farmacologia

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Y-QA31, um novo antagonista do receptor de dopamina D3, exibe propriedades semelhantes a antipsicóticos em modelos animais pré-clínicos de esquizofrenia
Abstrato 
Alvo: 
Investigar os efeitos potenciais do Y-QA31, um novo antagonista do receptor de dopamina D3, como droga antipsicótica. 
Métodos: 
Efectuou-se um painel de ensaios de ligao de ligandos radioligandos para identificar as afinidades de Y-QA31 para diferentes receptores acoplados a protea G. Ensaios de ligação de [ 35 S] GTPγS e imagem de Ca 2+ foram usados ​​para avaliar suas atividades intrínsecas. O perfil antipsicótico de Y-QA31 foi caracterizado em modelos de camundongos para os sintomas positivos e déficits cognitivos da esquizofrenia e efeitos colaterais extrapiramidais com haloperidol e clozapina como controles positivos. 
Resultados: 
In vitro , o Y-QA31 é um antagonista do receptor de dopamina D3 que é 186 vezes mais potente no receptor D3 do que no receptor D2. O Y-QA31 também exibe actividades agonistas parciais do receptor 5-HT1A e antagonistas α1A adrenérgicos com afinidade média, ao passo que exibe muito pouca afinidade para outros receptores (100 vezes menor do que para o receptor D3). In vivo , o Y-QA31 (10-40 mg / kg, po ) inibiu significativamente a ruptura induzida por inibição de pré-pulso induzida por hiperlocomoção de MK-801 e metanfetamina de uma maneira dependente da dose. O Y-QA31 também inibiu a resposta de evitação e a hiperlocomoção induzida pela metanfetamina com potência menor que o haloperidol. O Y-QA31 foi eficaz no alívio da disrupção induzida pelo MK-801 do novo reconhecimento de objeto em uma dose baixa (1 mg / kg, po ). Além disso, o próprio Y-QA31 não afetou a locomoção espontânea nem induziu resposta cataléptica até sua dose atingir 120 mg / kg. 
Conclusão: 
O Y-QA31 é um antagonista seletivo de D 3 R que exibe efeitos antipsicóticos em alguns modelos animais com sintomas positivos e distúrbio cognitivo e menos efeitos colaterais extrapiramidais. 
Palavras-chave: esquizofrenia, antagonista do receptor D3, sintomas positivos, déficits cognitivos, haloperidol, clozapina 
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Introdução 
A esquizofrenia é um distúrbio neuropsiquiátrico intratável caracterizado por sintomas positivos (delírios e alucinações) e negativos (retraimento social, afeto embotado e mutismo), bem como déficits cognitivos (déficits na atenção, trabalho e memória verbal e função executiva). Os sistemas dopaminérgicos desempenham um papel dominante na regulação do desenvolvimento da esquizofrenia e, portanto, os receptores de dopamina têm sido o alvo primário da pesquisa antipsicótica 1 . Cinco tipos de subtipos de receptores de dopamina foram clonados, incluindo os receptores D 1 –D 5 . Os receptores de Dopamina D1 e D5 são classificados como receptores do tipo D1 que ativam a adenilil ciclase através do acoplamento com a proteína Gs. Os receptores de dopamina D2, D3 e D4 são classificados como receptores do tipo D2 que inibem a adenilil ciclase através do acoplamento com a proteína G1 / o2 . 
O bloqueio dos receptores de dopamina D2 (D 2 R) com haloperidol alivia com sucesso os sintomas positivos. No entanto, esse tratamento apresenta eficácia limitada em sintomas negativos e cognitivos 3 , 4 . Além disso, o haloperidol causa efeitos colaterais graves, como reações extrapiramidais e discinesia tardia, que levam à não adesão dos pacientes a esses medicamentos 3 , 4 . 
Em contraste com D 2 R, os receptores de dopamina D 3 (D 3 R) são importantes para distúrbios psicóticos nas regiões cerebrais como o nucleus accumbens (NAc), o tálamo e o córtex 5 , enquanto o D 3 R se distribui menos em o estriado, a região do cérebro associada à função de movimento. Portanto, os compostos antipsicóticos que têm como alvo D3R causam menos efeitos colaterais extrapiramidais do que aqueles que visam D2R. Estudos anteriores sugeriram que o córtex pré-frontal estava associado à ocorrência de sintomas negativos, bem como ao comprometimento cognitivo da esquizofrenia. Nos camundongos D 3 R-KO, o desempenho cognitivo foi aumentado 6 , 7 , sugerindo que o D 3 R tem um efeito regulador na esquizofrenia, especialmente em seus sintomas cognitivos e negativos. Além disso, Shaikh e colegas relataram que, em um estudo com 133 indivíduos caucasianos, o alelo Ser9 D3 estava associado à suscetibilidade à esquizofrenia 8 . O estudo de autópsia descobriu que a densidade de D 3 R no estriado ventral aumentou significativamente em pacientes com esquizofrenia, mas permaneceu relativamente normal em pacientes tratados com drogas antipsicóticas, sugerindo ainda o importante papel do D 3 R no desenvolvimento da esquizofrenia. Portanto, D 3 R tem sido considerado como um alvo potencial para agentes antipsicóticos. 
Vários antagonistas de D 3 R foram desenvolvidos. Entre eles, alguns antagonistas seletivos de D 3 R, como S33084 9 e SB-277011A (seletividade de D 3 / D 2 = 112) 10 , não são tão eficazes quanto o antagonista de D 2 R L741.626 11 na redução de sintomas positivos em animais modelos, como hiperlocomoção induzida por anfetamina e inibição pré-pulso prejudicada (PPI) induzida por apomorfina. O antagonista preferencial de D 3 R S33138 (seletividade D 3 / D 2 = 25) alivia os sintomas positivos, negativos e cognitivos da esquizofrenia 12 . Devido às propriedades farmacológicas destes compostos, contudo, os seus efeitos não podem ser atribuídos apenas a D3R, e ainda é necessário um antagonista selectivo de D3R para identificar os efeitos de D3R nos sintomas da esquizofrenia. 
No presente estudo, nós avaliamos Y-QA31, um antagonista D 3 R novo e seletivo (seletividade D 3 / D 2 = 186) com média afinidade para o receptor 5-HT 1A e o adrenoceptor α 1A . Como o bloqueio dos receptores D 3 versus D 2 é debatido no tratamento de vários sintomas da esquizofrenia, investigamos os efeitos do Y-QA31 em modelos animais com sintomas positivos e cognitivos e analisamos sua capacidade de induzir a catalepsia em camundongos para avaliar o potencial de Y-QA31 como droga antipsicótica. 
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materiais e métodos 
Materiais 
Todos os radioligandos usados ​​em nossos experimentos foram adquiridos da PerkinElmer Life Sciences (NEN, Boston, MA, EUA). Outras drogas utilizadas nos experimentos foram obtidas da Sigma (St Louis, MO, EUA). Y-QA31 (cloridrato de NN- (4- (4- (2-metoxifenil) piperazin-1- il) butil) -2-benzotiazolinona-6-carboxamida), a estrutura qu�ica mostrada na Figura 1 , foi sintetizada no Beijing Instituto de Farmacologia e Toxicologia e foi dissolvido em 2-hidroxipropil-ciclodextrina a 25% (Sigma, St. Louis, MO, EUA). hD 4 R-, hD5R-, h5-HT1AR-, h5-HT1BR-, h5-HT1DR-, h5-HT2AR-, h5-HT2CR-, h5- HT5AR -, h5-HT6R-, hA1R-, hA2AR-, hH1R-, hH2R-, hH3R-, hCB1R-, hCB2R-, hα2A- e hM 2 plasmídeos R-pcDNA3.1 (+) foram adquiridos do Centro de Recursos de cDNA do Missouri S & T (Rolla, MO, USA). 
Um arquivo externo que contém uma figura, ilustração, etc. O nome do objeto é aps2015105f1.jpg
figura 1 
A estrutura química do Y-QA31. 
Animais 
Ratos CD1 machos (pesando 18-22 g) e ratos SD (pesando 180-220 g) foram obtidos do Beijing Animal Center. Os ratinhos foram mantidos em gaiolas com acesso irrestrito a comida e água a 21 ± 1 ° C, 60% ± 5% de humidade e sob um ciclo claro / escuro de 12 horas. Todos os protocolos neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Uso Animal e Proteção do Instituto de Farmacologia e Toxicologia de Beijing. 
Estudos in vitro em Y-QA31 
Foram realizados ensaios de ligação de ligandos radioactivos para identificar a afinidade de Y-QA31 para receptores acoplados a proteína G, ensaios de ligação de [35S] GTPyS e ensaios de cálcio intracelular foram realizados para identificar a actividade intrínseca de Y-QA31. Os protocolos foram realizados conforme relatos prévios 3 , 13 , 14 , 15 , com algumas modificações. 
Ensaios de ligação de radioligandos e receptores 
Os ensaios de liga�o ligando-receptor de radioligante foram utilizados para identificar a afinidade de Y-QA31 para receptores acoplados a prote�a G e os protocolos
foram realizados de acordo com relat�ios anteriores 3 , 13 com algumas modifica�es. As reacções foram iniciadas adicionando membranas diluídas e foram incubadas a 25 ° C, 30 ° C ou 37 ° C durante 30-60 min, dependendo do ensaio individual, até que a ligação atingisse o equilíbrio (ver Tabela 1 para detalhes). A ligação não específica foi definida na presença de concentrações saturantes dos compostos não rotulados listados na Tabela 1 . As concentrações de Y-QA31 variaram de 10 −12 a 10 −5 mol / L. A radioactividade ligada a filtros foi quantificada por cintilação líquida num MicroScint-20 (PerkinElmer LAS Ltd, Beaconsfield, UK). Os valores de IC50 foram analisados ​​por regressão não linear usando Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, CA, EUA). Os valores de Ki foram calculados de acordo com Cheng-Pruss de: Ki = IC50 / (1 + L / Kd ), em que L é a concentração do radioligando e Kd é a constante de dissociação. 
tabela 1 
Detalhes dos ensaios de ligação radioligando-receptor. 
	Receptor 
	Espécies 
	Linha celular ou tecido hospedeiro 
	Radioligando 
	Ligando não rotulado 
	Buffer de ensaio 
	Temperatura de reação / tempo 
	D 1 
	Humano 
	HEK293 
	3 H- SCH23390 (1 nmol / L) 
	(+) - Butaclamol (10 μmol / L) 
	UMA 
	25 ° C / 60 min 
	D 2 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-Spiperone (1 nmol / l) 
	Haloperidol (10 μmol / l) 
	UMA 
	25 ° C / 60 min 
	D 3 
	Humano 
	CHO 
	3 H-Spiperone (1,5 nmol / l) 
	Haloperidol (10 μmol / l) 
	UMA 
	25 ° C / 60 min 
	D 4 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-Spiperone (1 nmol / L) 
	Haloperidol (10 μmol / l) 
	UMA 
	25 ° C / 60 min 
	D 5 
	Humano 
	HEK293 
	3 H- SCH23390 (1 nmol / L) 
	(+) - Butaclamol (10 μmol / L) 
	UMA 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 1A 
	Humano 
	HEK293 
	3H-8-OH-DPAT (1 nmol / l) 
	Way100635 (10 μmol / l) 
	H 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 1B 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-LSD (6 nmol / l) 
	5-HT (10 μmol / l) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 1D 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-LSD (10 nmol / l) 
	5-HT (10 μmol / l) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 2A 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-Spiperone (1 nmol / l) 
	Clozapina (10 μmol / l) 
	UMA 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 2C 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-LSD (4 nmol / l) 
	5-HT (10 μmol / l) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 5A 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-LSD (1 nmol / l) 
	5-HT (10 μmol / l) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 6 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-LSD (1 nmol / l) 
	5-HT (10 μmol / l) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	5-HT 7 
	Rato 
	Tálamo de rato 
	3 H-LSD (4 nmol / l) 
	5-HT (10 μmol / l) 
	B 
	37 ° C / 30 min 
	α 1A 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-Parzosina (1 nmol / L) 
	Cloropromazina (10 μmol / l) 
	C 
	25 ° C / 60 min 
	α 1B 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-Parzosina (1 nmol / L) 
	Fentolamina (10 μmol / l) 
	C 
	25 ° C / 60 min 
	α 2 
	Rato 
	Cérebro 
	3H-Clonidina (2 nmol / l) 
	Yohimbina (10 μmol / l) 
	C 
	37 ° C / 30 min 
	β 1 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-DHA (1 nmol / l) 
	Isopropil noradrenalina (10 μmol / L) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	M 1 
	Humano 
	CHO 
	3 H-NMS (1 nmol / l) 
	Atropina (10 μmol / l) 
	D 
	25 ° C / 60 min 
	M 2 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-NMS (1 nmol / l) 
	Atropina (10 μmol / l) 
	D 
	25 ° C / 60 min 
	M 3 
	Humano 
	CHO 
	3 H-NMS (1 nmol / l) 
	Atropina (10 μmol / l) 
	D 
	25 ° C / 60 min 
	M 4 
	Humano 
	CHO 
	3 H-NMS (1 nmol / l) 
	Atropina (10 μmol / l) 
	D 
	25 ° C / 60 min 
	M 5 
	Humano 
	CHO 
	3 H-NMS (1 nmol / l) 
	Atropina (10 μmol / l) 
	D 
	25 ° C / 60 min 
	μ 
	Humano 
	CHO 
	3H-Dipnorfina (1 nmol / l) 
	Naloxona (10 μmol / l) 
	E 
	37 ° C / 30 min 
	δ 
	Humano 
	CHO 
	3H-Dipnorfina (1 nmol / l) 
	Naloxona (10 μmol / l) 
	E 
	37 ° C / 30 min 
	κ 
	Humano 
	CHO 
	3H-Dipnorfina (1 nmol / l) 
	Naloxona (10 μmol / l) 
	E 
	37 ° C / 30 min 
	Um 1 
	Humano 
	CHO 
	3H-DPCPX (1 nmol / l) 
	R-PIA (10 μmol / l) 
	F 
	37 ° C / 30 min 
	Um 2A 
	Humano 
	HEK293 
	3 H- CGS21680 (10 nmol / L) 
	NECA (10 μmol / l) 
	F 
	25 ° C / 60 min 
	H 1 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-pirilamina (1 nmol / l) 
	Prometazina (10 μmol / l) 
	B 
	37 ° C / 30 min 
	H 2 
	Humano 
	HEK293 
	3 H-tiotidina (3 nmol / l) 
	Cimetidina (10 μmol / l) 
	B 
	37 ° C / 30 min 
	H 3 
	Humano 
	HEK293 
	3H-histamina (10 nmol / l) 
	Prometazina (10 μmol / l) 
	B 
	25 ° C / 60 min 
	CB 1 
	Humano 
	HEK293 
	3H-CP55940 (1 nmol / L) 
	VITÓRIA 55,212-2 (10 μmol / L) 
	G 
	30 ° C / 60 min 
	CB 2 
	Humano 
	HEK293 
	3H-CP55940 (1 nmol / L) 
	VITÓRIA 55,212-2 (10 μmol / L) 
	G 
	30 ° C / 60 min 
Abra em uma janela separada 
Tampão A (em mmol / L, pH 7,4): 50 Tris-HCl, 120 NaCl, 5 KCl, 5 EDTA-Na2.2H2O, 5 MgCl2, 1,5 CaCl2; 
Tampão B (em mmol / L, pH 7,4): 50 Tris-HCl, 10 MgCl2, 1 EDTA-Na2-2H2O; 
Tampão C (em mmol / L, pH 7,4): 20 Tris-HCl, 145 NaCl; 
Tampão D (em mmol / L, pH 7,4): 10 HEPES, 0,1 EDTA-Na2-2H2O; 
Tampão E (em mmol / L, pH 7,4): 50 Tris-HCl; 
Tampão F (em mmol / L, pH 7,4): 50 Tris-HCl, 2 MgCl2, 1 ADA; 
Tamp� G (pH 7,4): 10 mmol / L de HEPES, 10 mmol / L de MgCl2, 0,3 g / L de BSA; 
Tampão H (em mmol / L, pH 7,4): 130 NaCl, 4,8 KCl, 1,2 Na2HPO4, 1,3 CaCl2, 1,2 MgSO4, 10 glucose, 25 HEPES. 
Ensaio de ligação de [ 35 S] GTPγS 
Para testar a atividade intrínseca do Y-QA31 nos receptores D2 e ​​D3 da dopamina 13 , a proteína da membrana celular (35-50 μg) foi pré-incubada com quinpirol não marcado em um tampão de reação contendo 3 μmol / L de GTP a 30 ° C. por 30 min. Em seguida, adicionou-se 1,0 nmol / L [35S] GTPyS para incubação durante mais 30 min. A ligao basal de [35S] GTP? S foi medida na auscia de quinpirole. A ligação não específica foi medida na presença de 0,2 nmol / L [ 35 S] GTPγS e 40 µmol / L de GTPγS não marcado. Para testar a atividade de Y-QA31 em receptores 5-HT1A, os procedimentos para o ensaio de ligação com [35S] GTPγS foram levemente modificados a partir do método relatado 16 . A actividade intrínseca (agonista ou antagonista) de Y-QA31 na ligação de [35S] GTPγS foi medida na ausência ou presença de quinpirole (10 μmol / L) ou 8-OH-DPAT (10 μmol / L, um 5-HT Agonista do receptor 1A ). As concentrações de Y-QA31 variaram de 10 −10 a 10 −5 mol / L. Os valores de IC50 foram determinados como descrito acima. 
Imagens de Ca 2+ 
A linha celular utilizada para imagiologia de Ca2 + foi c�ulas HEK293 expressando estavelmente o adrenorreceptor? 1A (c�ulas HEK293- α1A ). As culas foram lavadas com tamp de HBSS (145 mmol / L NaCl, 5 mmol / L KCl, 1,2 mmol / L NaH2PO4, 1,2 mmol / L CaCl2, 1,3 mmol / L MgCl2, 10 mmol / L glucose, 20 mmol / L HEPES e 1 mmol / L de probenecida (pH 7,4) e co-incubadas com 10 µmol / L de Fluo-3 / AM em meio extracelular por 30 min a 37 ° C. Um microscópio confocal a laser foi usado para medir o cálcio intracelular. A atividade intrínseca (agonista ou antagonista) do Y-QA31 (10 μmol / L) para adrenoceptor α 1A foi testada na ausência ou presença de norepinefrina (10 μmol / L). 
Estudos in vivo de Y-QA31 
Hiperlocomoção induzida por metanfetamina ou MK-801 e locomoção espontânea em camundongos 
No dia anterior ao teste, os camundongos foram colocados em câmaras de atividade espontânea (40 cm × 40 cm × 40 cm) por um período de 30 minutos de habituação. No dia do teste, administrou-se aos animais o veulo ou fmaco 20 min antes da injeco de metanfetamina (0,5 mg / kg, ip) ou MK-801 (0,25 mg / kg, ip). Um sistema de vídeo foi usado para rastrear o movimento por 1 he registrar a distância horizontal percorrida. 
Ruptura da inibição do prepulse (PPI) pela metanfetamina em camundongos 
Os procedimentos utilizados foram relatados anteriormente por Millan 12 , com algumas modificações. Ratinhos CD1 machos foram administrados o fármaco ou veículo 20 min antes da injecção de metanfetamina (6 mg / kg, ip) ou veículo e depois colocados individualmente nas câmaras de sobressalto ligadas através de uma interface a um computador que controlava os estímulos auditivos e monitorizava as respostas de
sobressalto. A sessão de teste do parâmetro prepulse consistiu em 4 tipos de testes: testes de sobressalto de estímulos (somente pulso), dois tipos de testes pré-implantes isolados (pré-pulso) e dois tipos diferentes de pré-pulsos (prepúcio + pulso). O tipo de teste de pulso consistiu na apresentação de um pulso de 20 ms e 115 dB. Os dois tipos de testes pré-implantes isolados consistiam de estímulos pré-pulsos de 4-ms, 80-dB ou 85-dB que foram administrados aleatoriamente. Os dois tipos de tentativas prepulse + pulse consistiam em prepulsos de 80-dB e 85-dB, seguidos 30 ms depois (o intervalo entre estímulos; o tempo entre o deslocamento do prepulso e o início do pulso) pelo pulso de sobressalto de 20 ms e 115-dB. Após um período de aclimatação de 5 minutos com ruído de fundo de 65 dB, 10 dos 4 tipos experimentais (um total de 40 tentativas) foram apresentados em uma ordem pseudo-aleatória com um intervalo médio entre sessões de 15 s para um total de 40 tentativas . A PPI foi definida como a porcentagem de redução na amplitude do sobressalto na presença de prepúcio versus ausência de prepúcio. % PPI = 100 - [(amplitude do sobressalto para prepulse + pluse) / (amplitude do sobressalto somente para pluse)] × 100. 
Respostas evitadas condicionadas (CAR) em camundongos 
Os camundongos foram treinados para evitar um choque elétrico (0,16 mA, 5 s) ao trocar os compartimentos de uma caixa de transporte com a aparência de uma luz. Os ratos foram treinados para 30 ensaios por dia, e o intervalo intertrial foi de 15-30 s, administrados aleatoriamente. Cada ensaio consistiu em um período de 10 segundos de luz. O rato recebeu um choque se não alterou os compartimentos ou evitou um choque ao comutar durante o período de “luz acesa”. O teste foi realizado quando cada rato aprendeu a evitar o choque em mais de 24 ensaios por dia. O fármaco ou veículo foi administrado 30 min antes do teste. 
Indução de catalepsia em camundongos 
O procedimento foi realizado de acordo com Reavill 10 com algumas modificações. As caudas dos animais foram levantadas para que os membros anteriores pudessem tocar a borda superior do bloco de madeira com 3 cm de altura. Em seguida, os membros posteriores foram colocados suavemente na área de trabalho e a duração despendida nessa posição foi determinada. Os animais que não se movimentaram por mais de 30 s foram categorizados como animais positivos. Três medidas independentes foram obtidas, separadas por intervalos de 15 min. O fármaco ou veículo foi administrado 30 min antes do teste. 
Reconhecimento de objeto novo (NOR) em camundongos 
O procedimento foi realizado de acordo com Karasawa 14 com algumas modificações. A tarefa foi realizada em uma câmara de 40 cm × 50 cm × 50 cm. Todos os animais receberam uma sessão de habituação durante a qual eles foram deixados a explorar livremente o ambiente por 10 min. Nenhum objeto foi colocado na câmara durante o julgamento de habituação. 24 horas após a habituação, o treinamento foi realizado colocando camundongos individuais em uma câmara por 5 min, em que dois objetos idênticos (objeto A1 e A2) foram posicionados em dois cantos adjacentes, a 10 cm das paredes. Em um teste de memória de curto prazo (STM) dado 1,5 h após o treinamento, os ratos exploraram a câmara por 5 min na presença de um objeto familiar e um novo. Todos os objetos apresentados tinham texturas, cores e tamanhos semelhantes, mas formas distintas. Um índice de reconhecimento calculado para cada animal foi expresso pela razão T B / (T A + T B ) (T A = tempo gasto explorando o objeto familiar A; T B = tempo gasto explorando o novo objeto B). Entre os ensaios, os objetos foram lavados com uma solução de etanol a 10%. Exploração foi definida como cheirar ou tocar o objeto com o nariz e / ou patas dianteiras. Os ratinhos foram administrados com Y-QA31, haloperidol ou clozapina nas doses indicadas ( po , uma vez por dia) durante quatro dias antes do dia do teste. No dia do teste (5o dia), os ratinhos foram injectados com MK-801 (0,2 mg / kg, ip) com ou sem um dos fármacos de crescimento 30 min antes da sessão de treino. 
Análise estatística 
Os dados foram expressos como a média ± SEM. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando o Prism 5 (GraphPad Software Incorporate, CA, EUA). A significância estatística dos dados da catalepsia foi calculada pelo teste exato de Fisher. Outros dados foram testados por ANOVA one-way ou ANOVA two-way para comparar as diferenças entre os vários grupos. P <0,05 foi considerado estatisticamente significativo. 
Vamos para:
Resultados 
Y-QA31 seletivamente antagonizou D 3 R sobre D 2 R 
Nos ensaios de ligação radioligante-receptor, o Y-QA31 ligou-se à dopamina recombinante D3R com um valor de IC50 de 1,74 ± 0,47 nmol / L e um valor de Ki de 0,28 ± 0,08 nmol / L, sugerindo