Aula 3 Microbiologia

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Profa. Dra.Tatiana Elias Colombo
2016
MICROSCOPIA - ESTRUTURA 
CELULAR
O exame microscópio de microrganismos pode ser realizado pela
utilização do microscópio óptico ou do microscópio eletrônico.
Microscopia e morfologia celular
Observação de células intactas Observação de estruturas internas
ou detalhes da superfície celular
Todos os microscópios baseiam-se no princípio de que lentes
específicas ampliam a imagem de uma célula de tal maneira que os
detalhes de sua estrutura tornam-se mais aparentes.
Microscopia e morfologia celular
Figura – Microscopia.
Fonte: Microbiologia de Brock
Microscópio óptico
Lente ocular é constituída por duas lentes que ampliam a imagem formada pelas objetivas.
Microscópio óptico
Pingar óleo
de imersão
Objetiva de imersão
Microscópio
Platina ou mesa serve como apoio para o material a ser observado.
Condensador e diafragma são responsáveis pela uniformidade da iluminação e redução ou 
ampliação da região a ser iluminada.
Microscópio óptico
Charriot: responsável pela movimentação lateral da lâmina em observação, sendo possível 
analisá-la de forma totalitária.
Microscópio óptico
Parafuso macrométrico: objeto passível de rotação e permite a movimentação vertical da 
mesa.
Parafuso micrométrico: responsável pelos movimentos verticais e sutis da mesa, 
permitindo aperfeiçoar a focagem.
Microscópio óptico
1. Microscópio óptico de campo claro:
- Composto por dois conjuntos de lentes: objetivas e oculares que
atuam simultaneamente na resolução da imagem
- Células bacterianas são de difícil visualização devido à ausência
de contraste com o meio
- Coloração: aumenta o constraste e otimiza visualização da célula.
Microscópios ópticos utilizados na microbiologia
Figura – Fotomicrografia de células de levedura observadas em
microscópio óptico de campo claro.
Fonte: Microbiologia de Brock
• Muitos dos corantes comumente utilizados na microbiologia são
carregados positivamente (catiônicos) e combinam-se fortemente
com as estruturas celulares presentes na superfície (carregadas
negativamente)
• Corantes catiônicos: azul de metileno, cristal violeta e safranina
• Colorações diferenciais – não coram igualmente todos os tipos de
células. Exemplo: coloração de Gram
Coloração: aumentando o contraste para a 
microscopia de campo claro
Tal reação à coloração de Gram se deve às diferenças na estrutura da
parede celular de células gram-positivas e gram-negativas, que permite
que o álcool descore as células gram-negativas, mas não as gram-
positivas
Coloração: aumentando o contraste para a 
microscopia de campo claro
• Os corantes mais simples são executados utilizando preparações secas
Coloração: aumentando o contraste para a 
microscopia de campo claro
Figura – Coloração de células para visualização microscópica.
Fonte: Microbiologia de Brock
Coloração ROXAColoração ROSA
PEPTIDEOGLICANO PEPTIDEOGLICANO
1. Microscópio óptico de campo claro
2. Microscópio óptico de contraste de fase
- Aumenta a diferença de contraste entre a célula e o meio circundante
- Observação de células não coradas
- Amplamente empregado em pesquisas pois permite a observação de
preparações a fresco (vivas)
Microscópios ópticos utilizados na microbiologia
Figura – Fotomicrografia de células de levedura observadas em
microscópio óptico de contraste de fase.
Fonte: Microbiologia de Brock
1. Microscópio óptico de campo claro
2. Microscópio óptico de contraste de fase
3. Microscópio óptico de campo escuro
- Microscópio óptico modificado de tal modo que o espécime é
atingido lateralmente pela luz
- A única luz que atinge a lente corresponde àquela dispersa pelo
espécime, que aparece claro em um campo escuro
- Excelente para a observação de microrganismos móveis
Microscópios ópticos utilizados na microbiologia
Figura – Fotomicrografia de células de levedura observadas em
microscópio óptico de campo escuro.
Fonte: Microbiologia de Brock
1. Microscópio óptico de campo claro
2. Microscópio óptico de contraste de fase
3. Microscópio óptico de campo escuro
4. Microscópio de fluorescência
- Utilizado para visualizar espécimes que fluorescem
- Fluorescer: emitir luz de uma cor quando iluminados com luz de
outra cor
- A fluorescência deve-se tanto à presença de substâncias
naturalmente fluorescentes na célula (clorofila), como ao
tratamento das células com corantes fluorescentes
Microscópios ópticos utilizados na microbiologia
• Defina o termo resolução
• Qual o limite máximo de aumento de um microscópio óptico?
• Que técnicas de microscopia óptica podem, algumas vezes aumentar a
resolução?
• Descreva como é realizada a coloração de Gram.
• Qual a cor de uma bactéria gram-negativa após ter sido corada pelo
método convencional de Gram? E a bactéria gram-positiva?
Questionário