Apostila de Coleta Sanguínea, Anticoagulantes e Coloração Hematológica

Prévia do material em texto

UNIVERSIDADE	
  FEDERAL	
  DO	
  AMAZONAS	
  
FACULDADE	
  DE	
  CIÊNCIAS	
  FARMACÊUTICAS	
  
DISCIPLINA:	
  HEMATOLOGIA	
  CLÍNICA	
  
PROFESSOR:	
  FRANCISCO	
  BARROS	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  
COLETA	
  DE	
  SANGUE	
  	
  	
   Cada	
   exame	
   tem	
   início	
   no	
   preparo	
   do	
  material	
   a	
   ser	
   utilizado,	
   seguido	
  pela	
   coleta	
   da	
   amostra	
   biológica	
   e,	
   posteriormente,	
   pelo	
   procedimento	
  laboratorial.	
  Quaisquer	
  desses	
  itens	
  são	
  de	
  grande	
  importância	
  para	
  o	
  resultado	
  final	
  da	
  análise.	
  	
  
1.	
  Origem	
  do	
  Sangue	
  para	
  Coleta	
  	
   -­‐	
  sangue	
  capilar	
  	
   -­‐	
  sangue	
  venoso	
  	
  	
   -­‐	
  sangue	
  arterial	
  	
   	
  	
  Para	
  exames	
  análises	
  hematológicas	
  é	
  melhor	
  colher	
  sangue	
  em	
  punção	
  venosa.	
  Quando	
   isto	
  não	
   for	
  possível,	
   algumas	
  determinações	
  podem	
  ser	
   feitas	
  em	
   sangue	
   capilar.	
   Para	
   gasometrias	
   podem	
   ser	
   colhidos	
   sangues	
   arterial	
   e	
   ou	
  venoso.	
  	
  Cuidados	
  Técnicos	
  -­‐ observar	
  se	
  o	
  anticoagulante	
  é	
  o	
  exigido	
  para	
  as	
  provas	
  solicitadas	
  e	
  se	
  o	
   volume	
   de	
   sangue	
   a	
   ser	
   coletado	
   corresponde	
   ao	
   indicado	
   para	
   a	
  quantidade	
  de	
  anticoagulante;	
  -­‐ saber	
  se	
  o	
  paciente	
  faz	
  uso	
  de	
  medicamentos	
  que	
  possam	
  vir	
  a	
  alterar	
  os	
  resultados.	
  
2.	
  Sangue	
  Capilar	
  Locais:	
  	
  -­‐	
  superfície	
  plantar	
  do	
  calcanhar	
  (nas	
  crianças)	
  -­‐	
  lobo	
  da	
  orelha	
  ou	
  polpa	
  digital	
  (adultos)	
  
Cuidados:	
  	
  -­‐ paciente	
  acomodado	
  –	
  colher	
  dedo	
  da	
  mão;	
  -­‐ não	
  utilizar	
  local	
  edemaciado,	
  inflamado	
  ou	
  congestionado;	
  -­‐ fluxo	
  livre	
  de	
  sangue	
  é	
  essencial	
  para	
  obter	
  resultados	
  satisfatórios	
  -­‐ apos	
  punção	
  não	
  espremer	
  energicamente.	
  
	
  
Material	
  -­‐ pedaços	
  de	
  algodão	
  embebido	
  em	
  álcool	
  a	
  70%;	
  -­‐ algodão	
  seco	
  e	
  papel	
  de	
  filtro;	
  -­‐ lancetas	
  esterilizadas.	
  	
  
Técnica	
  -­‐ preparar	
   o	
   dedo	
   da	
   mão	
   esquerda	
   colocando-­‐o	
   com	
   a	
   extremidade	
  distal	
  voltada	
  para	
  baixo,	
  favorecendo	
  o	
  ingurgitamento	
  pelo	
  sangue;	
  -­‐ esfregar	
  bem	
  o	
  local	
  com	
  o	
  algodão	
  embebido	
  no	
  álcool	
  fazendo	
  assim	
  a	
  anti-­‐sepsia	
  e	
  elevando	
  a	
  quantidade	
  de	
  sangue	
  no	
  local.	
  Deixar	
  secar	
  e	
  a	
  circulação	
  voltara	
  ao	
  normal;	
  -­‐ segurar	
   firme	
   o	
   dedo	
   e	
   fazer	
   picada	
   de	
   2	
   a	
   3mm	
   com	
   a	
   lanceta	
   (o	
  sangue	
  deve	
  fluir	
  espontaneamente);	
  -­‐ desprezar,	
   com	
   papel	
   de	
   filtro,	
   a	
   1ª	
   gota	
   que	
   contêm	
   líquidos	
  tissulares	
  e	
  material	
  exógeno	
  provenientes	
  da	
  pele;	
  -­‐ após	
  a	
  coleta,	
  colocar	
  um	
  pedaço	
  de	
  algodão	
  sobre	
  a	
  lesão,	
  instruindo	
  o	
  paciente	
  a	
  comprimi-­‐lo	
  contra	
  o	
  polegar	
  até	
  cessar	
  o	
  sangramento.	
  	
  
Desvantagens	
  -­‐ menor	
  precisão,	
  devido	
  às	
  variações	
  de	
  fluxo;	
  -­‐ as	
   1ª	
   espécimes	
   tendem	
   a	
   números	
   menores	
   de	
   células	
   devido	
   à	
  diluição	
  de	
  sangue	
  com	
  os	
  líquidos	
  intersticiais;	
  -­‐ mesmo	
   fluindo	
   normalmente,	
   o	
   numero	
   de	
   células	
   e	
   a	
   hemoglobina	
  são	
  ligeiramente	
  inferiores;	
  -­‐ não	
  usar	
  sangue	
  capilar	
  para	
  contagem	
  de	
  plaquetas,	
  devido	
  a	
  rapidez	
  com	
  que	
  aderem	
  às	
  superfícies	
  da	
  lesão,	
  reduzindo	
  sua	
  contagem.	
  	
  
	
  
	
  
Vantagem	
  -­‐ os	
  esfregaços	
  feitos	
  com	
  sangue	
  capilar	
  são	
  preferíveis	
  aos	
  feitos	
  com	
  sangue	
   colhido	
   com	
   anticoagulantes,	
   mas	
   o	
   sangue	
   deve	
   fluir	
  livremente	
  para	
  evitar	
  alterações	
  da	
  distribuição	
  dos	
  leucócitos.	
  	
  
3.	
  Sangue	
  Venoso	
  
	
  	
   obtido	
   pela	
   punção	
   venosa	
   que	
   fornece	
   quantidades	
   apreciáveis	
   de	
  sangue	
  usado	
  nos	
  exames	
  hematológicos	
  e	
  bioquímicos.	
  	
  
Locais	
  de	
  Coleta	
  -­‐ fossa	
  anticubital	
  (preferência)	
  -­‐ veias	
   femural,	
   fibular,	
   temporal,	
   jugular	
   externa	
   (para	
   crianças	
  menores	
   de	
   3	
   anos	
   e	
   pacientes	
   adultos	
   de	
   difícil	
   acesso	
   em	
   outras	
  localizações).	
  	
  
Seringas	
  -­‐ de	
   dimensão	
   apropriada	
   à	
   quantidade	
   de	
   volume	
   sanguíneo	
   a	
   ser	
  colhido.	
  	
  
Agulhas	
  -­‐ calibre	
   e	
   comprimento	
   devem	
   ser	
   	
   escolhidos	
   para	
   cada	
   caso	
  específico	
  e	
  de	
  modo	
  a	
  evitar	
  hemólise,	
  levando-­‐se	
  em	
  conta	
  o	
  calibre	
  e	
   a	
   profundidade	
   da	
   veia	
   a	
   ser	
   puncionada.	
   Ex:	
   20x5,5	
   (20mm	
   de	
  comprimento/0,55mm	
   de	
   diâmetro	
   –	
   insulina),	
   25x8	
   (25mm	
   de	
  comprimento/0,8mm	
  de	
  diâmetro	
  –	
  hemograma);	
  -­‐ quanto	
  maior	
   o	
   numero	
   de	
   escala,	
  maior	
   é	
   o	
   diâmetro	
   da	
   agulha.	
   O	
  comprimento	
  da	
  agulha	
  depende	
  da	
  profundidade	
  da	
  veia;	
  -­‐ calibre	
  médio	
  ideal:	
  0,7	
  a	
  0,8	
  para	
  veias	
  periféricas.	
  	
  
Tubos	
  a	
  vácuo	
  
-­‐ o	
   uso	
   de	
   a	
   vácuo	
   e	
   agulhas	
   bipolares(ex:	
   VACUTEINER)	
   nada	
  acrescenta	
  ao	
  método.	
  Preferi-­‐los	
  se	
  mais	
  econômicos,	
  ou	
  se	
  achar	
  de	
  melhor	
  praticidade,	
  mas	
  nunca	
  reusá-­‐los	
  refazendo	
  o	
  vácuo.	
  	
  
Material	
  -­‐ seringa	
  apropriada	
  (limpa,	
  seca	
  e	
  esterilizada);	
  -­‐ agulhas	
  25x7;	
  25x8	
  ou	
  25x10	
  (secas	
  e	
  esterilizadas);	
  -­‐ garrote	
  de	
  borracha;	
  -­‐ frascos	
  com	
  ou	
  sem	
  anticoagulantes	
  devidamente	
  etiquetados.	
  Técnica	
  (para	
  veias	
  periféricas	
  antecubitais):	
  -­‐ paciente	
  deitado	
  ou	
  sentado	
  (não	
  colocar	
  o	
  paciente	
  de	
  pé);	
  -­‐ colocar	
   o	
   torniquete	
   em	
   torno	
  do	
  braço,	
   cinco	
   centímetros	
   acima	
  da	
  fossa	
  antecubital;	
  -­‐ mandar	
  o	
  paciente	
  fechar	
  a	
  mão;	
  -­‐ escolher	
  a	
  veia	
  mais	
  proeminente,	
  apalpando-­‐a;	
  -­‐ fazer	
  a	
  anti-­‐sepsia	
  com	
  álcool	
  70%	
  sobre	
  a	
  veia,	
  dando	
  boa	
  margem	
  de	
  segurança.	
  Deixar	
  secar;	
  -­‐ fixar	
   a	
   veia,	
   distendendo	
   a	
   pele	
   do	
   braço	
   com	
   o	
   auxílio	
   da	
   mão	
  esquerda	
  e	
  do	
  polegar;	
  -­‐ introduzir	
   a	
   agulha	
   em	
   ângulo	
   suave	
   e	
   de	
   uma	
   só	
   vez,	
   atingindo	
   o	
  lúmen	
  da	
  veia;	
  -­‐ aspirar	
  o	
  sangue	
  sem	
  a	
  formação	
  de	
  bolhas	
  de	
  ar	
  dentro	
  da	
  seringa;	
  -­‐soltar	
  o	
  torniquete	
  e	
  instruir	
  o	
  paciente	
  a	
  abrir	
  a	
  mão;	
  -­‐ retirar	
   a	
   agulha	
   da	
   seringa	
   e	
   transferir	
   o	
   sangue	
   para	
   o	
   frasco	
  apropriado,	
  com	
  ou	
  sem	
  anticoagulante,	
  conforme	
  o	
  exame	
  solicitado	
  exija	
  sangue	
  total,	
  soro,	
  plasma	
  ou	
  desfibrinado;	
  -­‐ tampar	
   o	
   frasco	
   e	
  misturar	
   suavemente	
   por	
   inversão	
   ou	
   rotação	
   até	
  que	
  o	
  anticoagulante	
   seja	
   completamente	
  dissolvido	
   (esta	
  etapa	
  só	
  é	
  necessária	
  para	
  amostra	
  com	
  anticoagulante).	
  	
  
Cuidados	
  
-­‐ normalmente	
  as	
  punções	
  tecnicamente	
  corretas	
  não	
  trazem	
  qualquer	
  conseqüência	
   indesejável.	
   As	
   complicações	
   aparecem	
   pela	
   omissão	
  dos	
  cuidados	
  necessários	
  durante	
  as	
  manobras	
  de	
  coleta	
  de	
  sangue.	
  	
  
Hemólise	
  -­‐ Interfere	
  em	
  muitos	
  exames.	
  Pode	
  ser	
  minimizada	
  utilizando	
  vidraria	
  limpa	
   e	
   agulha	
   novas	
   e	
   não	
   demasiado	
   finas,	
   aspirando	
   o	
   sangue	
  lentamente	
  e	
  depois	
  passando-­‐o	
  lentamente	
  da	
  seringa	
  para	
  o	
  tubo.	
  
Hemoconcentração	
  -­‐ resultado	
   da	
   aplicação	
   prolongada	
   do	
   torniquete	
   (por	
   mais	
   que	
   1	
  minuto).	
  Aumentar	
  a	
  concentração	
  de	
  células	
  sanguíneas.	
  	
  
Sangue	
  não	
  entra	
  na	
  seringa	
  -­‐ conseqüência	
  de	
  se	
  puxar	
  em	
  demasia	
  o	
  êmbolo,	
  colapsando	
  uma	
  veia	
  de	
  pequeno	
  calibre;	
  perfura	
  a	
  parede	
  da	
  veia	
  sem	
  penetrar	
  na	
  sua	
  luz;	
  	
  
Hematoma	
  -­‐ coleção	
   de	
   sangue	
   no	
   tecido	
   subcutâneo	
   decorrente	
   da	
   não	
  compressão	
  do	
  local	
  da	
  punção	
  alem	
  das	
  acima	
  citadas.	
  	
  Alterações	
  locais	
  tardias:	
  -­‐ trombose	
   venosa	
   e	
   muitas	
   vezes	
   causada	
   por	
   traumatismos	
   (vários	
  venipuncturas	
  no	
  mesmo	
  local).	
  	
  
Alterações	
  gerais	
  tardias	
  -­‐ transmissão	
  de	
  hepatite,	
  HIV,	
  etc.	
  Através	
  de	
  agulhas	
  contaminadas.	
  	
  
Microcoágulos	
  -­‐ fornece	
  valores	
  celulares	
  muito	
  diferentes	
  do	
  real.	
  	
  
Erros	
  Técnicos	
  -­‐ uso	
  de	
  seringas	
  e	
  agulhas	
  incorretamente	
  esterilizadas;	
  -­‐ usar	
  agulhas	
  de	
  calibre	
  muito	
  fino	
  ou	
  muito	
  grosso;	
  
-­‐ aspirar	
  o	
  sangue	
  violentamente	
  apos	
  atingir	
  a	
  veia;	
  -­‐ transferir	
   o	
   sangue	
   da	
   seringa	
   sem	
   retirar	
   a	
   agulha,	
   ou	
   com	
   muita	
  pressão	
  e	
  sem	
  escorrer	
  pela	
  parede	
  do	
  frasco;	
  -­‐ agitar	
  violentamente	
  o	
  sangue	
  para	
  misturá-­‐lo	
  ao	
  anticoagulante;	
  -­‐ produzir	
  êxtase	
  venosa	
  pelo	
  uso	
  prolongado	
  do	
  garrote;	
  -­‐ deixar	
  contaminar	
  o	
  material	
  a	
  ser	
  usado;	
  -­‐ não	
   atingir	
   a	
   veia	
   logo	
   a	
   primeira	
   picada	
   e	
   tentar	
   imediatamente	
  no	
  mesmo	
  local	
  outra	
  punção;	
  -­‐ demora	
  durante	
  a	
  coleta	
  ou	
  ao	
  transferir	
  o	
  sangue	
  para	
  o	
  tubo;	
  -­‐ puncionar	
  e	
  retirar	
  o	
  sangue	
  pela	
  mesma	
  agulha	
  ou	
  cateter.	
  	
  
4.	
  Soro	
  x	
  Plasma	
  x	
  Sangue	
  Total	
  
	
  
Sangue	
  Total:	
  -­‐ obtido	
  colocando	
  a	
  amostra	
  de	
   sangue	
   recém	
  colhida	
  em	
   frasco	
  com	
  anticoagulante;	
  -­‐ contém	
  os	
  elementos	
  celulares	
  em	
  suspensão	
  no	
  plasma.	
  A	
  realização	
  dos	
  exames	
  deve	
  ser	
  feita	
  em	
  até	
  2	
  horas	
  apos	
  a	
  colheita,	
  misturando	
  previamente.	
   Caso	
   contrário	
   deixar	
   em	
   refrigeração	
   a	
  aproximadamente	
  4˚C.	
  	
  
Soro:	
   -­‐ o	
   sangue	
   coletado	
   é	
   mantido	
   à	
   temperatura	
   ambiente,	
   sem	
  anticoagulante,	
   ou	
   a	
   37˚C,	
   em	
   estufa	
   ou	
   banho	
   Maria,	
   até	
   que	
   seja	
  formado	
  um	
  coágulo	
  e	
  se	
  tenha	
  começado	
  a	
  retrair,	
  então	
  o	
  sangue	
  é	
  centrifugado	
  e	
  o	
  soro	
  é	
  separado;	
  -­‐ apresenta	
  em	
  sua	
  solução	
  :	
  sais	
  minerais,	
  vitaminas,	
  glicídios,	
  lipídios,	
  enzimas,	
   hormônios,	
   produtos	
   anabólicos	
   e	
   catabólicos,	
   substâncias	
  também	
  encontradas	
  no	
  plasma.	
  	
  
Plasma:	
  -­‐ é	
  a	
  porção	
  fluída	
  do	
  sangue	
  não	
  coagulado;	
  
-­‐ contém	
   os	
   fatores	
   da	
   coagulação,	
   exceto	
   aquele	
   removido	
   pelo	
  anticoagulante.	
  O	
   fator	
  ausente,	
  quando	
  acrescentado	
  em	
  quantidade	
  suficiente,	
  gera	
  a	
  coagulação.	
  	
  
Sangue	
  Desfibrinado:	
  -­‐ é	
  o	
  sangue	
  total	
  menos	
  os	
  fatores	
  consumidos	
  na	
  coagulação.	
  O	
  liquido	
  sobrenadante	
  correspondente	
  ao	
  soro,	
  uma	
  vez	
  que	
  o	
  fibrinogênio	
  foi	
  removido	
  na	
  formação	
  da	
  fibrina;	
  -­‐ o	
  sangue	
  pode	
  ser	
  desfibrinado	
  com	
  pérolas	
  de	
  vidro	
  em	
  erlenmeyer	
  ou	
  com	
  bastão	
  de	
  vidro.	
  	
  
	
  
Observações	
  Finais:	
  
	
  
	
   Para	
  o	
  hemograma,	
  e	
  em	
  geral	
  para	
  a	
  maioria	
  dos	
  exames	
  hematológicos,	
  é	
   indicado	
  usar-­‐se	
   sangue	
   colhido	
  de	
  veia	
  periférica.	
  Punção	
  de	
  arterial	
  não	
   se	
  justifica	
  para	
  exames	
  rotineiros,	
  salvo,	
  é	
  claro,	
  para	
  gasometria	
  arterial.	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  
UNIVERSIDADE	
  FEDERAL	
  DO	
  AMAZONAS	
  
FACULDADE	
  DE	
  CIÊNCIAS	
  FARMACÊUTICAS	
  
DISCIPLINA:	
  HEMATOLOGIA	
  CLÍNICA	
  
PROFESSOR:	
  FRANCISCO	
  BARROS	
  	
  	
  
ANTICOAULANTE	
  
	
  
	
   São	
   substâncias	
   usadas	
   para	
   prevenir	
   a	
   coagulação	
   e	
   retardar	
   a	
  deterioração	
  do	
  sangue.	
  	
  
1.	
  Oxalato	
  de	
  Potássio	
  e	
  Oxalato	
  de	
  Amônio	
  
	
   	
  -­‐ são	
  usados	
  em	
  conjunto	
  (solução	
  de	
  PAULL-­‐HELLER)	
  na	
  maioria	
  das	
  determinações	
  hematológicas;	
  -­‐ podem	
  ser	
  usados	
  para	
  testes	
  de	
  coagulação;	
  -­‐ permitem	
   pequenas	
   perdas	
   de	
   d’água	
   pela	
   célula	
   com	
   discreta	
  modificação	
  da	
  sua	
  morfologia;	
  -­‐ oxalatos	
   sobre	
   leucócitos	
   podem	
   produzir	
   certa	
   vacuolização	
  citoplasmática	
  e	
  nuclear	
  (núcleo	
  indentado	
  ou	
  em	
  roseta,	
  dificultando	
  a	
  classificação	
  da	
  célula);	
  -­‐ são	
   tóxicos	
   (amônia)	
   e	
   assim,	
   não	
   utilizáveis	
   nas	
   transfusões	
   de	
  sangue;	
  -­‐ são	
   destituídos	
   de	
   valor	
   nas	
   determinações	
   dos	
   compostos	
  nitrogenados.	
  	
  
Fundamento:	
   pela	
   combinação	
   com	
   o	
   cálcio	
   formando	
   oxalato	
   insolúvel,	
  impedem	
   a	
   transformação	
   da	
   protrombina	
   em	
   trombina	
   e,	
   conseqüentemente,	
  não	
  permitem	
  a	
  coagulação	
  dosangue.	
  
	
  
Preparo	
  (solução	
  de	
  PAULL-­HELLER)	
  -­‐ oxalato	
  de	
  amônio	
  ...........................................1,2g	
  -­‐ oxalato	
  de	
  potássio...........................................0,8g	
  -­‐ água	
  destilada	
  q.s.p...........................................100,0mL	
  
-­‐	
  usar	
  0,5mL	
  da	
  solução	
  para	
  cada	
  4,5mL	
  de	
  sangue;	
  -­‐	
  secar	
  na	
  estufa	
  em	
  temperatura	
  <80˚C	
  (evitando	
  a	
  transformação	
  do	
  oxalato	
  em	
  carbonato	
  –	
  sem	
  ação	
  anticoagulante)	
  	
  
2.	
  Ácido	
  Etileno	
  Diaminotetraacético	
  (EDTA)	
  
	
  
Fundamento:	
   impedem	
   a	
   coagulação	
   às	
   custas	
   de	
   formar	
   quelatos	
   insolúveis	
  com	
  o	
  cálcio.	
  -­‐ os	
   sais	
   dissodicos	
   e	
   dipotássicos	
   do	
   EDTA	
   apresentam	
  propriedades	
  conservadoras	
  das	
  células	
  sangüíneas	
  superior	
  à	
  dos	
  oxalatos;	
  -­‐ é	
   considerado	
   o	
  anticoagulante	
   de	
   escolha	
   em	
  Hematologia,	
   com	
  exceção	
   para	
   as	
   provas	
   de	
   coagulação	
   (não	
   preserva	
   a	
   estrutura	
  química	
  dos	
  fatores	
  da	
  coagulação);	
  -­‐ bom	
   para	
   contagem	
   de	
   plaquetas	
   no	
   sangue,	
   permitindo	
   estimativa	
  grosseira	
  de	
  seu	
  numero	
  no	
  esfregaço	
  com	
  coloração	
  panótica;	
  -­‐ não	
  devem	
  ser	
  usados	
  para:	
  determinação	
  de	
  TP,	
  TTPa	
  e	
  teste	
  de	
  
função	
  plaquetária;	
  -­‐ excelente	
  preservativo	
  dos	
  elementos	
  celulares;	
  -­‐ os	
  sais	
  de	
  potássio	
  são	
  de	
  maior	
  solubilidade.	
  	
  
Preparo	
  (1%):	
  -­‐ EDTA	
  dipotássico.......................1,0g	
  -­‐ água	
  destilada..............................100,0mL	
  	
  
Uso:	
   -­‐ usar	
   0,5mL	
   da	
   solução	
   (1%)	
   para	
   cada	
   4,5mL	
   de	
   sangue.	
   Secara	
  temperatura	
  ambiente;	
  -­‐ pode-­‐se	
   usar	
   uma	
   gota	
   de	
   solução	
   a	
   10%.	
   O	
   pequeno	
   volume	
   não	
  diluiu	
  significativamente	
  a	
  amostra	
  podendo,	
  portanto,	
  ser	
  usado	
  sem	
  secagem.	
  
	
  
3.	
  Heparina	
  
	
  
Fundamento:	
   inibem	
   a	
   formação	
   de	
   trombina,	
   impedindo	
   a	
   conversão	
   do	
  fibrinogênio	
  em	
  fibrina.	
  -­‐ mesmo	
  em	
  quantidades	
  acima	
  da	
  necessária	
  para	
  anticoagulação,	
  não	
  promove	
  qualquer	
  alteração	
  no	
  volume	
  das	
  hemácias;	
  -­‐ não	
  altera	
  a	
  morfologia	
  e	
  o	
  tamanho	
  celular;	
  -­‐ indicados	
  para	
  os	
  teste	
  de	
  fragilidade	
  osmótica	
  dos	
  eritrócitos;	
  -­‐ dificultam	
   coloração	
   em	
   extensão	
   sangüínea	
   rotineiras	
   que	
  apresentam	
  fundo	
  azulado.	
  	
  
Desvantegens:	
   custo	
   elevado,	
   ação	
   da	
   temperatura	
   e	
   interferência	
   nas	
  colorações.	
  
Uso:	
   na	
   proporção	
   de	
   10	
   a	
   50	
   unidades	
   internacionais/mL	
   sangue;	
   onde	
  1mg=130U.I.	
  -­‐ na	
   coleta	
   de	
   sangue,	
   aspirar	
   e	
   expelir	
   certa	
   porção	
   de	
   heparina	
   em	
  uma	
  seringa	
  (a	
  quantidade	
  remanescente	
  impede	
  a	
  coagulação);	
  -­‐ muito	
  usada	
  em	
  coletas	
  para	
  gasometria.	
  	
  
4.	
  Citrato	
  de	
  Sódio	
  
	
  
Fundamento:	
   combina-­‐se	
   com	
   o	
   cálcio,	
   formando	
   complexos	
   insolúveis,	
  impedindo	
  a	
  coagulação.	
  -­‐ excelente	
  para	
  estudo	
  da	
  coagulação,	
  pois	
  preserva	
   	
  os	
   fatores	
  que	
  a	
  promovem;	
  -­‐ causa	
  perda	
  d’água	
  por	
  parte	
  das	
  hemácias	
   (não	
   recomendável	
   para	
  hemograma);	
  -­‐ é	
  também	
  utilizado	
  para	
  determinação	
  do	
  VHS	
  (pequeno	
  retardo).	
  	
  
Uso	
  nas	
  Transfusões	
  de	
  Sangue	
  -­‐ as	
  fórmulas	
  glicocitratadas	
  ácidas	
  são	
  de	
  boa	
  aceitação;	
  -­‐ solução	
  anticoagulante	
  (ACDF):	
  -­‐	
  dextrose.....................................2,6g	
  -­‐	
  citrato	
  de	
  sódio.......................2,6g	
  -­‐	
  fosfato	
  monossódico.............0,22g	
  
-­‐	
  ácido	
  cítrico..............................0,33g	
  -­‐	
  água	
  destilada	
  q.s.p...............100,0mL	
  
Obs:	
  solução	
  deve	
  ser	
  livre	
  de	
  pirogênio,	
  esterilizada	
  em	
  autoclave	
  e	
  colocada	
  em	
  frascos	
  próprios	
  para	
  transfusão	
  de	
  sangue.	
  -­‐	
  Usar	
  120mL	
  para	
  480mL	
  de	
  sangue.	
  	
  
Uso	
  para	
  Estudo	
  da	
  Coagulação	
  -­‐	
  o	
  citrato	
  de	
  sódio	
  é	
  usado	
  em	
  solução	
  aquosa	
  a	
  3,8%.	
  	
  
Fundamento:	
   essa	
   escolha	
   baseia-­‐se	
   na	
   conservação	
   do	
   fator	
   V	
   no	
   sangue	
  citratado.	
  
Preparo:	
  -­‐ citrato	
  trissódico	
  dihidratado.................3,8g	
  -­‐ água	
  destilada	
  q.s.p......................................100,0mL	
  	
  
Procedimento	
  de	
  Preparo	
  	
  
EDTA	
  (10%)	
  -­‐ ácido	
  etileno	
  diaminotetracético	
  (EDTA).............................100g	
  -­‐ água	
  destilada	
  q.s.p.........................................................................1000mL	
  	
  -­‐	
   colocar	
   o	
   sal	
   (EDTA)	
   em	
   900mL	
   de	
   água	
   destilada	
   em	
   um	
   Béquer	
   de	
   1L	
   e	
  aquecer	
  ligeiramente(banho	
  Maria	
  a	
  56˚C)	
  por	
  aproximadamente	
  2	
  horas;	
  -­‐	
  esfriar	
  e	
  transferir	
  para	
  um	
  balão	
  volumétrico	
  de	
  1L;	
  completar	
  o	
  volume	
  para	
  1000mL	
  de	
  água	
  destilada;	
  -­‐	
  filtrar	
  e	
  acondicionar.	
  	
  
Oxalato	
  de	
  Sódio	
  0,1M	
  (provas	
  de	
  coagulação)	
  -­‐ oxalato	
  de	
  sódio	
  p.a...................1,34g	
  -­‐ água	
  destilada	
  q.s.p....................100mL	
  aquecer	
  ligeiramente	
  para	
  homogeneizar,	
  filtrar	
  e	
  acondicionar.	
  	
  
Citrato	
  de	
  Sódio	
  0,1M	
  (provas	
  de	
  coagulação)	
  
-­‐ citrato	
  de	
  sódio	
  p.a..................3,23g	
  -­‐ água	
  destilada	
  q.s.p.................100mL	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  
UNIVERSIDADE	
  FEDERAL	
  DO	
  AMAZONAS	
  
FACULDADE	
  DE	
  CIÊNCIAS	
  FARMACÊUTICAS	
  
DISCIPLINA:	
  HEMATOLOGIA	
  CLÍNICA	
  
PROFESSOR:	
  FRANCISCO	
  BARROS	
  
	
  
COLORAÇÕES	
  HEMATOLÓGICAS	
  –	
  EXTENSÕES	
  SANGÜÍNEAS	
  
	
  
	
   Ao	
   serem	
   fixados	
   e	
   tratados	
   por	
   corantes	
   específicos,	
   os	
   elementos	
  celulares	
   sangüíneos	
   espalhados	
   uniformemente	
   sobre	
   a	
   superfície	
   de	
   uma	
  lâmina,	
   adquirem	
   a	
   coloração	
   e	
   morfologia	
   características	
   para	
   o	
   seu	
   estudo	
  microscópico.	
  	
  
1.	
  Corantes	
  Hematológicos	
  
fundamento:	
   os	
   corantes	
   de	
   anilina	
   que	
   são	
   amplamente	
   utilizados	
   em	
  hematologia	
  pertencem	
  a	
  dois	
  grupos:	
  -­‐ corantes	
  Básicos	
  (TIAZINAS)	
  ex.	
  azul	
  de	
  metileno;	
  -­‐ corantes	
  ácidos	
  (EOSINA)	
  	
   Estruturas	
  celulares	
  (ácidas)	
  que	
  se	
  deixam	
  corarpelos	
  corantes	
  básicos	
  são	
  ditas	
  basófilas.	
  Ex.	
  núcleo,	
  RNA	
  citoplasmático	
  etc.	
  	
   Estruturas	
   celulares	
   (ácidas)	
   que	
   se	
  deixam	
   corar	
  pelos	
   corantes	
   ácidos	
  são	
   ditas	
  acidófilas,	
   oxífilas	
   ou	
   eosinófilas.	
  Ex.	
   hemoglobina,	
   granulações	
   de	
  eosinófilos,	
  hemácias	
  etc.	
  	
  As	
   estruturas	
   coradas	
   pela	
   combinação	
   de	
   corantes	
   dos	
   dois	
   tipos	
   são	
  ditas	
  neutrófilas.	
  Ex.	
  granulações	
  de	
  neutrófilos.	
  	
  
Colorção	
  Policrômica:	
  	
  	
   os	
   corantes	
  policrômicos	
   são	
  misturas	
  de	
   azul	
  de	
  metileno	
   alterado	
  por	
  aquecimento	
   e	
   eosina	
   (cor	
   vermelha).	
   São	
   dissolvidos	
   em	
   metanol	
   que	
   serve	
  como	
  fixador	
  das	
  extensões.	
  
	
   Os	
   principais	
   métodos	
   de	
   coloração	
   que	
   se	
   baseiam	
   neste	
   fundamento	
  são:	
   Wright,	
   Leishman,	
   Giemsa,	
   etc.	
   (a	
   variação	
   está	
   na	
   proporção	
   de	
   azul	
   de	
  metileno	
  e	
  nos	
  seus	
  intermediários	
  policrômicos	
  desmetilados	
  –	
  azur	
  A,	
  azur	
  B,	
  etc.).	
  	
  
Execução	
  da	
  Extensão:	
  -­‐ preparar	
   lâminas	
   secas,	
   desengorduradas	
   e	
   em	
   bom	
   estado	
   de	
  conservação;	
  -­‐ colocar	
  uma	
  das	
   lâminas	
  em	
  superfície	
  plana,	
  depositar	
  uma	
  gota	
  de	
  sangue	
  em	
  um	
  das	
  extremidades.	
  Prendê-­‐la	
  com	
  os	
  dedos	
  indicador	
  e	
  polegar	
   e,	
   com	
   uma	
   segunda	
   lâmina,	
   fazendo	
   iangulo	
   de	
  aproximadamente	
  30	
   a	
   45˚,	
   distender	
   a	
   sangue	
  de	
  modo	
  uniforme	
   e	
  com	
  gradativa	
  diminuição	
  da	
  espessura;	
  -­‐ secar	
  a	
  preparação	
  e	
  corar.	
  	
  
Observações:	
  -­‐ é	
  necessário	
  deixar	
  bordas	
  na	
  extensão	
  (a	
   lâmina	
  da	
  posição	
  vertical	
  deve	
  ser	
  de	
  menor	
  largura);	
  -­‐ quanto	
  maior	
  a	
  gota,	
  mais	
  grosso	
  será	
  a	
  extensão;	
  -­‐ quanto	
  maior	
  o	
  ângulo	
  mais	
  grossa	
  e	
  curta	
  a	
  extensão.	
  	
  
Técnica	
  de	
  Coloração	
  -­‐ colocar	
  a	
  extensão	
  em	
  posição	
  horizontal;	
  -­‐ aplicar	
  o	
  corante	
  sobre	
  a	
  superfície	
  da	
  extensão;	
  -­‐ deixar	
  por	
  3	
  minutos	
  (o	
  melhor	
  tempo	
  necessário	
  para	
  cada	
  partida	
  de	
  corante).	
  Esta	
  etapa	
  é	
  a	
  fixação	
  da	
  extensão;	
  -­‐ após	
  este	
  tempo,	
  coloca-­‐se	
  água	
  destilada	
  ou	
  tampão	
  (pH	
  entre	
  6,6	
  e	
  7,0)	
   sobre	
   a	
   preparação	
   (±	
   1mL)sem	
   escorrer	
   o	
   corante.	
   Aguardar	
  mais	
  um	
  minuto	
  e	
  lavar	
  com	
  água	
  corrente;	
  -­‐ limpar	
  a	
  superfície	
  oposta	
  à	
  extensão,	
  deixar	
  secar	
  para	
  então	
  ser	
  feita	
  a	
  microscopia.	
  
	
  
Erros	
  de	
  Coloração	
  
-­‐ excessivamente	
   azul-­‐esverdeado:	
   extensões	
   grossos	
   ou	
   tempo	
   de	
  coloração	
  prolongado,	
   lavagem	
   insuficiente	
  ou	
  quando	
  a	
  alcalinidade	
  do	
  corante	
  ou	
  diluente	
  é	
  elevada;	
  -­‐ excessivamente	
   rosa:	
   quando	
   a	
   coloração	
   é	
   insuficiente.	
   Quando	
   o	
  tempo	
  de	
  lavagem	
  é	
  excessivo,	
  quando	
  a	
  acidez	
  do	
  corante	
  ou	
  diluente	
  é	
  excessiva,	
  ou	
  seja,	
  existe	
  uma	
  tendência	
  para	
  acidofilia	
  excessiva.	
  	
  
Solução	
  Tampão	
  (pH	
  =7,0)	
  -­‐ fosfato	
  monopotássico	
  (KH2PO4).................1,0g	
  -­‐ fosfato	
  dissódico	
  (Na2HPO4)..........................3,0g	
  -­‐ água	
  destilada	
  q.s.p............................................1000mL	
  
	
  
Coloração	
  de	
  Wright	
  
	
  	
   Solução	
  em	
  álcool	
  metílico	
  de	
  eosina	
  e	
  uma	
  complexa	
  mistura	
  de	
  tiazinas	
  (azul	
  de	
  metileno	
  –	
  50	
  a	
  70%,	
  azur	
  B	
  10	
  a	
  25%	
  e	
  outros	
  derivados).