Prática 03

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UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS
FCBA– FACULDADE DE CIENCIAS BIOLÓGICAS E AMBIENTAIS
CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Prática de Biologia Celular
Eucariontes vegetais estudo de células da epiderme do catafilo da cebola
Prof. Dr. Marcos Gino Fernandes
Mariana Palachini de Oliveira
	
DOURADOS, 1°SEMESTRE DE 2012
Introdução:
 A célula é a unidade básica e funcional de todos os seres vivos, existindo dois tipos distintos de células, as procarióticas que são as células mais simples, pois não têm sistema endomembranar, nem um núcleo onde individualizar o DNA e as eucarióticas que são as mais complexas, pois têm o DNA individualizado no núcleo e têm um sistema endomembranar bastante rico. Dividem-se em dois grupos: animais e vegetais. Emboraas célulasvegetais tenham organelas semelhantes aos das células animais, existem diferenças. As primeiras têm parede celular, cuja função é proteger e suportar as células, contêm plastos, entre os quais os cloroplastos, e têm vacúolos que atingem grandes dimensões com a idade, sendo estes últimos responsáveis pelo armazenamento de diversos tipos de substâncias como proteínas e açúcares. No entanto, todas as célulaseucarióticasapresentam: 
Membranacelular –limitaexteriormente o citoplasma, sendo responsável pelas trocas de substâncias entre o meio intracelular e extracelular. Citoplasma – espaço intracelular ocupado por uma massa semifluida, onde se encontram dispersos as várias organelas. Núcleo – organela de grandes dimensões, onde se encontra o DNA, delimitado por uma membrana nuclear, cuja função é controlar a atividade celular. Ribossomos – estruturas constituídas de RNA e proteínas; podem estar livres no hialoplasma ou presos entre si por uma fita de RNA, nesse caso, juntam os aminoácidos do citoplasma para formar cadeias de proteínas. Retículo endoplasmático-constituído de um sistema de duplasmembranaslipoprotéicas. O retículo endoplasmático liso, é constituído por duas membranas e o retículo endoplasmático rugoso  possui ribossomos aderidos do lado externo. O retículo liso facilita reações enzimáticas, já que as enzimas se aderem à sua membrana, sintetiza lipídios, regula a pressão osmótica (armazenando substâncias em sua cavidade), atua no transporte de substâncias (comunicando-se com a carioteca e com a membrana celular).O retículo rugoso além de desempenhar todas as funções do retículo liso ele ainda sintetiza proteínas, devido a presença de ribossomos. Mitocôndrias - organelas constituídas de duas membranas; a internasofreimaginações, formando cristasmitocondriais queaumentam a superfície de absorção de substâncias existentes na matriz mitocondrial. O papel da mitocôndria é a liberação de energia  para o trabalho celular. Os vacúolos - os vacúolos das células vegetais são interpretados com regiões expandidas do retículo endoplasmático,sua função do vacúolo é regular as trocas de água que ocorrem na osmose. Aparelho de Golgi - o aparelho de Golgi está presente em praticamente todas as células eucariontes, e consiste de bolsas membranosas achatadas, empilhadas como pratos. O aparelho de Golgi atua como centro de armazenamento, transformação, empacotamento e remessa de substâncias da célula.
 Citoesqueleto - um verdadeiro “esqueleto” formado por vários tipos de fibras de proteínas cruza a célula em diversas direções, dando-lhe consistência e firmeza. Entre as fibrasprotéicas componentesdesse “citoesqueleto” podemsercitadosos microfilamentos de actina, os micro túbulos e os filamentos intermediários. A epiderme da cebola, sendo esta uma película fina, constituída por uma única camada de células, que se encontra na superfície côncava de cada uma das túnicas do bolbo da cebola. Coloração - A coloração é uma técnica importante para o estudo das células são Microscópio Ótico, porque cada constituinte celular tende a absorver um determinado corante, evidenciando assim uma determinada estrutura. O corante vital, penetra a célula sem a matar e o não vital ao penetrar a célula á mata. As diferentes estruturas celulares apresentam pouco contraste óptico, isto é, têm um determinado grau de transparência à luz, de modo que, aparentemente, o conteúdo celular é homogêneo, por isso temos de recorrer a estratégias que permitam melhor visualização do conteúdo celular. 
Objetivos:
>Conhecer a morfologia de uma célula eucariótica vegetal.
>Realizar a coloração de células vegetais.
>Diferenciar material corado e não corado.
>Observar núcleo, citoplasma e parede celular.
Material:
>Catáfilo de cebola. >Placa de Petri. >Lâmina e lamínula. >Lugol ou cloreto de zinco iodado. >Papel absorvente. >Conta-gotas ou pipeta. >Pinça.
Procedimento A:
Destacou-se um pedaço da epiderme do catáfilo da cebola (de preferência a parte interna).
Distendeu-se o material sobre a lâmina com auxílio de um pincel.
Pingou-se uma gota de água sobre o material distendido.
Iniciou-se a colocação da lamínula em posição de 45° com relação à lamínula e foi se abaixando lentamente até que a mesma ficou totalmente sobre a lâmina, evitando formação de bolhas.
Ouve excesso de líquido, retirou-se com papel absorvente, para manter a lamínula fixa.
Analisou-se em aumentos crescentes, utilizando as objetivas da 40x, 100x, 400x e 1000x.
Esquematizou-se nos aumentos de 400x e 1000x para o relatório, identificando as estruturas celulares reconhecidas.
Procedimento B:
Realizaram-se os mesmos procedimentos I e II do procedimento A.
Pingou-se sobre o material distendido gotas de lugol, deixando corar por 5 minutos.
Iniciou-se a colocação da lamínula como descrito no procedimento A.
Ouve excesso de líquido, retirou-se com papel absolvente, para manter a lamínula fixa.
Analisou-se em aumento crescentes, utilizando as objetivas de 40x, 100x, 400x e 1000x.
Esquematizou-se nos aumentos de 400x e 1000x para o relatório, identificando as estruturas celulares reconhecidas.
Resultados:
Aumento de 400x-Sem corante Aumento de 1000x-Sem corante 
Aumento de 400x-Com corante Aumento de 1000x-Com corante 
Discussão:
1.Quais as estruturas das células da epiderme da cebola que puderam ser observadas?
R.: Núcleo, nucléolo, núcleo plasma, Leucoplasto, citoplasma e parede celular.
2. O que é muito importante para observação de um material analisado em microscopia óptica(que utiliza luz branca)?
R.:Que o corte do material seja fino para que a luz do microscópio possa passar por ele.
3. A observação das células é melhor quando estão coradas ou não coradas? Por quê?
R.: Coradas. Porque a grande maioria das estruturas são transparentes e incoloreso que dificulta a sua observação.
4. Com que finalidade são usados os corantes? Quando seu uso é dispensado?
R.: É necessário usar corantes na observação de células ao Microscópio Óptico, porque estes evidenciam determinadas estruturas das células. São dispensáveis quando as células possuem cromoplastos sejam eles Eritroplasto, Xantoplasto, Cloroplasto entre outros.
5. Qual a diferença de corante supra-vital, vital, e não vital?
R.: Supra-vital: observação da célula utilizando corantes vitais porque podem ser usados em células vivas sem as matarem. Os corantes podem ser vitais ou não vitais, conforme permitam colorar células vivas e mantê-las assim ou não. O mesmo corante pode ser vital ou não, dependendo da concentração em que se encontra.
6. Defina o preparo de lâminas ditas ‘a fresco’ ou ‘não permanentes’ e o preparo de lâminas ditas ‘permanentes’.
R.: Células permanentes: células de ciclo vital muito longo, coincidindo, geralmente, com o tempo de vida do indivíduo .Se a lâmina não esta corada (exame a fresco): a observação é feita com objetivas secas, do seguinte modo: Desce-se o condensador e sobe-se o diafragma para que a iluminação não seja muito intensa, já que as lâminas não estão coradas.
7. Porque é necessário fixar o material biológico destinado ao preparo de lâminas permanentes?
R.: Para assegurar a preservação das estruturas morfológicas das células e tecidos, como se estivesse no animal “in vivo”. 
Conclusão: 
Conclui-se que os corantes específicos facilitam muito a visualização das organelas presentes nas células por que sem a utilização do corante não conseguimos visualizar o núcleo, mas sim a parede celular. 
Referencias Bibliográficas:
JUNQUEIRA, L.C. & CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 7a edição. Ed. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro. 2000. 339 p.
http://www.prof2000.pt/users/biologia/ptemporarias.htm
http://www.webciencia.com/11_03celula.htm
Técnicas Laboratoriais de Biologia, Bloco I; Escola Secundária Francisco Franco
http://www.sóbiologia.com.br\conteudos\citologia\cito24.php