Aula prática Microscopia

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ 
CENTRO DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS 
DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA 
DISCIPLINA: DFIT543- Microbiologia Geral 
DOCENTE: Profa Dra. Ananda Rosa Beserra Santos 
 
 
AULA PRÁTICA SOBRE MICROSCOPIA 
 
INTRODUÇÃO: 
 
O microscópio de luz é um aparelho que se destina a observação de objetos muito 
pequenos, difíceis de serem examinados em detalhes a olho nu. O tipo de microscópio 
mais utilizado nos estudos citológicos é o composto, que é constituído basicamente por 
duas lentes convergentes. Neste microscópio a luz atravessa o objeto e o conjunto de 
lentes antes de atingir o olho, formando uma imagem bidimensional. 
 
DESCRIÇÃO DO MICROSCÓPIO 
 
I. PARTE MECÂNICA 
Essencialmente, o microscópio compõe-se de um sistema óptico, as lentes, e um sistema 
mecânico para sustentação das mesmas. 
1. Pé ou Base: é o suporte de sustentação do microscópio, peça que sustenta todas as 
outras. 
2. Corpo, Braço ou Estativa: é a peça que liga o pé à parte superior do microscópio. 
3. Platina ou Mesa: dispositivo e forma retangular ou arredondado, disposto 
paralelamente a direção da base e que se destina à recepção de uma lâmina contendo o 
material para estudo. No centro da platina existe uma abertura à passagem de luz. 
Fixada à platina, normalmente, encontra-se uma peça denominada “charriot”, cuja função 
é movimentar a lâmina no plano horizontal, sobre a mesma. Dois parafusos, dispostos 
lateralmente à platina, um sobre o outro, promovem a movimentação do “charriot”. O 
parafuso mais externo (de menor diâmetro) permite o deslizamento da lâmina da esquerda 
para direita e vice-versa. 
4. Fonte de luz: apoiada sobre o pé, existe uma fonte própria de luz. Alguns microscópios 
possuem apenas um espelho para refletir a luz de uma fonte externa. 
5. Filtro: é uma peça de vidro colorida (azul, verde, etc...) fixada a um receptáculo, que 
torna a luz mais apropriada à observação do material. O filtro azul é usado em 
microscopia de rotina para transforma a luz amarela da lâmpada em luz branca tipo luz 
solar. 
6. Diafragma: dispositivo colocado superiormente ao filtro regulável mediante uma 
alavanca, que controla a intensidade do feixe luminoso que atinge o orifício da platina. A 
regulagem deste diafragma oferece uma imagem com melhor contraste. 
7. Revólver: localizado abaixo do canhão encontra-se o revólver que é uma peça na qual 
se inserem várias lentes objetivas. O revólver possui ranhuras para que o observador possa 
gira-lo, para as mudanças da objetiva. 
8. Canhão: é a parte superior do microscópio, dotada de movimento de rotação, 
constituída por uma peça semiesférica, ligada a um tubo. Na extremidade do tubo 
encontra-se a lente ocular. 
9. Parafuso Macrométrico: na parte lateral do braço existem dois parafusos, geralmente 
encaixadas um sobre o outro. O de maior diâmetro é o parafuso macrométrico, que 
permite grandes avanços ou recuos da platina em relação a objetiva. 
10.Parafuso Micrométrico: esse parafuso permite pequenos avanços ou recuos do 
parafuso da platina. Apresenta um menor diâmetro, podendo estar próximo ou associado 
ao microscópio. 
11. Trava: junto ao braço pode existir uma alavanca que trava o movimento do parafuso 
macrométrico em uma determinada posição, impedindo a movimentação da platina e 
protegendo as objetivas contra possíveis choques. 
 
II. PARTE ÓPTICA 
1. Condensadoras: consta de um conjunto de lentes situado abaixo da platina que 
concentra e torna paralelo o feixe luminoso, fornecendo a luz necessária à iluminação 
uniforme do objeto em estudo. O “parafuso” do condensador, localizado lateralmente no 
braço do microscópio, permite a movimentação das lentes condensadoras que devem ser 
mantidas na posição mais elevada para obtenção de uma iluminação uniforme. 
2. Objetivas: o microscópio possui, geralmente, quatro objetivas. Toda objetiva traz 
gravado o aumento que proporciona (o número superior e em caracteres maiores). 
O segundo número gravado constitui detalhe de óptica e se refere a abertura numérica da 
lente. 
Ex.: A objetiva de 100x tem as seguintes especificações: 100x/0.32 e 160/0.17, significa 
o número de vezes que esta objetiva amplia o objeto. 0.32 é o valor da abertura numérica; 
160 e a distância (mm) a da rosca da objetiva até a ocular e 0.17 é a espessura dada em 
mm da lamínula que deve ser usada para esta objetiva. 
3. Oculares: é a lente superior do microscópio que se encaixa no tubo. Toda ocular traz 
gravado o aumento que proporciona. 
 
BASES ÓPTICAS DA MICROSCOPIA 
 
A luz que atravessa as lentes condensadoras é uniformemente espalhada sob a lâmina e 
atravessa o objeto, incidindo na lente objetiva. Estando o objeto colocado anteriormente 
ao foco da lente objetiva, formar-se-á, no plano focal da lente ocular, uma imagem real 
(que pode ser projetada em um anteparo), maior e invertida. 
 
A luz, ao atravessar a ocular, formará uma imagem virtual, maior e direita com relação à 
imagem formada pela objetiva. Entretanto, a imagem final do objeto, proporcionada pelo 
microscópio, será virtual, ampliada e invertida em relação ao mesmo. 
E o aumento final da imagem é resultado do produto do aumento proporcionado pelas 
lentes. 
O processo de formação da imagem no microscópio pode ser comparado ao sistema 
empregado na projeção de um “slide” (Fig. 1), no qual, temos a formação de uma imagem 
real e invertida do objeto original. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Fig. 1 – Esquema do trajeto da luz no processo de formação da imagem em um sistema 
óptico hipotético (extraída de “A Célula” – Carvalho, H.F. & Recco-Pimentel, S.H., 
2007). 
 
1. Fonte de luz. 
2. Um sistema de lentes com função de concentrar a luz sobre o objeto (lâmina ou slide), 
que no caso do microscópio, se chama condensador. 
3. O objeto que é atravessado pela luz (material biológico colocado sobre a lâmina, caso 
do microscópio: ou filme fotográfico, no caso do projetor). 
4. Lente objetiva, formando uma imagem real, aumentada e invertida. 
5. Uma lente intermediária, situada no plano de formação da imagem, com a função de 
condensar a luz proveniente desta, sobre a lente ocular, a qual confere o aumento. No 
caso do projetor de slide, consta de um anteparo para a projeção da imagem. 
6. Lente ocular, que forma a imagem final do objeto ao microscópio. Esta imagem é 
virtual, aumentado e invertida. 
7. Olho do observador. 
 
 
 
ATIVIDADE PRÁTICA 
 
1. A figura 2 é o desenho esquemático de um microscópio de luz mostrando seus diversos 
componentes. Escreva o nome e a função de cada componente. 
 
a) Dê nome às estruturas apontadas pelos quadrados numerados: 
b) Dê nome às estruturas apontadas pelos círculos numerados: 
 
PROCEDIMENTO CORRETO PARA A FOCALIZAÇÃO 
 
1. Destrave o microscópio movimentando a alavanca. Verifique a posição da alavanca 
quando está travada e destravada. 
2. Gire o revólver, encaixando a objetiva panorâmica (4x). Faça isso, olhando 
lateralmente, para evitar que alguma objetiva toque na platina. Verifique se cada objetiva 
está realmente encaixada, pelo ruído característico do encaixe. 
3. Pegue a lâmina, segurando-a apenas pelas bordas. Verifique se a lamínula está voltada 
para cima. 
4. Abra a presilha e coloque a lâmina sobre a platina, encaixando-a ao “charriot”. Solte a 
presilha e verifique se a lâmina está bem encaixada. Centralize o material no orifício da 
platina. Caso seja necessário, abra o diafragma, movimentando a alavanca 
correspondente. 
5. Acenda a luz do microscópio. 
6. Verifique se o diafragma está aberto, olhando lateralmente se há passagem de luz 
através do orifício da platina. Caso seja necessário, abra o diafragma, movimentando a 
alavanca correspondente. 
7. Certifique-se se o condensador encontra-se em posiçãomais elevada. 
8. Levante a platina até o seu ponto máximo movimentando o parafuso macrométrico. 
9. Olhando através da ocular e utilizando o parafuso macrométrico, abaixe lentamente a 
platina, até que o material a ser observado possa ser visto. Assim que isto ocorrer, corrija 
a focalização usando o parafuso micrométrico. 
10.Explore o preparado, movimentando os parafusos do “charriot” com uma das mãos e 
o parafuso micrométrico com a outra. Coloque sempre o material a ser analisado no centro 
do campo de observação, antes de passar para a objetiva de aumento imediatamente 
superior. OBS.: procure observar ao microscópio sempre com os dois olhos abertos. 
11. Encaixe a objetiva de pequeno aumento (10x) e faça o ajuste da focalização, utilizando 
apenas o parafuso micrométrico. Observe o campo atentamente. 
12.Selecione uma determinada área do material, centralize-a e encaixe a objetiva de 40x 
(médio aumento). Faça o ajuste da focalização, utilizando o parafuso micrométrico. 
13.Terminando a observação, desligue a luz, gire o revólver para encaixar a objetiva e 
menor aumento (passando pela objetiva de 10x) e retire a lâmina. OBS.: nunca movimente 
a platina do microscópio com a objetiva de maior aumento ou de imersão encaixada.