Equipamentos para Análise Celular

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Aula 02
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AULA 02: Equipamentos - Princípios e Fundamentos 
 
SUMÁRIO PÁGINA 
1. Saudação Inicial 01 
2. Citômetro de Fluxo 02 
3. Termocicladores 11 
4. Cromatografia 15 
5. Eletroforese 21 
6. Filtros, Destiladores e Purificação de Água 25 
9. Lista de Questões 33 
10. Gabarito 40 
11. Referências Bibliográficas 40 
 
 
Apresentação 
Olá pessoal! Essa é nossa segunda e última aula sobre o tópico 
“equipamentos: princípios e fundamentos” da parte de 
conhecimentos específicos exigidos para o cargo de Biomédico do 
concurso da EBSERH. Vamos estudar os seguintes equipamentos e 
técnicas: citômetros de fluxo, termocicladores, cromatografia, 
eletroforese, filtros, destiladores e purificação de água. 
Preparados? Aposto que estão ansiosos! Vamos lá! 
 
 
 
 
 
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CITÔMETRO DE FLUXO 
A citometria de fluxo é uma técnica que permite a verificação 
simultânea de múltiplas propriedades de células isoladas em 
suspensão. É possível detectar e quantificar antígenos de superfície 
celular, citoplasmáticos e nucleares. 
Nessa técnica, utiliza-se o citômetro de fluxo, um 
equipamento onde as células são orientadas num fluxo laminar de 
passagem e interceptadas uma a uma por um feixe de luz (Laser). As 
modificações ocasionadas nesse feixe de luz devidas à passagem da 
célula são então detectadas e mensuradas por sensores (detectores) 
no citômetro. O sistema óptico de detecção faz a leitura e permite 
identificar as células pelo seu tamanho e granularidade interna. 
Hemácias, plaquetas, linfócitos, monócitos e granulócitos podem ser 
assim identificados e quantificados (ver figura abaixo). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Citômetro de Fluxo: equipamento que permite análise das 
características físicas das células – tamanho e complexidade interna. 
FSC (Forward Scatter): detector na linha do feixe de luz (laser) 
SSC (Side Scatter): detector perpendicular ao feixe de luz 
 
Na citometria de fluxo, semelhante à técnica de 
imunofluorescência, podem ser utilizados diferentes fluorocromos, os 
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quais absorvem a luz e emitem-na num comprimento de onda maior 
e específico. Cada fluorocromo possui um padrão espectral distinto de 
absorção e emissão, de tal maneira que várias cores de luz podem 
ser opticamente separadas com os filtros seletivos, dependendo do 
equipamento de citometria em questão. O uso de diferentes 
detectores de fluorescência permite o estudo simultâneo de vários 
antígenos celulares, utilizando-se anticorpos monoclonais 
específicos marcados com diferentes substâncias fluorescentes (em 
geral através da técnica direta).Os fótons de luz atingem detectores 
específicos e são convertidos em impulsos elétricos proporcionais ao 
número de fótons recebidos. Estes impulsos são convertidos em 
sinais digitais podendo oferecer os resultados em diferentes formas 
de análise tais como histogramas, gráfico de pontos (dot plot), 
tabelas, dentre outros. (ver figura abaixo) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura: representação esquemática de funcionamento do 
Citometro de Fluxo 
 
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Figura: citômetro de fluxo. 
 
A citometria de fluxo é uma técnica rápida, precisa, 
quantitativa, reprodutível e passível de realização em um grande 
número de células. Possibilita a caracterização imunofenotípica ou 
imunofenotipagem. 
 
Mas o que é imunofenotipagem? Anota ai: 
 
 
 
 
A imunofenotipagem é uma técnica utilizada na identificação e 
distinção de tipos celulares. Para tanto, utiliza anticorpos 
monoclonais marcados com fluorocromos para analisar qualitativa e 
quantitativamente padrões de expressão de antígenos celulares 
(chamados “clusters of differentiation” ou CD). Cada tipo de célula de 
nosso corpo possui um padrão próprio de expressão de antígenos, 
assim é possível identificar com precisão a célula de interesse. 
 
Com uso do citômetro de fluxo e das técnicas de 
imunofenotipagem, é possível conhecer o tipo exato de células de 
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uma amostra, identificar sua linhagem e estado maturativo, por 
exemplo. Isso pode ser feito em amostras de medula óssea, sangue 
periférico, linfonodo, líquor cefalorraquidiano e diversos tecidos. 
A imunofenotipagem por Citometria de Fluxo pode ser realizada 
a fim de diagnosticar e classificar doenças onco-hematológicas como 
as leucemias e linfomas, mieloma múltiplo. A técnica também pode 
ser usada na avaliação de recuperação imunológica pós-transplante 
de medula, na quantificação de células-tronco CD34 positivas para 
transplante, na avaliação de subpopulações linfocitárias em pacientes 
HIV positivos ou com deficiências imunológicas hereditárias, além de 
inúmeras outras indicações. 
A citometria de fluxo também permite o isolamento de 
diferentes populações celulares com distintos antígenos de superfície. 
De que forma? Quando uma suspensão de células marcadas é 
colocada em um separador de células ativado por fluorescência 
(FACS), o aparelho é capaz de determinar a intensidade da 
fluorescência de cada célula e separa-las conforme sua emissão 
fluorescente característica. 
Os anticorpos monoclonais utilizados na Citometria de Fluxo são 
habitualmente submetidos aos critérios do International Workshop 
and Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigens, 
ocasião em que um grupo de laboratórios de referência avalia, 
caracteriza e classifica os anticorpos. Uma vez aceitos por este 
colegiado, esses anticorpos recebem a designação CD (cluster of 
differentiation). Cada CD pode ser representado por vários anticorpos 
monoclonais que reconhecem o mesmo antígeno, mas não 
necessariamente o mesmo epítopo. 
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Fluoróforo: Fluorocromo ou fluoróforo é um composto que emite luz 
de um certo comprimento de onda (┡) (coloração) quando excitado 
por uma luz de um outro ┡. A tabela abaixo mostra alguns 
fluoróforos: 
 
 
 
 
 
Tabela: Fluoróforos com os seus ┡s de excitação, emissão e 
coloração. 
Fluoróforos com características diferentes tornam possível 
marcar antígenos diferentes com cores diferentes em um mesmo 
tecido ou célula, permitindo a observação simultânea de dois ou mais 
componentes. 
 
 
Agora vamos praticar! Treinar aresolução de questões 
de prova é fundamental para consolidar o que foi aprendido e 
adquirir segurança. 
 
 
 
 
 
1. (FGV/2010/FIOCRUZ/Tecnologista em Saúde - Operação e 
Manutenção de Plataformas Tecnológicas) CD4 e CD8 são receptores 
de membrana associados à caracterização de linfócitos T do sistema 
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imunológico. A contagem de células expressando CD4 (CD4 positivas) 
é um dos parâmetros analisados em pacientes HIV positivos, visto 
que o HIV infecta estas células. A contagem de células CD4 positivas 
é comumente obtida através de citometria de fluxo. Desta forma, o 
número reduzido de células CD4 positivas é um dos preditores para 
que o paciente entre no protocolo de tratamento utilizando anti-
retrovirais contra HIV. Avalie os gráficos (dot plot) analisados por 
citometria de fluxo provenientes de dois pacientes HIV positivos (A e 
B) com diferentes números de contagem de células CD4 positivas. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Assinale a alternativa correta. 
a) Neste experimento, as células CD4 positivas foram identificadas 
utilizando anticorpos específicos contra os receptores de membrana 
CD4 conjugados com o fluoróforo PerCP. 
b) As células identificadas pelo número 3 representam as células 
duplamente positivas, expressando os receptores de membrana CD4 
e CD8. 
c) O paciente B possui o menor número de contagem de células CD4 
positivas e, portanto, deve entrar no protocolo de tratamento 
utilizando anti-retrovirais contra HIV. 
d) As células identificadas pelo número 1 representam as células 
expressando os receptores de membrana CD4. 
e) Estas análises foram obtidas utilizando apenas um canal de 
fluorescência do citômetro de fluxo. 
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Comentário: questão interessante, que exige do candidato muito 
mais capacidade de interpretação e análise do que a mera retenção 
de conteúdo ou “decoreba”. Por isso é tão importante treinar todos os 
tipos de questão! O que vocês acharam? Eu achei muito boa! Vamos 
analisar item por item. A resposta sobre a alternativa A está no 
próprio gráfico. No eixo X (horizontal) podemos verificar que as 
células CD4 positivas foram identificadas utilizando anticorpos 
específicos contra CD4 conjugados com o fluoróforo “FITC” e NÃO 
“PERCP”. Letra B é a alternativa correta! Sim, as células identificadas 
como “3”, na posição do gráfico em que se encontram indica que 
foram marcadas com anticorpos para os receptores CD4 e CD8, 
expressam os dois. Letra C errada pois o paciente B apresenta uma 
maior contagem de células CD4, conforme podemos verificar na 
população identificada como “2” no gráfico. Letra D também errada, 
identificadas como “1” estão as células expressando receptores CD8. 
Letra “E” errada, uma vez que foram usados dois anticorpos 
conjugados com fluoróforos diferentes e, portanto, diferentes 
detectores de fluorescência. 
Gabarito: B. 
 
2. (IBFC/2013/EBSERH/Biomédico) Os equipamentos laboratoriais 
capazes de identificar células e determinar o seu fenótipo, além de 
analisar o conteúdo nuclear de DNA são denominados: 
a) Citômetros de fluxo. 
b) Espectrofotômetros de massa. 
c) Espectrofotômetros de chama. 
d) Termocicladores. 
Comentário: a descrição do enunciado é compatível com citômetros 
de fluxo, uma vez que estes equipamentos permitem a determinação 
simultânea de múltiplas propriedades de células isoladas em 
suspensão (dentre elas a detecção e quantificação de antígenos 
celulares nucleares) e possibilitam a imunofenotipagem. 
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Gabarito: A. 
 
3. (FGV/2010/FIOCRUZ/Tecnologista em Saúde – Imunologista) O 
citômetro de fluxo é um equipamento que pode ser utilizado para 
investigar a presença de células tumorais leucêmicas residuais na 
medula óssea pois: 
a) permite a análise do volume celular. 
b) permite a análise da apoptose destas células. 
c) permite a análise de um grande número de células da medula. 
d) permite análise de um número máximo de 1000 células. 
e) utiliza a autofluorescência espontânea deste tipo celular para 
identificá-lo. 
Comentário: considerando que a intenção é investigar a presença de 
células tumorais residuais na medula óssea, podemos descartar todas 
as alternativas, exceto a letra C. Letra “a” e “b” são análises que 
podem ser feitas por citometria de fluxo, porém, não tem relação 
com o que está sendo questionado. Letra “d” e “e” estão totalmente 
incorretas. 
Gabarito: C. 
 
4. (AOCP/2015/Biomédico - EBSERH/HC-UFG) Qual é o equipamento 
cuja análise permite a identificação direta do fenótipo celular, usando 
anticorpos marcados com moléculas fluorescentes, podendo medir 
múltiplos parâmetros como o espalhamento frontal, o espalhamento 
lateral e a intensidade de fluorescência em diversos comprimentos de 
onda? 
(A) Potenciômetro. 
(B) Citômetro de fluxo. 
(C) Espectrofotômetro. 
(D) Destilador filtrante. 
(E) Imunodifusor radial. 
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Comentário: questão direta, boa descrição de um citômetro de 
fluxo. 
Gabarito: B 
 
5. (COVEST/2015/ Biomédico – UFPE) A imunofenotipagem é uma 
técnica utilizada na identificação e na distinção de tipos celulares. 
Para tanto, utiliza anticorpos monoclonais marcados com 
fluorocromos para analisar qualitativa e quantitativamente padrões 
de expressão de antígenos celulares chamados “clusters of 
differentiation” ou CD. Cada tipo de célula de nosso corpo possui um 
padrão próprio de expressão destes antígenos; assim, é possível 
identificar com precisão a célula de interesse. Esta técnica é muito 
utilizada nos diagnósticos hematológicos, principalmente, de 
leucemias e linfomas. Também é utilizada no monitoramento de 
doenças infecciosas como a AIDS. Nesse contexto, é correto afirmar 
que: 
A) a citometria de fluxo é o método preferencial para a 
imunofenotipagem das doenças hematológicas malignas, pois permite 
detectar a presença de vários antígenos numa mesma célula, e fazer 
uma análise rápida de um grande número de células. 
B) a base para a classificação imunológica das leucemias é a 
combinação de anticorpos policlonais usados para determinar o perfil 
imunofenotípico de populações celulares. 
C) a presença de um antígeno diferente do esperado para 
determinado tipo celular e seu estágio de maturação, ou o 
aumento/diminuição da sua expressão, não é determinante da 
existência de um clone anormal. 
D) a imunofenotipagem é uma técnica que se resume à detecção de 
antígenos de superfície expressos por células leucêmicas. 
E) a imunofenotipagem pela citometria de fluxo é um teste 
complementar, pois não é utilizada para o diagnóstico diferencial. 
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Comentário: Já na letraA encontramos a sentença correta que a 
questão nos pede. 
Gabarito: A. 
 
6. (IADES/2014/EBSERH/Nível Superior – Biomédico) A citometria de 
fluxo é uma técnica de medição das propriedades de células em 
suspensão, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas uma a 
uma por um feixe de luz. Quanto à citometria de fluxo, assinale a 
alternativa correta. 
a) As células são boas condutoras de energia, o que permite a 
contagem e medição a partir dos impulsos elétricos que geram. 
b) Apresenta a desvantagem de não permitir a avaliação de múltiplos 
parâmetros celulares de forma individual. 
c) Nenhum fator celular influi na amplitude, duração e forma do pulso 
elétrico, que estão relacionadas com a alteração das linhas de forças 
elétricas e com o deslocamento do meio condutor. 
d) Não consegue identificar todas as anormalidades significativas 
identificadas pelo observador humano. 
e) Quanto maior a corrente elétrica, ou seja, a intensidade do pulso 
elétrico, menor é o tamanho da célula. 
Comentário: questão um pouco infeliz, eu diria, pois não explora as 
informações mais importantes sobre o equipamento e técnica da 
citometria de fluxo. Mas é da EBSERH e coloca-la aqui na aula serve 
para deixar bem claro que citômetro/citometria de fluxo cai na prova! 
Por exclusão, eliminamos todas as alternativas, menos a letra D, a 
única que não contém erros. As demais eram no que se refere ao 
fundamento da técnica de citometria de fluxo. 
Gabarito: D 
 
TERMOCICLADOR 
Os Termocicladores são equipamentos usados amplamente 
em laboratórios de Biologia Molecular para a amplificação de DNA 
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(ácido desoxirribonucleico) por meio da técnica da PCR (Polymerase 
Chain Reaction ou reação em cadeia da polimerase). Este aparelho 
permitem programar diferentes ciclos de temperatura. Ele aquece 
e resfria, em ciclos programados, microtubos contendo a amostra de 
DNA a ser amplificada e reagentes necessários para a amplificação. A 
técnica da PCR por sua vez, possui aplicações médicas, forenses e em 
pesquisa. 
Um bloco de resistência elétrica distribui uma temperatura 
homogênea através de uma placa durante tempos programáveis com 
faixas de temperatura de 0ºC a 99ºC. Pode incluir tampa aquecida 
constantemente para evitar a condensação de água nas tampas dos 
tubos onde ocorre a reação, e assim, evitar que os solutos se 
concentrem. Pode ter função de gradiente, que permite diferentes 
temperaturas nas distintas partes do bloco. Alguns modelos tem 
capacidade de amplificar grande quantidade de amostras (ex: até 96) 
contidas em tubos, tiras ou microplacas. 
 
PCR 
- O primeiro passo é extrair o material genético com cuidado para que 
o mesmo não seja danificado e nem sofra contaminação. 
Habitualmente, o material coletado é o DNA; todavia, pode-se utilizar 
o RNA em uma RT-PCR, técnica que consiste em um desdobramento 
do PCR e apresenta outras aplicações. 
- Após a extração do material, juntamente a este é adicionada uma 
mistura, também chamada de pré-mix, na qual estão presentes os 
dNTPs (desoxirribonucleotídeos trifosfato), os primers (também 
conhecidos iniciadores) e a enzima DNA polimerase em uma solução 
tampão. Este material vai para o termociclador, aquecendo e 
esfriando o material ali contido em ciclos de temperatura pré-
estabelecidos. 
- Primeiramente, o tubo é aquecido a uma temperatura entre 90° a 
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96°C para que ocorra a desnaturação do DNA (separação das fitas). 
Depois, a temperatura do termociclador cai (50° a 60°C) para que 
haja a hibridização ou anelamento. Neste ponto do procedimento, os 
primers se ligam com especificidade às suas seqüências 
complementares do DNA. Subseqüentemente, há uma elevação da 
temperatura a aproximadamente 72°C para que ocorra a síntese pela 
polimerase (extensão de uma nova molécula). Em seguida, um novo 
ciclo é iniciado, sendo que normalmente são realizados de 25 a 40 
ciclos para cada reação, apresentado taxa de replicação exponencial. 
- A análise do resultado é feita por meio da eletroforese em gel de 
agarose ou de poliacrilamida, sendo interpretada por um profissional 
treinado. 
- A contaminação do material por substâncias que conhecidamente 
inibem a reação, como é o caso da hemoglobina, ou a contaminação 
por um material genético que não está sendo estudado são problemas 
técnicos que podem interferir no resultado da PCR. Certas medidas, 
como o uso de luvas e tubos descartáveis, são necessárias. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura: termociclador. 
 
 
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7. (PR-4 Concursos/2012/Técnico em Farmácia) A reação de 
amplificação em cadeia (PCR) é uma metodologia que pode ser 
utilizada em vários testes laboratoriais. O equipamento que realiza 
esses testes, o termociclador, apresenta como característica 
principal: 
a) a manutenção da temperatura em 4º C durante o teste; 
b) a variação de comprimentos de onda na faixa UV num intervalo de 
tempo; 
c) a manutenção de temperaturas abaixo de zero por longos períodos 
de tempo; 
d) o aumento e diminuição de temperatura rapidamente e em 
períodos de tempo predeterminados; 
e) a variação de comprimento de onda e temperatura de modo 
sincronizado. 
Comentário: lembre-se no termociclador é possível realizar ciclos de 
diferentes temperaturas. Letra D! 
Gabarito: D. 
 
8. (IBFC/2013/PC-RJ/Perito Criminal – Biologia) A técnica de PCR 
(reação em cadeia de polimerase) em tempo real revolucionou o 
processo de quantificação de fragmentos de DNA. Ela realiza a 
quantificação desses ácidos nucleicos de maneira precisa e com maior 
reprodutividade. Assinale o fator que permite essa quantificação: 
a) O sequenciamento do DNA. 
b) A eletroforese. 
c) A fluorescência. 
d) Os marcadores STRs 
e) O termociclador. 
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Comentário: questão que pode confundir quem está com muita 
pressa ou nervoso na hora da prova. Nada de marcar termociclador 
nessa questão! A pergunta é sobre o fator que permite a 
quantificação de ácido nucleico na técnica de PCR em tempo real...A 
diferença do PCR em tempo real (qPCR ou quantitative PCR) para a 
PCR tradicional é a presença, no primeiro, de algum elemento 
fluoróforo (SYBR Green ou sondas Taqman) que sinaliza o momento 
da formação das duplas fitas em cada ciclo, emitindo fluorescência. 
Dessa forma tem-se uma ideia da quantidade de DNA formado, sem a 
necessidade de eletroforese ao final dos ciclos. 
Gabarito: C. 
 
CROMATOGRAFIA 
 
Cromatografia é um método físico-químico de separação 
que tem como base a migração diferencial dos componentes de 
uma mistura. É composta por duas fases imiscíveis: uma fase 
móvel e uma fase estacionária. De acordo com o tipo de fase 
móvel e estacionária utilizados as cromatografias podem classificadas 
em: 
Cromatografia Gasosa; 
Cromatografia de Troca Iônica; 
HPLC 
 
 
 
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Figura: cromatografia 
 
 Vamos ver um a um os tipos de cromatografia: 
 
Cromatografia Gasosa (CG): consiste na “vaporização” (sem que 
haja decomposição) da substância em um gás chamado gás de 
arraste (fase móvel), e posterior migração através de uma coluna de 
cromatografial. Esse gás deve, obrigatoriamente, ser inerte em 
relação à fase estacionária. Gases como hidrogênio, nitrogênio, 
argônio e hélio são os mais utilizados. As substâncias saem então da 
coluna e passam por um detector que gera um sinal proporcional à 
quantidade de substância eluída no gás em função do tempo (análise 
quantitativa). Por exemplo, em uma mistura, cada componente terá 
sua pressão de vapor característica (volatilidade), assim substâncias 
que forem mais voláteis, ficarão dissolvidas no gás de arraste e 
passarão mais rapidamente pela coluna cromatográfica. Trata-se de 
uma técnica muito utilizada pois é capaz de separar substâncias com 
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concentrações de nanogramas e até picogramas. A cromatografia 
gasosa é usada no fracionamento de proteínas, enzimas, peptídeos e 
aminoácidos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura: cromatografia gasosa 
 
Os métodos para detecção dos vapores orgânicos eluídos são 
classificados de acordo com as propriedades físicas do mecanismo de 
detecção. Os detectores são classificados como: universal, seletivo e 
específico. Os detectores de ionização de chama e condutividade 
térmica respondem na presença de todos os compostos orgânicos e 
são portanto considerados detectores universais. Outros detectores 
respondem somente na presença de um heteroátomo em particular 
(por exemplo, fotométrico de chama e termoiônico são considerados 
detectores específicos). O de captura de elétrons é considerado 
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seletivo, pois detecta qualquer substância que apresente grupo 
atômico capaz de captar elétrons. 
Tabela comparativa dos diferentes detectores usados CG: 
Detector Seletividade Detectabilidade 
Ionização de 
Chama (FID) 
maioria dos 
compostos orgânicos 
100pg 
Condutividade 
Térmica (TCD) 
universal 1ng 
Captura 
Eletrônica (ECD) 
haletos, nitratos, nitrilas, peróxidos, 
anidridos, organometálicos 
50fg 
Fotométrico de 
Chama (FPD) 
enxofre, fósforo, estanho, boro, arsênio, 
germânio, selênio, cromo 
100pg 
Termoiônico 
(TSD) 
fósforo, nitrogênio, enxofre, 
boro, estanho, antimônio, 
arsênio, chumbo 
10pg 
Fotoionização 
(PID) 
alifáticos, aromáticos, cetonas, ésteres, 
aldeídos, aminas, heterociclos, compostos 
organo-enxofre, alguns organometálicos 
2pg 
 
Cromatografia Iônica: Também conhecida como cromatografia de 
troca iônica. Técnica cromatográfica onde a fase estacionária é 
representada por uma resina trocadora de íons. Essa resina possui 
em sua composição íons que irão interagir quimicamente com os íons 
presentes na solução da fase móvel. Após a interação dos íons da 
amostra com a resina, uma solução chamada eluente é passada pela 
coluna de cromatografia liberando assim os íons que estavam 
interagindo com a resina. O tempo de retenção/separação das 
diferentes espécies é que determinará a concentração dos diferentes 
íons na amostra. Antes de passar pelo detector, as amostras passam 
por uma segunda coluna cromatográfica, a coluna supressora de 
eluente, que irá bloquear a detecção de íons que por ventura possam 
fazer parte da constituição do eluente e que poderiam interferir na 
concentração iônica real da amostra; ou seja, somente os íons da 
amostra são encaminhados para análise. Desvantagens: técnica de 
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custo extremamente elevado e que requer mão de obra altamente 
especializada na operação do sistema e análise de dados. É usada 
para fracionar peptídeos, aminoácidos, hemoglobinas e hemoglobina 
glicada. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura: cromatografia iônica 
 
Cromatografia Líquida de Alta Pressão (HPLC): HPLC: sigla do 
inglês que significa High Pressure (ou Performace) Liquid 
Chromatography. Atualmente chamada de Cromatografia Líquida de 
Alta Eficiência. Tem como características: a elevada sensibilidade, a 
alta velocidade de reação e o grande desempenho com confiabilidade 
e rapidez na liberação de resultados. Trata-se de um tipo de 
cromatografia que utiliza um líquido como fase móvel, que é injetado 
na coluna cromatográfica a altas pressões e diferentes tipos de fase 
estacionária, variando de acordo com aquilo que se quer analisar. Os 
constituintes da fase estacionária, em geral se encontram altamente 
particionados, o que gera uma separação mais eficiente. É composta 
de: reservatórios para os reagentes, bombas que propulsionam a fase 
móvel a altas pressões, injetor de amostra, coluna cromatográfica e 
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um detector acoplado a um computador. A técnica de HPLC é a base 
para o entendimento e realização de outras técnicas como a 
cromatografia gasosa e de troca iônica. A utilização de partículas 
ainda mais finas (0,1 nm) e pressões ainda mais elevadas (15.000 
psi) tem gerado o que se chama de CLUE (Cromatografia de Ultra 
Eficiência). É usada principalmente para fracionar hemoglobinas e 
hemoglobina glicada. Pode ser usada para proteínas, peptídeos e 
aminoácidos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura: HPLC 
 
Cromatografia em Papel: utiliza para a separação e identificação 
das substâncias ou componentes da mistura a migração diferencial 
sobre a superfície de um papel de filtro de qualidade especial (fase 
estacionária). A fase móvel pode ser um solvente puro ou uma 
mistura de solventes. Méétodo muito útil para separar substâncias 
muito polares, como açúcares e aminoácidos. Desvantagens: possui o 
inconveniente de ser possível apenas cromatografar poucas 
quantidades de substância de cada vez. 
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Cromatografia de exclusão molecular: a coluna é constituída por 
um material com o tamanho dos poros precisamente controlados, e 
os componentes da amostra são separados de acordo com o tamanho 
molecular. Por razões históricas, esta técnica é chamada de filtração 
em gel ou cromatografia em gel, embora a fase estacionária não se 
restrinja a um “gel”. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
9. (IBFC/2013/EBSERH/Biomédico) Assinale a alternativa correta 
sobre o método de separação denominado cromatografia. 
a) A cromatografia líquida de alta eficiência emprega bombasde alta 
pressão para a eluição da fase móvel. 
b) A grande limitação da Cromatografia líquida clássica é a 
necessidade de que a amostra seja volátil ou estável termicamente. 
c) O detector mais utilizado para separações por Cromatografia 
gasosa de alta resolução é o detector de ultravioleta. 
d) Cromatografia em papel é uma técnica baseada na adsorção 
irreversível das substâncias em questão. 
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Comentário: na letra A não temos erros, é nossa alternativa correta. 
Letra B descreve a cromatografia gasosa e não a líquida clássica. Ltra 
C também errada e na letra D não se trata de adsorção e muito 
menos irreversível, mas sim de migração diferencial sobre a 
superfície de um papel de filtro. 
Gabarito: A 
 
ELETROFORESE 
A eletroforese é um método habitualmente usado para separar 
e também purificar macromoléculas, principalmente ácidos nucleicos 
e proteínas. Essas macromoléculas carregadas são submetidas a um 
campo elétrico em um meio de suporte (em geral um meio poroso, 
como o gel de agarose ou poliacrilamida) e migram para o polo 
positivo ou negativo, de acordo com a sua carga. No caso de uma 
carga positiva, seguirá para o polo negativo e se for negativa, irá na 
direção do polo positivo. 
O fluxo migratório é determinado pelo peso molecular. 
Moléculas de menor peso migram mais rápido que as de maior peso, 
formando as bandas características que serão visualizadas 
posteriormente. 
É adotada para separação de componentes de interesse em 
misturas complexas, por exemplo, as proteínas do soro. A 
eletroforese é uma técnica que serve de etapa prévia para outras, 
como a imunoeletroforese e imunofixação, Western Blotting e etc... 
O movimento das moléculas em um campo elétrico depende 
principalmente da sua carga, que é por sua vez determinada pelo pH. 
As moléculas de proteínas se tornam ionizadas e migram ao eletrodo 
com carga oposta (para o polo positivo, se a carga for negativa ou 
vice-versa), sendo sua mobilidade eletroforética diretamente 
proporcional à carga da partícula e inversamente proporcional 
à viscosidade do meio e ao peso molecular. 
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A migração diferencial das moléculas gera um um 
eletroforetograma que dispõe as proteínas em zonas com limites 
precisos. As zonas são visualizadas quando o meio de suporte é 
corado. A seguir, o meio de suporte é seco e as proteínas 
quantificadas em um densitômetro, que converte o padrão de bandas 
em picos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Na figura acima temos uma eletroforese com 
imunofixação. “SPE” é a eletroforese de referência e, a seguir, 
cada campo foi analisado com o anti-soro respectivo (anti-
IgG, antiIgA, anti-IgM, anti-kappa e anti-lambda). Neste 
paciente verificou-se proteína M monoclonal em IgM-kappa. 
 
Eletroforese – Equipamentos e Materiais (cuba, fonte e 
acessórios) 
Cuba de eletroforese: utilizada para eletroforese de géis. 
Tipicamente contém bandeja, pentes para várias amostras, tanque 
com tampa, divisórias de acrílico, suportes para pentes. 
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Cuba de eletroforese: bandeja, tanque e conectores 
 
Despeja-se na bandeja o gel ainda não polimerizado: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Coloca-se o suporte contendo os pentes próprios que servirão 
como molde para produzir as cavidades (poços) no gel. Aguarda-se o 
tempo para polimerização da matriz da agarose e, ao esfriar, a 
agarose fica com o aspecto turvo e com resistência (diretamente 
proporcional à concentração de agarose utilizada). Então já se pode 
retirar os pentes, tendo cuidado para não danificar a matriz do gel; 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Fontes para cuba de eletroforese: apresentam dispositivos de 
segurança contra sobrecargas, curtos-circuitos, etc. Programa-se a 
voltagem, corrente e tempo de corrida. Os equipamentos podem 
contar com display de LED para facilitar a programação. 
 
 
 
 
 
 
Fonte para cuba de eletroforese 
 
Transiluminador UV: Utilizado para a visualização segura de 
bandas em géis de eletroforese coradas com marcadores 
fluorescentes. Pode ser também de LED, ao invés de UV. 
 
 
FILTROS, DESTILADORES E PURIFICAÇÃO DE ÁGUA 
Água Reagente 
A água é um reagente utilizado na maioria dos testes 
laboratoriais e por isso deve seguir um padrão de controle de 
qualidade rigoroso. O fornecimento urbano de água apresenta 
moléculas orgânicas, íons inorgânicos, partículas, coloides, gases, 
bactérias e seus produtos, que podem alterar os resultados dos 
exames laboratoriais e causar eventuais erros e falhas mecânicas em 
equipamentos analíticos. Para remover essas impurezas, é necessário 
recorrer a uma combinação de tecnologias de purificação. Há várias 
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organizações que especificam normas sobre a água reagente, a fim 
de minimizar sua interferência nos ensaios laboratoriais, pois as 
tecnologias de ensaio são refratárias à água reagente de baixa 
qualidade. 
A maioria dos laboratórios utiliza as normas estabelecidas pelo 
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) que classifica a 
água em: 
- Clinical Laboratory Reagent Water (CLRW); 
- Special Reagent Water (SRW); e 
- Instrumental Feed Water (IFW). 
 
A CLRW (em português “água reagente para laboratório 
clínico”) substitui a antiga classificação de água tipo I e tipo II. 
Nesse tipo de água não encontramos bactérias, materiais 
inorgânicos e orgânicos e nem partículas e coloides. É utilizada em 
diluições, reconstituição de outros reagentes, preparação de branco, 
preparação de meios de cultura, realização de exames e lavagem. 
 
A SRW (“água reagente especial”), é uma água livre de 
DNAses e RNAses, utilizada nas técnicas de biologia molecular. 
A IFW (“água para alimentação instrumental”), é utilizada em 
equipamentos automatizados, para banhos aquosos, diluições, 
enxagues, dentre outros. 
O monitoramento da qualidade é realizado pela determinação 
de: resistividade e condutividade (diariamente, permite 
mensurar a quantidade de contaminantes iônicos presentes na 
água), carbono orgânico total-TOC (realizar anualmente, altos 
níveis indicam contaminantes orgânicos), controle 
microbiológico (contagem de UFC mensalmente) e teste de 
endotoxinas (indicador de subprodutos de bactérias, fungos e 
algas). O tipo de água e a respectiva especificação devem estar de 
acordo com os requisitos analíticos da metodologia em uso. 
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Os cuidados na preparação e no manuseio da água auxiliam na 
minimização de possíveis erros analíticos, aumentando a 
confiabilidade dos resultados. 
 
Tecnologias de purificação 
Já sabemos que a água deve ser purificada de alguma forma, 
mas como isso é feito? Quais são os tipos de água utilizados? 
Para se tornar adequada para a utilização no laboratório, a 
água deve passar por purificação para a eliminação dos 
contaminantes dissolvidos nela, tornando-se água reagente. O 
processo de purificação não é específico e pode ser decorrente de 
uma combinação de métodos para que atenda às especificações de 
qualidade. Existem vários métodos para remoção de impurezas, por 
isso é necessário recorrer a uma combinação de tecnologias, 
associando suas vantagens, a fim de se obter uma água de alta 
qualidade. Vamos ver a tabela abaixo: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Especificações que devem ser estabelecidas no momento de 
produção da água: 
 
 
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ARLC: água reagente para laboratório clínico 
 
 Em um laboratório são utilizadas principalmente os seguintes 
tipos de água: 
 
Água destilada: é obtida por meio da destilação (condensação do 
vapor de água obtido pela ebulição ou pela evaporação). É a água 
utilizada em laboratório ou industrialmente como reagente ou 
solvente. Contém unicamente moléculas de água. Purificada através 
de destiladores, é a que apresenta maior pureza do ponto de vista 
microbiológico, não contém elementos orgânicos. Em contato 
com o ar, a água destilada pode se tornar rica em gases dissolvidos, 
como o gás carbônico (CO2). Seu pH é da ordem de 7, mas, se 
exposta ao ar, tende a ficar um pouco ácida devido ao CO2 dissolvido. 
A água destilada é estéril enquanto estiver protegida do ar 
ambiente. 
 
Destiladores: o destilador de água funciona de tal forma a promover 
o processo de destilação simples da água. Esse processo é utilizado 
para separar misturas homogêneas quando um dos componentes é 
sólido (minerais) e o outro líquido (água). A destilação simples 
consiste em aquecer a mistura em uma aparelhagem apropriada, até 
que o líquido entre em ebulição. Como o vapor do líquido é menos 
denso, sairá pela parte superior do balão de destilação (caldeira) e 
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chegará ao condensador (parte refrigerada), ao entrar em contato 
com as paredes frias, se condensa, voltando novamente ao estado 
líquido. Em seguida, é recolhido em um recipiente adequado, e o 
sólido permanece no balão de destilação 
 
 
Destiladores 
 
Água deionizada: A deionização (ou desmineralização) é um 
processo de remoção de íons (cátions/ânions) através de um 
sistema de resinas trocadoras de íons. Ela pode ser parcial ou total de 
acordo com os métodos de eliminação escolhidos e o grau de 
remoção necessário. Quando apenas os íons forem retidos nas 
resinas, a água deionizada ou desmineralizada obtida retém suas 
substâncias orgânicas e inorgânicas sem carga elétrica. Portanto, o 
líquido não é puro. Nesta forma, a água é utilizada nas indústrias com 
água de processo. Mas a água para fins médicos precisa passar por 
um filtro biológico para purificá-la completamente e torná-la estéril. É 
produzida através de deionizadores. 
 
Deionizadores: aparelhos contendo resinas de troca iônica para 
remoção dos sais minerais produzindo água quimicamente pura com 
condutividade equivalente à da água destilada. Uma resina 
fortemente ácida remove os cátions eventualmente presentes na 
água e uma resina fortemente básica (OH-) remove ânions que 
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estejam contaminando a água. Os íons inorgânicos da água são 
removidos. Logo após a troca, efetua-se uma destilação normal, para 
remover os íons restantes. 
 
 
 
Deionizadores 
 
 
Osmose Reversa: a osmose reversa acontece quando uma pressão 
maior que a pressão osmótica é aplicada ao lado do concentrado da 
membrana e a direção normal do fluxo osmótico é revertido. Com 
isso, a água pura passa pela membrana a partir da solução 
concentrada e é, então, separada de seus contaminantes. É feita no 
equipamento de Osmose Reversa. 
 
Sistema de ultra-purificação da água: a água ultra pura é 
resultado de dois processos: osmose reversa e deionização. 
 
Vamos exercitar: 
 
 
10. (CESPE/2010/ INMETRO/ Técnico – Biotecnologia) Ainda com 
relação aos métodos eletroforéticos, assinale a opção correta: 
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a) Na eletroforese de zona, as macromoléculas são separadas quase 
que exclusivamente com base na sua carga de superfície: quanto 
maior for a carga, menor será a velocidade de migração. 
b) A imunoeletroforese é um método quantitativo, aplicável a 
qualquer substância solúvel que seja imunogênica e cujos anticorpos 
não se precipitam. 
c) Em gel de agarose, ocorre um fenômeno chamado 
eletroendosmose, em que há um movimento claro da água para o 
pólo positivo para compensar as cargas do gel que são atraídas para 
o polo negativo. 
d) A imunoeletroforese combina dois métodos: a eletroforese em gel, 
seguida de imunodifusão e precipitação das proteínas. 
e) Quando a mobilidade eletroforética é maior que a velocidade da 
eletroforese, o movimento resultante é a migração para o polo 
negativo. 
Comentário: Não está no escopo de nossa aula de técnicas 
imunológicas esmiuçar as técnicas eletroforéticas, porém, a questão 
permite reforçar alguns pontos vistos, então é válida para nós nesse 
momento. Na letra A, por exemplo, é justamente o contrário! A 
velocidade de migração é diretamente proporcional à carga da 
partícula e inversamente proporcional à viscosidade do meio. A 
alternativa correta da questão é a D. 
Gabarito: D. 
 
11. (AOCP/2014/UFC/Biomédico) O equipamento laboratorial que 
utiliza prismas ou grades de difração é o: 
a) cromatógrafo gasoso. 
b) densintômetro. 
c) termociclador. 
d) espectofotômetro. 
e) fotocolorímetro. 
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Comentário: conforme nossa aula passada, esse equipamento é o 
espectrofotômetro. 
Gabarito: D. 
 
12. (VUNESP/2015/Analista em Saúde - Biomédico/ Bioquímico - 
Pref. São José dos Campos/SP) Água reagente para laboratório clínico 
(ARLC), denominada dessa maneira a partir de sua purificação e, 
rotineiramente, de água tipo I, é utilizada em várias análises nos 
laboratórios clínicos, necessitando atender especificações de 
qualidade descritas pela padronização do CLSI (Clinical and 
Laboratory Standards Institute). Assim, para ARLC, o parâmetro é um 
indicador da contaminaçãoiônica dessa água, e o valor ideal desse 
parâmetro para uso no laboratório clínico é ____________________ 
Assinale alternativa que preenche, correta e respectivamente, as 
lacunas do texto. 
(A) Carbono Orgânico Total … < 1.000 ng/g 
(B) Bactérias heterotróficas … < 10 UFC/mL 
(C) Resistividade … ≥ 10 M┒.cm a 25 °C 
(D) pH … ≥ 7,00 
(E) Teor de silicatos … < 10 mg/L 
Comentário: Bem, se tratando de especificação relativa a 
contaminantes iônicos, devemos pensar em resistividade e 
condutividade... 
Gabarito: C 
 
13. (AOCP/2015/ Biomédico - EBSERH/HE-UFPEL) A água, muito 
utilizada no laboratório para diversas finalidades, deve estar isenta de 
impurezas. São vários os métodos de purificação da água. Qual é o 
método utilizado na purificação da água para a dosagem de sódio e 
potássio no laboratório? 
(A) Filtração. 
(B) Osmose reversa. 
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(C) Deionização. 
(D) Destilação. 
(E) Adsorção por carvão ativado. 
Comentário: as dosagens em questão são de ions (sódio e potássio) 
e é imprescindível que a água utilizada na técnica de dosagem esteja 
livre de íons que alterem a dosagem, devendo, portanto, ser 
deionizada. 
Gabarito: C. 
 
E chegamos ao fim de nossa aula 02! Se precisarem, estou 
disponível por meio do fórum para tirar dúvidas.  
Bons estudos! 
Denise Rodrigues 
 
Lista de Questões 
1. (FGV/2010/FIOCRUZ/Tecnologista em Saúde - Operação e 
Manutenção de Plataformas Tecnológicas) CD4 e CD8 são receptores 
de membrana associados à caracterização de linfócitos T do sistema 
imunológico. A contagem de células expressando CD4 (CD4 positivas) 
é um dos parâmetros analisados em pacientes HIV positivos, visto 
que o HIV infecta estas células. A contagem de células CD4 positivas 
é comumente obtida através de citometria de fluxo. Desta forma, o 
número reduzido de células CD4 positivas é um dos preditores para 
que o paciente entre no protocolo de tratamento utilizando anti-
retrovirais contra HIV. Avalie os gráficos (dot plot) analisados por 
citometria de fluxo provenientes de dois pacientes HIV positivos (A e 
B) com diferentes números de contagem de células CD4 positivas. 
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Assinale a alternativa correta. 
a) Neste experimento, as células CD4 positivas foram identificadas 
utilizando anticorpos específicos contra os receptores de membrana 
CD4 conjugados com o fluoróforo PerCP. 
b) As células identificadas pelo número 3 representam as células 
duplamente positivas, expressando os receptores de membrana CD4 
e CD8. 
c) O paciente B possui o menor número de contagem de células CD4 
positivas e, portanto, deve entrar no protocolo de tratamento 
utilizando anti-retrovirais contra HIV. 
d) As células identificadas pelo número 1 representam as células 
expressando os receptores de membrana CD4. 
e) Estas análises foram obtidas utilizando apenas um canal de 
fluorescência do citômetro de fluxo. 
 
2. (IBFC/2013/EBSERH/Biomédico) Os equipamentos laboratoriais 
capazes de identificar células e determinar o seu fenótipo, além de 
analisar o conteúdo nuclear de DNA são denominados: 
a) Citômetros de fluxo. 
b) Espectrofotômetros de massa. 
c) Espectrofotômetros de chama. 
d) Termocicladores. 
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3. (FGV/2010/FIOCRUZ/Tecnologista em Saúde – Imunologista) O 
citômetro de fluxo é um equipamento que pode ser utilizado para 
investigar a presença de células tumorais leucêmicas residuais na 
medula óssea pois: 
a) permite a análise do volume celular. 
b) permite a análise da apoptose destas células. 
c) permite a análise de um grande número de células da medula. 
d) permite análise de um número máximo de 1000 células. 
e) utiliza a autofluorescência espontânea deste tipo celular para 
identificá-lo. 
 
4. (AOCP/2015/Biomédico - EBSERH/HC-UFG) Qual é o equipamento 
cuja análise permite a identificação direta do fenótipo celular, usando 
anticorpos marcados com moléculas fluorescentes, podendo medir 
múltiplos parâmetros como o espalhamento frontal, o espalhamento 
lateral e a intensidade de fluorescência em diversos comprimentos de 
onda? 
(A) Potenciômetro. 
(B) Citômetro de fluxo. 
(C) Espectrofotômetro. 
(D) Destilador filtrante. 
(E) Imunodifusor radial. 
 
5. (COVEST/2015/ Biomédico – UFPE) A imunofenotipagem é uma 
técnica utilizada na identificação e na distinção de tipos celulares. 
Para tanto, utiliza anticorpos monoclonais marcados com 
fluorocromos para analisar qualitativa e quantitativamente padrões 
de expressão de antígenos celulares chamados “clusters of 
differentiation” ou CD. Cada tipo de célula de nosso corpo possui um 
padrão próprio de expressão destes antígenos; assim, é possível 
identificar com precisão a célula de interesse. Esta técnica é muito 
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utilizada nos diagnósticos hematológicos, principalmente, de 
leucemias e linfomas. Também é utilizada no monitoramento de 
doenças infecciosas como a AIDS. Nesse contexto, é correto afirmar 
que: 
A) a citometria de fluxo é o método preferencial para a 
imunofenotipagem das doenças hematológicas malignas, pois permite 
detectar a presença de vários antígenos numa mesma célula, e fazer 
uma análise rápida de um grande número de células. 
B) a base para a classificação imunológica das leucemias é a 
combinação de anticorpos policlonais usados para determinar o perfil 
imunofenotípico de populações celulares. 
C) a presença de um antígeno diferente do esperado para 
determinado tipo celular e seu estágio de maturação, ou o 
aumento/diminuição da sua expressão, não é determinante da 
existência de um clone anormal. 
D) a imunofenotipagem é uma técnica que se resume à detecção de 
antígenos de superfície expressos por células leucêmicas. 
E) a imunofenotipagem pela citometria de fluxo é um teste 
complementar, pois não é utilizada para o diagnóstico diferencial. 
 
6. (IADES/2014/EBSERH/Nível Superior – Biomédico) A citometria de 
fluxo é uma técnica de medição das propriedades de células em 
suspensão, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas uma a 
uma por um feixe de luz. Quanto à citometria de fluxo, assinale a 
alternativa correta. 
a) As células são boas condutoras de energia, o que permite a 
contagem e medição a partir dos impulsos elétricos que geram. 
b) Apresenta a desvantagem de não permitir a avaliação de múltiplos 
parâmetros celulares de forma individual. 
c) Nenhum fator celular influi na amplitude, duração e forma do pulso 
elétrico, que estão relacionadas com a alteração das linhas de forças 
elétricas e com o deslocamento do meio condutor. 
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d) Não consegue identificar todas as anormalidades significativasidentificadas pelo observador humano. 
e) Quanto maior a corrente elétrica, ou seja, a intensidade do pulso 
elétrico, menor é o tamanho da célula. 
 
7. (PR-4 Concursos/2012/Técnico em Farmácia) A reação de 
amplificação em cadeia (PCR) é uma metodologia que pode ser 
utilizada em vários testes laboratoriais. O equipamento que realiza 
esses testes, o termociclador, apresenta como característica 
principal: 
a) a manutenção da temperatura em 4º C durante o teste; 
b) a variação de comprimentos de onda na faixa UV num intervalo de 
tempo; 
c) a manutenção de temperaturas abaixo de zero por longos períodos 
de tempo; 
d) o aumento e diminuição de temperatura rapidamente e em 
períodos de tempo predeterminados; 
e) a variação de comprimento de onda e temperatura de modo 
sincronizado. 
 
8. (IBFC/2013/PC-RJ/Perito Criminal – Biologia) A técnica de PCR 
(reação em cadeia de polimerase) em tempo real revolucionou o 
processo de quantificação de fragmentos de DNA. Ela realiza a 
quantificação desses ácidos nucleicos de maneira precisa e com maior 
reprodutividade. Assinale o fator que permite essa quantificação: 
a) O sequenciamento do DNA. 
b) A eletroforese. 
c) A fluorescência. 
d) Os marcadores STRs 
e) O termociclador. 
 
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9. (IBFC/2013/EBSERH/Biomédico) Assinale a alternativa correta 
sobre o método de separação denominado cromatografia. 
a) A cromatografia líquida de alta eficiência emprega bombas de alta 
pressão para a eluição da fase móvel. 
b) A grande limitação da Cromatografia líquida clássica é a 
necessidade de que a amostra seja volátil ou estável termicamente. 
c) O detector mais utilizado para separações por Cromatografia 
gasosa de alta resolução é o detector de ultravioleta. 
d) Cromatografia em papel é uma técnica baseada na adsorção 
irreversível das substâncias em questão. 
 
10. (CESPE/2010/ INMETRO/ Técnico – Biotecnologia) Ainda com 
relação aos métodos eletroforéticos, assinale a opção correta: 
a) Na eletroforese de zona, as macromoléculas são separadas quase 
que exclusivamente com base na sua carga de superfície: quanto 
maior for a carga, menor será a velocidade de migração. 
b) A imunoeletroforese é um método quantitativo, aplicável a 
qualquer substância solúvel que seja imunogênica e cujos anticorpos 
não se precipitam. 
c) Em gel de agarose, ocorre um fenômeno chamado 
eletroendosmose, em que há um movimento claro da água para o 
pólo positivo para compensar as cargas do gel que são atraídas para 
o polo negativo. 
d) A imunoeletroforese combina dois métodos: a eletroforese em gel, 
seguida de imunodifusão e precipitação das proteínas. 
e) Quando a mobilidade eletroforética é maior que a velocidade da 
eletroforese, o movimento resultante é a migração para o polo 
negativo. 
 
11. (AOCP/2014/UFC/Biomédico) O equipamento laboratorial que 
utiliza prismas ou grades de difração é o: 
a) cromatógrafo gasoso. 
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b) densintômetro. 
c) termociclador. 
d) espectofotômetro. 
e) fotocolorímetro. 
 
12. (VUNESP/2015/Analista em Saúde - Biomédico/ Bioquímico - 
Pref. São José dos Campos/SP) Água reagente para laboratório clínico 
(ARLC), denominada dessa maneira a partir de sua purificação e, 
rotineiramente, de água tipo I, é utilizada em várias análises nos 
laboratórios clínicos, necessitando atender especificações de 
qualidade descritas pela padronização do CLSI (Clinical and 
Laboratory Standards Institute). Assim, para ARLC, o parâmetro é um 
indicador da contaminação iônica dessa água, e o valor ideal desse 
parâmetro para uso no laboratório clínico é ____________________ 
Assinale alternativa que preenche, correta e respectivamente, as 
lacunas do texto. 
(A) Carbono Orgânico Total … < 1.000 ng/g 
(B) Bactérias heterotróficas … < 10 UFC/mL 
(C) Resistividade … ≥ 10 M┒.cm a 25 °C 
(D) pH … ≥ 7,00 
(E) Teor de silicatos … < 10 mg/L 
 
13. (AOCP/2015/ Biomédico - EBSERH/HE-UFPEL) A água, muito 
utilizada no laboratório para diversas finalidades, deve estar isenta de 
impurezas. São vários os métodos de purificação da água. Qual é o 
método utilizado na purificação da água para a dosagem de sódio e 
potássio no laboratório? 
(A) Filtração. 
(B) Osmose reversa. 
(C) Deionização. 
(D) Destilação. 
(E) Adsorção por carvão ativado 
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1-B 
2-A 
3-C 
4-B 
5-A 
6-D 
7-D 
8-C 
9-A 
10-D 
11-D 
12-C 
13-C 
 
Referências Bibliográficas 
 
- A importância da imunofenotipagem e da citogenética no 
diagnóstico das leucemias: uma Revisão da literatura. Valéria 
Bernadete Leite Quixabeira & Vera Aparecida Saddi. RBAC, vol. 
40(3): 199-202, 2008. 
 
- Papel da imunofenotipagem por citometria de fluxo no diagnóstico 
diferencial das pancitopenias e das linfocitoses. Eduardo M. Rego e 
Guilherme A. S. Santos. Rev. Bras. Hematol. Hemoter. 
 
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125856.html#adsense1 
 
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Naoum, P. F. Métodos de Avaliação Laboratorial. 
 
http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FIN
AL/detectores_cg.htm 
 
http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FIN
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http://www.quimica.ufpr.br/fmatsumo/antigo/2011_CQ092_Preparac
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http://www.kasvi.com.br/principios-da-tecnica-de-eletroforese/ 
 
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em: 27 de julho de 2016. 
 
MENDES, M. E. et al. A importância da qualidade da água reagente no 
laboratório clínico. J. Bras. Patol. Med. Lab. 2011, vol.47, n.3, pp. 
217-223. 
 
BASQUES, F. W. A. A água como reagente. Labtest, 2010. 
 
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