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Biotecnologia Purificação de moléculas IBF-‐020 Extração e purificação de carboidratos Isolamento de mono, di e polissacarídeos • Diversas fontes: microorganismos e vegetais • Estudo da função ou quanAficação da produção de determinados políssacarídeos • Análise de alimentos (objeAvando: rotulagem nutricional, padronização e qualidade alimentar Métodos de separação e detecção dos açucares Ø Cromatografia em camada delgada – CCD • Usado em análise de roAna, rápida e simultânea de diversas amostras • IdenAficação e quanAficação de carboidratos de melaço Métodos de detecção dos açucares Ø Cromatografia gasosa –GC • Requer amostras voláteis e em geral é necessário derivaAzar Ø Cromatografia líquida de alta eficiênica – HPLC Troca iônica CHO (-‐OH)= pKa 12-‐14 = solução básica Fase reversa • Rápido, específico, sensível e preciso! HPLC e GC NRM e MS Ressonância magnéAca nuclear Espectrometria de massas Carboidratos derivatizados Sililação = Trime@lsilil como grupo subs@tuinte Métodos de detecção dos açucares Ø Métodos químicos clássicos (análise de açucar total ou redutor) • Titulométricos: EDTA e Lane-‐Enyon/ Luff-‐School) • Gravimétricos: Musson-‐Walker • Espectofotométricos: ADNS, Antrona, Fenol-‐sulfúrico, Somogyi-‐Nelson • EnzimáAcos: Mensuração da aAvidade de uma dada enzima substrato-‐específica
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