
2 a 5g de fezes
Copo de plástico ou becker
Copo cônico bastão de vidro ou espátula de madeira
Pipetas de Pasteur
1L de água
Lâmina ou lamínula
Lugol
·         Misture no copo plástico (ou becker) uma pequena quantidade de fezes (2 a 5 gramas) com 50 ml de água e homogeneíze bem com um bastão de vidro (ou palito).
·         Transfira a suspensão para o copo cônico, filtrando-a com o parasitofiltro.
·         Despreze o material presente no parasitofiltro, e em seguida adicione água até preencher ¾ do copo cônico, onde ocorrerá a sedimentação espontânea dos ovos e larvas.
·         Após 1-2 horas, colete a matéria do fundo (sedimento) com auxílio de uma pipeta Pasteur e transfira para a lâmina (uma gota).
·         Adicione 1 gota de lugol, misture e cubra com a lamínula.
 
·         Observe a lâmina ao microscópio com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude para a objetiva de 40X. 
Método de Blagg e Ritchie
Técnica de sedimentação por centrifugação
Pesquisa de cistos e protozoários
Utilizados conservantes diferentes;
Blagg: MIF
Ritchie: Formaldeído
Grande eficiência na pesquisa de cistos de Giargia lamblia 
O método de Ritchie é uma das técnicas de flutuação, porém a de Lutz é chamada de sedimentação simples, enquanto que a de Ritchie é uma técnica de centrífugo-sedimentação. Como se sabe, as técnicas de sedimentação se baseiam na densidade, na qual a amostra a ser analisada no microscópio óptico é mais densa do que as partes líquidas na qual foi preparada e purificada, e através da centrifugação as fases são separadas.
O método de Ritchie e o método de Blagg seguem o mesmo princípio, sendo que são utilizados conservantes diferentes para a amostra de fezes, no primeiro usamos formaldeído e no método de Blagg é utilizado MIF. O método de Ritchie pode ser usado para a pesquisa de cistos de protozoários, ovos, e larvas de helmintos, tendo apresentado uma grande eficiência na pesquisa de cistos de Giardia lamblia.
Como todos os outros métodos a amostra de fezes passa por etapas que auxiliam na sua limpeza quanto a interferentes, sendo que neste método em especial é retirado o excesso de gordura da amostra além de ser possível uma fixação prévia das estruturas que serão avaliadas.
Método de Ritchie tem uma eficiência muito maior, entre elas a purificação da amostra através de centrifugações, e a quantidade de amostra sedimentada. Algumas pesquisas indicam que entre os quatro métodos comentados - Lutz, Willis, Faust e Ritchie – o de Ritchie é o que possui melhor eficiência, tanto em melhor purificação da amostra, quanto o poder de evidenciar estruturas que não poderiam ser observadas pelos outros métodos, muito embora haja espécies de parasitas que são melhor observadas pelos outros métodos.
Técnica: 
Realização do Método de Ritchie, em uma amostra de fezes, com objetivo de familiarização com ele, aplicando os procedimentos referentes ao método, com o intuito de preparar uma amostra devidamente fixada para posterior 
TÉCNICA
Materiais:
Luvas descartáveis
2g de fezes frescas
Becker
Palheta de madeira
Água
Tubo de ensaio
Funil
Filtro de gaze
Centrífuga
Swab
Formaldeído 100%
Acetato de etila
Métodos:
Com o auxílio de uma palheta de madeira, homogeneizou-se em um béquer aproximadamente 2 gramas de fezes em água da bica, após a completa homogeneização  a solução foi filtrada para um tubo de ensaio.
Centrifugou-se o tubo de ensaio contendo a amostra a aproximadamente 2500 rpm por cerca de 2 minutos. Repetiram-se estas etapas de homogeneização e centrifugação, descartando o sobrenadante, até a obtenção de um sobrenadante límpido.
Após a lavagem, onde o sobrenadante foi descartado, foram acrescentados 5mL de formaldeído, a solução foi homogeneizada e deixada sobre a bancada
por cerca de 5 minutos.
Após os 5 minutos acrescentou-se 2 mL de acetato de etila e agitou-se a solução rigorosamente por cerca de 30 segundos, a pressão do tubo foi retirada e a solução foi centrifugada por cerca de 2 minutos a aproximadamente 2500 rpm.
Após a centrifugação, havia no tubo a formação de quatro fases, três delas foram descartadas, sendo mantido apenas o sedimento. Ao sedimento adicionou-se algumas gotas de formaldeído, e então foi estocado para posterior visualização ao microscópio óptico.
Método de Willis
Método de flutuação
Solução saturada em NaCl
Evidencia ovos leves e Ancilostomídeos
Metodo de WILLIS Consiste num método de flutuação em solução saturada de cloreto de sódio, sendo bastante utilizado para evidenciar ovos leves como os de ancilostomideos . Nessa técnica é utilizado o principio da flutuação (levitação) utilizando soluções de densidade elevada , com isto os oocistos e os ovos de densidade menor que a solução tendem a flutuar . Após isso, frequentemente observa-se na lamina do microscópio de objetiva 100 a presença de ovos , gorduras e fibras.
TÉCNICA
Materiais Necessários:
Amostra
Água destilada
Borrel
Bastão de vidro
Sol. Saturada NaCl
Lâminas para citologia
Lamínulas
Microscópio Óptico
Procedimento Técnico:
 
Emulsionar em um Borrel, 5g de fezes em aproximadamente10ml de água destilada.
Completar o volume do Borrel com a solução para que a superfície líquida chegue até a borda do recipiente;
Colocar uma lâmina de microscopia sobre a boca do recipiente de modo que sua face inferior seja banhada pelo líquido;
Esperar por mais ou menos 5 minutos, suspender a lâmina bruscamente e invertê-la, cuidando para não derramar a película líquida que ficou aderida e onde estão concentrados os ovos e cistos;
Acrescentar uma gota de lugol e cobrir com lamínula;
Observar ao microscópio, focalizando inicialmente no aumento de 10 e depois 40X.
 Método simples e barato e de uso fácil no campo por dispensar o emprego da centrífuga.
 
Método de Faust
Método centrífugo flutuação
Utilizado na pesquisa de cistos de protozoários e ovos de helmintos
A técnica de Faust ou de Centrífugo-flutuação em sulfato de zinco a 33% é utilizada para a pesquisa de ovos leves (como de ancilostomídeos), cistos e oocistos.
 
TÉCNICA
Lâminas e lamínulas
Becker 250ml
Um rolo de gaze
500ml de sol. Saturada de NaCl
Peneira chá
Sulfato de Zinco
Centrífuga
Lugol
Bico de Bunsen
Microscópio
Para a técnica deve-se seguir os seguintes procedimentos:
 
Diluir aproximadamente 5g de fezes (pegue o equivalente à "cabeça" do dedo polegar) em 10 ml de água
Homogeneizar bem
Filtrar com gaze 
Recolher a suspensão com tubo cônico de centrífuga até a marca de 12ml ou 15ml, dependendo do modelo utilizado
Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto (algumas centrífugas não têm essa opção, podendo então usar 2000 rotações)
Decantar o sobrenadante e ressuspender com água, centrifugando novamente, até atingir a limpidez, repetindo esta etapa quantas vezes forem necessárias.
Uma vez tendo o sobrenadante claro, despreza-se  para adicionar a solução de SnZO4 (33%) até o volume estipulado no tubo.
Centrifugar novamente.
Se notará uma película superficial, onde estarão os detritos das fezes e os possíveis ovos e cistos. Então:
Recolhe-se o material com uma alça bacteriológica
Deposita-se o material sobre a lâmina
Cobre com lugol e deposita uma lamínula em cima
BIBLIOGRAFIA
LUTZ, A. O. Schitosomum mansoni e Schistosomose, segundo observações feitas no Brazil.
HOFFMAN, W. A; PONS, J. A.; JANER, J. L. The sedimentation concentration method in schistosomiasis.
Cerqueira, F. L. Coprotest
NEVES. David Pereira. Parasitologia Humana
DE CARLI,G. A. Parasitologia Clínica