Estudo Dirigido 2 Imunologia Cl nica

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Faculdade Maurício de Nassau – Campina Grande
Curso de Farmácia
Disciplina Imunologia Clínica
Prof. Eduardo Adelino
Aluno: Jackson Magalhães da Silva Matricula: 0401324
Turma: 8º Período Manhã
Estudo Dirigido 2
Atenção: responda detalhadamente, quando aplicável, as perguntas abaixo
Diferencie Imunofluorescência Direta da Imunofluorescência Indireta. Qual o princípio da técnica? 
Qual o princípio da técnica: Anticorpos ou antígenos são conjugados (ligados de modo covalente) a uma substância (fluorocromo), que, quando excitada, permite luz no espectro visível. 
	Imunofluorescência Direta: Detecção de antígenos diretamente em células 	dos tecidos, intracelular ou de membrana, utilizando um anticorpo específico 	marcado com fluorocromo. 
	Imunofluorescência Indireta: Utiliza um anticorpo marcado com fluorocromo 	para detecção de anticorpos que se fixaram em antígenos celulares ou 	particulados. 
Um indivíduo procurou o laboratório para saber sua classificação sanguínea. Após a realização das provas direta e reversa, observou-se que ele é AB positivo. Descreva os procedimentos laboratoriais para chegar até este resultado.
	TIPAGEM DIRETA: se baseia na aglutinação das hemácias da amostra em 	teste 	em presença de anti-soros conhecidos contendo anticorpos Anti-A e 	Anti-B.
	PROCEDIMENTO DO TESTE 					PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS DE SANGUE
	Preparar a suspensão de hemácias a 5% em suspensão salina isotônica com a 	seguinte técnica:
Dispensar 1 mL de salina isotônica no tubo de suspensão.
Pipetar 50 μL de concentrado de hemácias e homogeneizar
	PROCEDIMENTOS									Teste em tubo
Identificar 2 tubos: um com o A e outro com o B (além do número do paciente).
Pipetar 50 μL (1 gota) da suspensão de hemácias a 5 % em cada tubo.
Pipetar 50 μL (1 gota) do Anti-A e 50 μL (1 gota) do Anti-B nos respectivos tubos.
Homogeneizar.
Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
Ressuspender suavemente as suspensões de hemácias e observar a aglutinação macroscópica.
RESULTADOS:
Positivo: excluindo-se as limitações do teste (vide a seguir), a aglutinação dos eritrócitos pelo reagente indica a presença de antígeno correspondente.
Negativo: excluindo-se todas as limitações do teste, a ausência de aglutinação dos eritrócitos pelo reagente indica a ausência de antígeno correspondente.
TIPAGEM REVERSA: utiliza o soro ou plasma do paciente contra hemácias fenotipadas A1 e B (comerciais). Além destas duas hemácias A1 e B, o serviço poderá utilizar hemácias A2 e O (comerciais).
	PROCEDIMENTOS
	Teste em tubo
Identificar 2 tubos: um com o A1 e outro com o B (além do número do paciente).
Pipetar 100 μL do plasma do paciente em cada tubo.
Pipetar 50 μL (1 gota) da hemácia A1 e 50 μL (1 gota) da hemácia B nos respectivos tubos.
Homogeneizar.
Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
Ressuspender suavemente as suspensões de hemácias e observar a aglutinação macroscópica.
RESULTADOS:
Positiva- presença de aglutinação
Negativa- ausência de aglutinação
FENOTIPAGEM RhD: se baseia na aglutinação das hemácias da amostra em teste em presença de anti-soro anti-D.
	PROCEDIMENTOS
	Teste em tubo
Identificar 2 tubos: 1 para o anti-soro anti-D e 1 para o soro controle-Rh e com o número do paciente;
Adicione 1 gota da suspensão de hemácias a 5% da amostra a cada um dos tubos;
Coloque 1 gota do anti-soro anti-D no tubo D e 1 gota do soro controle Rh no tubo Rh e homogeneíze;
Centrifugue os tubos por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm.
Agitar suavemente os tubos para pesquisar ou não a presença de aglutinação.
	Observação: Se houver aglutinação no controle Rh o resultado da 	fenotipagem estará INVÁLIDO. A reação com controle Rh deve ser sempre 	NEGATIVA
RESULTADO FINAL:
TIPAGEM DIRETA:
	Anti- A
	Anti- B
	Grupo Sanguíneo
	+
	+
	AB
TIPAGEM REVERSA:
	A1
	B
	Grupo Sanguíneo
	Negativo
	Negativo
	AB
FENOTIPAGEM RhD:
	Anti-D
	Controle Rh
	Interpretação
	+
	Negativo
	RhD positivo
Como se caracteriza um indivíduo que possui o Fenótipo Bombay? Qual a relevância clínica deste fenótipo?
Caracteriza-se por indivíduos não produzirem a enzima ativa (H) que é responsável pela transformação de substancias percussora em antígeno H, ou seja, a ausência de dessa enzima faz com que as pessoas não apresentem antígenos A, B e nem O nas suas hemácias. Há relevância clinica deste fenótipo e que uma eventual necessidade de transfusão de sangue o indivíduo que possui o fenótipo bombay só poderá receber sangue de outra pessoa que possua o mesmo tipo 	de sangue. Considerando a raridade de fenótipo, causando assim uma grande dificuldade na hora de uma transfusão sanguínea.
O que é Eritroblastose fetal? Como ela se caracteriza?
	Também pode ser conhecida como doença de Rhesus, ela é hemolítica, causada por uma incompatibilidade de Rh. Isso só ocorre quando a mãe é Rh- e o pai é Rh+ e, obrigatoriamente, o filho é também é Rh+, igual ao primeiro.
No parto, quando o sangue da mãe entra em contato com o do primeiro filho Rh+, a mãe começa a produzir anticorpos contra os antígenos presentes nas hemácias do filho. Uma vez que esses anticorpos são produzidos eles ficam memorizados na Memória Imunológica da mãe. Quando ela engravida do segundo filho Rh+, esses anticorpos são passados para o feto através do cordão umbilical, e podem destruir as hemácias do feto, causando muitos problemas, como anemia profunda ou morte.
Quais os 3 sistemas que compõem um citômetro de fluxo? Quais as funções de cada um deles?
Sistemas que compõem um citômetro de fluxo: Fluídico, Óptico e Eletrônico.
Sistema Fluídico- local onde são introduzidas e alinhadas as partículas. As células passam pelo laser uma a uma.
	Sistema Óptico: Produz e coleta os sinais ópticos dispersos e emitidos.
	Sistema Eletrônico: Converte os sinais ópticos em sinais eletrônicos para 	análise em computador (software)
O que avaliam os parâmetros FSC e SSC na citometria de fluxo?
	FSC: Foward Scatter – Desvio frontal, ele avalia o tamanho da partícula.
	SSC: Side Scatter – Desvio lateral, ele avalia a complexidade da partícula em 	seu interior.
Desenhe um gráfico mostrando a localização dos linfócitos, granulócitos e monócitos considerando os parâmetros FSC x SSC.