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1 1. INTRODUÇÃO Nesta aula, estudamos cromatina sexual, chamadas também de Corpúsculo de Barr, cromossomo X inativo encontrado em fêmeas de mamíferos; onde utilizou-se o método de esfregação bucal, para a análise de evidências de cromatina sexual no individuo, muito utilizado em esportes olímpicos para ter a certeza se o atleta e realmente quem diz ser. Foi necessário, vários materiais para a visualização da célula, tais como: Água destilada; Óleo de imersão; Papel absorvente; Lamínulas; Lâminas; Espátulas descartáveis; Corante azul de metileno; Álcool 70% e Microscópio óptico. Sendo evidenciado se estava contido ou não nos alunos. Portanto, aqui será brevemente apresentado, os elementos observados na aula prática (12/06/2018) acerca da identificação e diferenciação a estrutura citológica da cromatina sexual em células da mucosa bucal de humanos. 2 2. OBJETIVO 2.1 Objetivo geral: Observar e identificar o corpúsculo de Barr. 2.2 Objetivo específico: ◦ Verificação do corpúsculo de Barr em núcleos de células femininas e masculinas dos alunos. ◦ Diferenciação e observação das estruturas encontradas nas mucosas bucais bem como a ausência de cromatinas sexuais em núcleos de células masculina. ◦ Adquirir conhecimentos; ◦ Uso do microscópio; 3 3. METODOLOGIA 3.1 Materiais Água destilada; Espátulas descartáveis; Lâminas; Lamínulas; Azul de Metileno; Microscópio óptico; Óleo de imersão; Papel absorvente; Álcool 70%; Mucosa bucal; 3.2 Reagentes Álcool 70%; Azul de Metileno; 3.3 Procedimento: O procedimento se deu da seguinte forma, foi necessário a lavagem da boca com Água destilada duas vezes, após a lavagem os alunos pegaram uma espátula onde raspou-se a mucosa interna da bochecha, desprezando o primeiro raspado e raspando novamente, espalhou-se o material sobre a lâmina limpa e deixou secar por alguns minutos. Logo após a secagem do material, houve a hidratação do material em álcool 70% por três minutos, deixando escorrer o álcool e retirando o excesso com o papel absorvente. Depois o material foi coberto com Azul de Metileno deixando corar durante dois minutos, seguidamente é retirado o excesso do corante com água destilada, foi colocado a lâmina já pronta entre o papel absorvente e em uma bancada perfeitamente plana foi realizado o procedimento de esmagamento do material, pressionando a lamínula com o dedo do polegar sem muita forca para não quebrar a lâmina ou destruir o material. Ao final de todos os procedimentos foi levado ao microscópio para análise, focalizando o para observação da cromatina sexual. 4 5 4. RESULTADOS E DISCUSSÃO Inicialmente os alunos se dividem em duplas(uma mulher e um homem), onde cada par se desloca para um microscópio. São dadas instruções para o preparo de lâminas contendo material celular da mucosa bucal de cada aluno. Observou-se por meio de microscópio, o cromossomo X condensado presente na célula da mucosa oral feminina e não pode ser observado na célula masculina. Imagem número 1: Célula da mucosa bucal masculina FONTE:(https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQ8tL- dtJ9N54Rj5zky8ds80fVxXMOFonrFiMUiIDtKalrF_-atJA) Imagem número 2: Célula da mucosa bucal feminina FONTE:(https://samecbandvel.ml/Uniforme/Falta-un-cromosoma-sexual1468.html 6 Após a operacionalização de todos os passos para do preparo das lâminas com a mucosa bucal, uma de cada vez foram observadas as lâminas no microscópio. No primeiro momento a lâmina analisada foi a feminina. Utilizando-se a ocular de 16x e objetiva de 4x, teve-se um aumento de 64x, possibilitando uma visão geral da lâmina. Sua visualização não é muito detalhada (Figura 01). Figura 01: célula da mocosa bucal feminina com o aumento de 4x Fonte: imagens coletadas na aula Utilizando-se a ocular de 16x e objetiva de 10x, teve-se um aumento de 160x, possibilitando assim um foco maior em certa área da mucosa bucal, mas não permite uma visão detalhada da imagem (Figura 02). Figura 02: Célula da mucosa bucal feminina com aumento de 10X Fonte: imagens coletadas na aula 7 Utilizando-se a ocular de 16x e a objetiva de 40x, obteve-se um aumento de 640x. Esse aumento mostra uma visão mais detalhada da imagem (Figura 03). Figura 03: Célula da mucosa bucal feminina com aumento de 40X Fonte: imagens coletadas na aula Utilizando-se a ocular de 16x e a objetiva de 100x, obteve-se um aumento de 1600x, com esse aumento possibilita uma visualização bem mais detalhada podendo observar a cromatina sexual (Figura 04). Figura 04: Célula da mucosa bucal feminina com aumento de 100X Fonte: imagens coletadas na aula 8 Após análise da célula da mucosa bucal feminina a dupla começou a refazer o mesmo processo mas agora utilizando a lâmina com a célula mucosa bucal masculina. Utilizando-se a ocular de 16x e objetiva de 4x, teve-se um aumento de 64x, possibilitando uma visão geral da lâmina. Sua visualização não é muito detalhada (Figura 01). Figura 01: célula da mocosa bucal masculina com o aumento de 4x Fonte: imagens coletadas na aula Utilizando-se a ocular de 16x e objetiva de 10x, teve-se um aumento de 160x, possibilitando assim um foco maior em certa área da mucosa bucal, mas não permite uma visão detalhada da imagem (Figura 02). Figura 02: Célula da mucosa bucal masculina com aumento de 10X Fonte: imagens coletadas na aula 9 Utilizando-se a ocular de 16x e a objetiva de 40x, obteve-se um aumento de 640x. Esse aumento mostra uma visão mais detalhada da imagem (Figura 03). Figura 03: Célula da mucosa bucal feminina com aumento de 40X Fonte: Figuras coletadas na aula Figuras de diferentes locais da célula Utilizando-se a ocular de 16x e a objetiva de 100x, obteve-se um aumento de 1600x, com esse aumento possibilita uma visualização bem mais detalhada podendo observar a cromatina sexual (Figura 04). Figura 04: Célula da mucosa bucal feminina com aumento de 100X Fonte: imagens coletadas na aula 10 Ao analisar a célula na lente objetiva de 100x foi visto uma célula em apoptose que é a morte celular geneticamente programada não seguida de autólise(destruição das células pelas enzimas do próprio indivíduo). Cromatina sexual, também chamado de corpúsculo de Barr, é o nome dado ao cromossomo X inativo e condensado das células que constituem as fêmeas de mamíferos. Nos seres humanos, cada célula feminina possui dois cromossomos X (um de origem materna e outro paterna), acontecendo condensação ao acaso de um destes cromossomos. No gênero masculino, exceto a ocorrência de síndrome de Klinefelter, os organismos não apresentam cromatina sexual. A presença ou não de cromatina sexual permite análise com diagnóstico citológico do sexo genético, a partir do cromossomo condensado na forma de um pequeno grânulo visível em preparações de células tratadas com corantes para observação microscópica no núcleo. Portanto, esse método pode ser empregado na determinação do sexo de um indivíduo, quando os caracteres fenotípicos são duvidosos. 11 5. CONSIDERAÇÕES FINAIS Em relação aos conhecimentos adquiridos na prática, nos propiciou a entender o Corpúsculo de Barr, e o que fazer pra obter sua visualização, sendo necessário retirar o material bucal para usar os devidos materiais passo a passo, no intuito de obter o melhor resultado possível. Ao captar da bochecha as células de cada um dos alunos, concluiu-se a diferença contida em cada um; Na lente de aumento 100X, foi encontrado no material masculino uma célula em apoptose, ou seja, morte celular.O objetivo da aula, de verificar a cromatina sexual nos alunos, teve um ótimo resultado, deixando claro que em pessoas normais está presente apenas natas mulheres e ausente nos homens. Tendo uma vasta importância, principalmente na identificação do sexo do indivíduo (por ser um método rápido e eficiente). 12 6. REFERENCIA BERGER, Bruno. InfoEscola Navegando e Aprendendo. Biologia, Citologia. Disponível em: <https://www.infoescola.com/citologia/apoptose/>. Acesso em: 16 jul. 2018.
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