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Citoesqueleto e movimento celular Prof. Vinicius Farias Campos, BSc., MSc. fariascampos@gmail.com Abordagens... O que é e qual é a constituição do citoesqueleto Quais funções o citoesqueleto desempenha na célula Tipos de Filamentos do citoesqueleto Aplicações Biotecnológicas • - é uma rede complexa de filamentos de proteínas que se estendem por todo citoplasma; - forma um arcabouço interno para o grande volume do citoplasma, sustentando-o da mesma forma que uma estrutura metálica sustenta um prédio; - é uma estrutura altamente dinâmica que se reorganiza rápida e continuamente; • - presente em células eucarióticas O que é o citoesqueleto? • Composto por 3 tipos de filamentos protéicos 1. Microfilamentos (filamentos de actina) 7 nm 2. Filamentos Intermediários 10 nm 3. Microtúbulos 25 nm • Esses 3 tipos interagem entre si conferido estabilidade e dinâmica no citoesqueleto. • Cada tipo de filamento é formado pela polimerização de monômeros específicos Composição - Dar estrutura e forma a célula - permitir que a célula altere sua forma - permitir o movimento celular - fornece a maquinaria necessária para movimentos intracelulares - na divisão celular – segregação dos cromossomos - na interação célula-célula - na interação célula-matriz extracelular Funções do citoesqueleto Microtúbulos Microfilamentos Filamentos intermedios 2 5 n m 1 0 n m 7 n m 25µm 25µm 25µm 25nm 25nm 25nm Microfilamentos • Principal proteína: Actina • Estrutura: Polímeros helicoidais, duas cadeias de actina (G-Actina + ATP + Mg e K = Polímero) • Estruturas flexíveis, com diâmetro de 5 a 9 nm, • Organizados na forma de feixes lineares, redes bidimensionais e géis tridimensionais. Microfilamentos • Filamentos de actina concentrados logo abaixo da membrana plasmática •Endocitose, pinocitose, migração celular, contração muscular • Sustenta as microvilosidades – superfície celular • Encontra-se nas junções celulares – manter células unidas • Associam-se com inúmeros complexos protéicos Microfilamentos em microvilosidades Microfilamentos em protusões temporárias Microfilamentos na contração muscular Microfilamentos na citocinese Anel contráctil de actina e miosina • São polímeros rígidos formados por 13 protofilamentos de tubulina a e b, em forma de filamentos longos e ocos, com 25 nm de diâmetro e são muito mais rígidos do que os filamentos de actina. Microtúbulos (MT) Polimerização • Tipos: a, beg • Altamente conservadas • Possuem aprox. 450 aa (50 kDa) • São originados por 5 genes de uma família que tem 5 isoformas. Tubulina • Nas células em interfase, partem do centrossoma, onde se encontram os centríolos e uma reserva de tubulina. • A polimerização dos dímeros de tubulina possibilita o alongamento do microtúbulo e a despolimerização seu encurtamento. • O sentido da polimerização da tubulina vai conferir uma polaridade ao microtúbulo: uma extremidade + (positiva) onde continua a polimerização e outra (-) negativa. Microtúbulos (MT) 1. Microtubulos organizam o interior da célula 2. A maioria das células diferenciadas são polarizadas Polarização 1. Microtubulos são responsáveis pelo movimento de organelas, vesículas, proteínas Polarização Microtúbulos (MT) shows the microtubules in longitudinal sample MET mostrando a distribuição de microtúbulos em células Microtúbulos (MT) •Transporte (vesículas, organelas, cromossomos, etc) • Formação do fuso mitótico • Arquitetura celular (junto com FI e Microfilamentos) • Movimento axonal • Movimento de vesículas e organelas • Movimento de cílios e Flagelos Funções dos Microtúbulos Cillia or Flagella - + + Mitotic spindle Dividing cell Migrating cell Spindle poles Neurones Basal body MICROTUBULOS (organising centres and polarity) MTOC Centrosome Centrioles + + + + • Possuem polaridade - É essa polaridade que possibilita proteínas motoras trafegarem vesículas, organelas ou complexos protéicos associados aos microtúbulos num ou noutro sentido. • DINEÍNA leva vesículas para o polo (-) • CINESINA para o polo (+). Microtúbulos MT proteínas motoras Transporte Pelos Microtúbulos • DINEÍNA leva vesículas para o polo (-) • CINESINA leva para o polo (+) MT proteínas motoras MT proteínas motoras 1. Organelas movem-se pelos microtúbulos 2. ER e Golgi são posicionado pelos microtúbulos 3. Cria diferenças locais necessários para a função celular Tipos Estruturas Localização Flagelos 9+2 Espermatozóides e em protozoários Cílios 9+2 Células epiteliais do pulmão, deslocamento do óvulo Centríolo 3x9 Todas as células animais; região organizadora de microtúbulos Corpúsculo basal 3x9 Ancoragem e origem dos cílios Microtúbulos Organizados - Estruturas responsáveis pela motilidade celular - Constituídos por pequenos apêndices, especialmente diferenciados, que variam em número e tamanho. - Se são escassos e longos recebem o nome de flagelos, - Se numerosos e curtos são denominados cílios Cilios –Células epiteliais do pulmão, deslocamento do óvulo, Flagelos – Espermatozóides e em protozoários Cílios e Flagelos Cílios Desenho mostrando as diferenças de movimentos entre o cílios e o flagelo Cílios e Flagelos Dineína gera movimento dos cilios e flagelos Cilio Micrografia eletrônica de secções transversal e vertical de um cílio (arranjo em 9+2) corpúsculo basal - Estruturas cilíndricas, com 0,2 mm de largura e 0,4 mm de comprimento. - 9 grupos de três microtúbulos, fundidos em tripletes, formam a parede do centríolo e cada triplete se incline para dentro como as lâminas de uma turbina. Desenho esquemático do corpúsculo basal e Centríolo Centríolo Centríolo 1. É formado de um par e dispostos em em um ângulo reto 2. Formam o fuso mitótico para segregação dos cromossomos • 1) Tanto os microfilamentos como os microtúbulos são constituidos por proteínas globulares • 2) Em ambos casos, ~ 50% da proteína constituinte se encontra em forma solúvel os 50% restantes em forma de filamentos. • 3) Formam estruturas MUITO DINÂMICAS, com um intercambio rápido de subunidades entre o "pool" solúvel e filamentoso. • 4) Tanto os microfilamentos como os microtúbulos são estruturas "polarizadas” (extremos distintos). • 5) As estruturas formadas por microtúbulos e/ou microfilamentos, possuem a capacidade de transportar e gerar forças, sendo chamadas de citomusculatura Características comuns a microfilamentos e microtúbulos http://www.youtube.com/watch?v=uGK9CYetCvM&feature=fvwrel Vídeo • São polímeros constituídos de polipeptídios fibrosos. • Diâmetro entre 8 e 12 nm • Parte mais estável do Citoesqueleto • Participam: estrutura, estabilidade, sustentação, resistência, interação celular. Filamentos Intermediários • Grupos heterogêneos (+50) de proteínas de FI • Citoqueratina - células epiteliais, bexiga • Vimentina – Células de fibroblastos, leucócitos • Neurofilamentos das células nervosas • Lamina - forma a lâmina fibrosa que se estendesob o envelope nuclear Filamentos Intermediários 2. Monômeros de FI 2. Versatilidade FI 2. Formação dos FI monômero Dimero enovelado Tetramero antiparalelo dois tetrameros 8 protofilamentos Como o citoesqueleto pode ser usado em biotecnologia? Alvo para drogas Alvo para detecção de câncer Ação de drogas no citoesqueleto • Cochicina, Colcemida e Nocadazol – inibem a polimerização de MT – inibindo a ligação nas extremidades + • Vincristina e a vimblastina se agregam aos MT e levam a despolimerização dos MT • Taxol - acelera a polimerização e estabiliza os microtúbulos, impedindo a despolimerização • Biópsias de tumores • Imunocitoquímica para identificar proteínas específicas dos filamentos intermediários • Identificação da origem do tumor • Auxílio no direcionamento do tratamento Identificação de tumores através do citoesqueleto Obrigado pela atenção!!! Vinicius Farias Campos fariascampos@gmail.com vcampos_ib@ufpel.edu.br
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