identificaçãobioquimica de bactéricas- experimento

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Identificação bioquímica
Os tubos com os meios previamente colocados na galeria tiveram a inoculação de uma amostra de urina em uma prática anterior, depois colocados na estufa com a devida identificação das duplas.
Figura 
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estufa com as galerias
Além disso o tubo do teste do nitrato foi preparado e depois colocado na jarra de anaerobirose com uma vela acesa, que consumuiu o oxigênio
1-Teste de indol- triptofano
Utilizado reagente: Reativo de Kovacs
Resultado: Anel amarronzado= negativo 
Bactérias entéricas = capazes de produzir indol partir do aminoácido triptofano.
Determina a capacidade de certas bactérias que possuem a enzima triptofanase de degradar o triptofano, produzindo indol, ácido pirúvico e amônia. A presença de indol pode ser detectada pela adição do Reativo de Kovacs, ocorrendo a formação de um anel de coloração vermelho na superfície do meio, indicando uma reação positiva. A ausência de mudança de cor indica que o triptofano não foi hidrolisado e, portanto, a reação é negativa conforme observado na prática.(ANVISA)
Ácido pirúvico pode participar do ciclo de Krebs e gerar energia ou ser usado na via glicolítica para sintetizar outros componentes.
Amônia: pode ser utilizada na síntese de aminoácidos
Reagente de kovac= HCl, dimetilaminobenzaldeído dissolvido no amil álcool.
Figura 
2
 Antes do teste
Figura 
1 
 Depois do teste
2- Prova de MR- VP
Mr= teste de vermelho de metila
VP= Voges-Proskauer
Organismos capazes de produzir grande quantidade ácidos estáveis após a metabolização da glicose levam a uma diminuição do pH do meio.
Fermentação ácida mista> pH= 4,5
Anel vermelho(+)
Vermelho de metila: Identifica se a bactéria consegue produzir ácidos estáveis como produtos finais da fermentação mista da glicose.
Teste de VP: identifica organismos capazes de produzir acetoína a partir da dagradação da glicose através da via butilenoglicólica.
3- Teste VP- 2,3-butanodiol> Se a bactéria faz essa fermentação
Algumas bactérias entéricas usam a via de fermentação ácida mista metabolizando o ácidio piruvato produzindo ácidos como lático, acético e fórmico. Algumas ainda utilizam a via butilenoglicólica produzindo produtos neutros ao metabolizar o piruvato.(Acrescentar referencia)
Meio combinado MR/VP -meio de Clarky Lubs (peptona, glicose e tampão fosfato). Para identificar a presença dessas vias metabólicas.
2-naftol= 0,6mL
KOH= 0,2mL
Resultado: Negativo
Figura 
2
VP antes
Figura 
3
VP depois
4- Teste de redução nitrato
Teste de redução de nitrato(NO3) a nitrito (NO2) ou o nitrogênio molecular (N2) usando enzima nitrogênio redutase.
Nitrito pode indicar anaerobiose .Na espiração anaeróbica, nitrato recebe no final os elétron na cadeia respiratória, produzindo nitrito, amônia, nitrogênio molecular, oxido nítrico. (Acrescentar referencia)
Reagentes utilizados: 2-naftol- 0,5mL e Acido sulfonilico= 0,5mL
Se reduzir, o ácido nitroso reage com o ácido sufanílico, forma o ácido sulfanilico diazotado, que reage com o 2-naftol para formar p-sulfobenzeno-azo-α-naftilamina, com cor vermelha. (Acrescentar referencia)
Caso a cor seja vermelho: positivo. 
Como demonstrado a baixo o teste indicou negativo para redução de nitrato, indicando que a bactéria não tem a enzima necessária para redução de nitrato.
Resultado= negativo
Figura 
4
Depois do teste
Figura 
5
Depois do teste 
Figura 
6
Antes do teste
5- Ureia
Vermelho de fenol que é o indicador que determina a intensidade do rosa que no meio alcalino fica Pink intenso. Quando a uréia é hidrolisada, a amônia se acumula no meio e o torna alcalino. Ocorre aumento no pH >7, causando a mudança de cor no meio. (Acrescentar referencia)
A enzima uréase possibilita a conversão de uréia em amônia, utilizada pela bactéria como fonte de carbono para produção de aminoácidos e nucleotídeos.
Rosa nesse experimento realizado no laboratório indicou que não tem o gene para sintetizar uréase.
Resultado: negativo
Figura 
7
Depois do teste
Figura 
8
Antes do teste
6- Citrato de Simmon’s 
Indicador: Azul de bromotimol
Cor Azul= positivo (porque o indicador ph alto é azul)
Cor Verde: negativo
A bactéria usa o citrato como única fonte de carbono para o seu desenvolvimento. Citrato= molécula doadora de energia, que pode ser utilizada pelas bactérias produtoras da enzima citrase. O Citrato se torna fonte de carbono, pois nenhum outro carboidrato fermentável está presente. Utilização do citrato é aeróbico, por isso ao utilizar o meio inclinado em tubo, aumentamos a área que fica exposta em contato com o ar. (Acrescentar referencia)
Resultado: positivo
Figura 
9
antes da inoculação
Figura 
10
depois da inoculação
7- Teste de lisina e H2S 
alimentou do açúcar e não fez descarboxilação: fica amarelo
H2S- se tiver o pigmento negro: sulfeto férrico
Ferro amonical
Positivo para lisina= descarboxilizou a lisina
Positivo para lisina e gás sulfidrico
Liberação de gás sulfídrico ocorre devido a metabolização para diferenciar de aminoácidos que contém enxofre em sua estrutra.
Figura 
11
Antes
8- fermentação de carboidrato
Se se alimenta de açúcares e produz gás
Bolha de ar no tubo de Durhan= amarelo (ácido+)
Amarelo= ácido (+)
Glicose,sacarose,galactose (açúcares)
Vermelho para amarelo= fermentação lenta
Resultado :
Glicose= não ácido, fermentou(presença de gás)
Sacarose= ácido, produziu gás
Lactose= fermentou e produziu gás
Figura 
12
depois do teste
Figura 
13
antes
Figura 
14
presença de gás na ordem sacarose, lactose e glicose
Enzima que pode degragar a lactose: lactase. Precisa-se ter β-galactosidade permanase e β-galactosidade, possível degradar lactose, glicose e galactose. (Acrescentar referencia)