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Extração de DNA a partir da mucosa oral

Protocolo de extração de DNA de mucosa bucal com lista de materiais (copo, espátula/cotonete, solução de sacarose 3%, tubo de ensaio, etanol gelado, banho a 60°C, micropipeta 500 μL, detergente 25%) e procedimento passo a passo: bochecho, raspagem, sal, detergente, aquecer e precipitar com álcool.

Material
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Extração de DNA de mucosa bucal (individual ou por grupo):
1. 1 copo descartável
2. 1 espátula de madeira ou cotonete
3. 15 mL de solução de sacarose a 3%
4. 1 tubo de ensaio
5 Uma proveta para 15 mL
6. Etanol absoluto gelado
7. Banho à 60 ºC
8. Estantes para tubos de ensaio
9. Caixa de isopor com gelo
10. 1 micropipeta de 500 μL
11. 1 mL de detergente neutro diluído a 25%
Procedimento:
1. Higienizar a boca fazendo bochechos com água ou se possível escovando os dentes.
2- Delicadamente raspar a mucosa bucal com uma espátula de madeira.
3- Colocar aproximadamente 15mL de água com açúcar na boca (1 colher de chá de açúcar em 100 ml de água).
4- Bochecar vigorosamente por 30 segundos
5- Recolher o volume obtido do bochecho no mesmo copo descartável. Mergulhar a espátula ou cotonete usado na raspagem da mucosa no volume obtido do bochecho. 
6- Transferir apenas 5 mL do volume obtido no passo 5 para um tubo de ensaio e adicionar uma pitada de sal de cozinha. Homogenizar invertendo o tubo.
7-Adicionar 500 μL de detergente neutro diluído à 25% (1:4) e homogeneizar cuidadosamente.
8- Aquecer a 60 ºC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo.
9- Adicionar álcool gelado (absoluto se possível) pelas bordas do tubo lentamente, até que se alcance pelo menos 1cm de espessura. O DNA, insolúvel no álcool, ficará visível.

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