PLATAFORMAS MOLECULARES PARA AS ATIV

Genética I

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PUC-MINAS

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Danielle Andrade

27/09/2020

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PLATAFORMAS MOLECULARES PARA AS ATIV. BIOLÓGICAS

1.
O processo de extração do DNA tem como objetivo isolar os ácidos nucleico dos demais componentes celulares. Baseado neste processo marque a alternativa incorreta.

A primeira etapa da extração é a lise de membranas onde são utilizados substância com ação de um detergente.

A precipitação final do DNA pode ser realizada com etanol ou álcool isopropílico.

Na etapa de purificação do DNA são utilizadas substâncias que fazem a remoção de carboidratos e proteínas presente nas amostras, isolando apenas o DNA

Durante a extração do DNA é necessária fazer a remoção de outros componentes como proteínas, lipídeos e RNA.

Substâncias com ação de precipitação são utilizadas para remoção dos lipídios da amostra

Explicação:
Substâncias com ação de DETERGENTES são utilizadas para remoção dos lipídios da amostra.

2.
(SESAU, 2010): O RNA difere quimicamente do DNA por apresentar:

ribonucleotídeos e por possuir a base uracila;

ribonucleotídeos e possuir as bases timina e uracila;

desoxirribonucleotídeos e possuir a base uracila;

desoxirribonucleotídeos e por possuir a base timina;

ribonucleotídeos e possuir a base timina.

Explicação:
Desoxirribonucleotídeos e a base nitrogenada timina são encontrados apenas no DNA.

3.
Identifique as principais etapas do protocolo de extração de ácidos nucleicos:

Lise celular, Hidratação, Precipitação e Purificação;

Hidratação, Purificação, Lise celular e Precipitação.

Precipitação, lise celular, purificação e Hidratação.

Lise celular, Purificação, Precipitação e Hidratação;

Hidratação, Lise celular, Purificação e Precipitação;

Explicação:
A extração de ácidos nucleicos envolve etapas sequenciais de ruptura celular e exposição do ácido nucleico, seguida da purificação do material de interesse com a remoção de contaminantes. Em seguida, realiza-se a precipitação do alvo e consequente hidratação do mesmo.

4.
Na técnica de extração de ácidos nucleicos (DNA/RNA), quais os reagentes que podem ser utilizados?

Detergente

Etanol 70% e isopropanol;

Fenol e clorofórmio;

Proteinase K

DNAse

Explicação:
Todos os ítens listados podem ser utilizados para viabilizar a técnica de extração de acidos nucleicos.

5.
(IBFC, 2013, Perito Criminal/ Biologia): O DNA (ácido desoxirribonucléico) é constituído por uma longa fita dupla de nucleotídeos. O sequenciamento de DNA é um processo que determina a ordem desses nucleotídeos. A fita dupla é formada pelo pareamento das bases. Desta forma, referente ao pareamento desses nucleotídeos, não é correto afirmar:

A guanina se pareia com citosina;

A sequência desse pareamento é responsável pelas características genéticas do homem e de todos os seres vivos;

A guanina se pareia com adenina.

As bases dos nucleotídeos são adenina (A), timina (T), guanina (G) e citosina (C);

Adenina se pareia com timina;

Explicação:
O pareamento nucleotídico de guanina é feito única e exclusivamente com citosina.

6.
São exemplos de ácidos nucleicos:

DNA e RNA;

Proteínas e lipídios;

Adenina e guanina;

Timina e uracila.

Monossacarídeos e dissacarídeos;

Explicação:
As demais alternativas fornecem exemplos de outras macromoléculas ou bases nitrogenadas.

7.
A respeito da quantificação de DNA utilizando espectofotometria, marque a alternativa INCORRETA.

Na espectrofotometria quanto maior for a absorção de luz pela amostra, maior a concentração de DNA na amostra.

A técnica é capaz de determinar as concentrações médias dos ácidos nucléicos DNA ou RNA presentes em uma amostra, bem como sua pureza.

Quando a razão das leituras no comprimento 260nm/280nm estão baixas (abaixo de 1,4 aproximadamente) podemos sugerir uma boa qualidade da extração ácido nucleico (alta pureza).

A quantificação de DNA por espectrofotometria é realizada por medição da quantidade de luz absorvida pelo DNA em solução no comprimento de onda de 260 nm.

O benefício da utilização de análise por espectrofotometria é a capacidade de determinar a pureza da amostra usando o cálculo de razão das leituras no 260 nm/ 280 nm.

Explicação:
Quando a razão das leituras no 260 nm/ 280 nm é abaixo de 1,4 podemos sugerir a presença de proteínas ou outros contaminantes na amostra de ácido nucleico.

1.
Dentre as sentenças abaixo, selecione aquela que descreve uma etapa que não está presente no procedimento de uma reação de PCR padrão.

Alongamento/Polimerização a 72 °C por um minuto a cada ciclo.

Anelamento com faixa de temperatura entre 55-60ºC de acordo com o primer utilizado, por um minuto a cada ciclo.

Anelamento dos iniciadores (primers) no DNA alvo a 55 °C por um minuto a cada ciclo.

Desnaturação da amostra a 94 - 96°C por 40 segundos a cada ciclo.

Resfriamento da amostra a 16 °C por 30 segundos a cada ciclo.

Explicação:
Não há etapa de resfriamente no ciclo das PCR. Existem apenas desnaturação, anelamento e extensão.

2.
(Fiocruz, 2010): A retrotranscrição de RNA genômico viral em moléculas de DNA complementar para a sua detecção por técnica de PCR é denominada:

PCR em tempo real;

microscopia ótica;

Imunoperoxidase;

RT-PCR;

sequenciamento.

Explicação:
Do inglês: Reverse transcription polymerase chain reaction.

3.
(Fiocruz, 2006): São elementos necessários na técnica de amplificação de DNA através da reação da polimerase em cadeia (PCR):

DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs, endonucleases e termociclador;

DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs e endonucleases;

DNA molde, DNA polimerase, primers, dNTPs, endonucleases e termociclador;

DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs e termociclador;

DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs, etanol e termociclador;

Explicação:
As endonucleases são enzimas de restrição utilizadas nas técnicas de clonagem molecular. O etanol é utilizado no processo de extração de ácido nucleico, antes da técnica de PCR. DNA polimerase ou Taq DNA polimerase são a mesma enzima.

4.
(Fiocruz, 2010): Sobre a utilização da técnica de PCR com a finalidade de diagnóstico molecular, analise as afirmativas a seguir.
I. Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR.
II. É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar.
III. A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo.
Assinale:

se somente a afirmativa II estiver correta;

se somente a afirmativa III estiver correta;

se somente as afirmativas I e II estiverem corretas;

se somente a afirmativa I estiver correta;

se todas as afirmativas estiverem corretas.

Explicação:
É possível detectarmos patógenos cujo genoma seja RNA através de RT-PCR, ou seja, transcrição reversa acoplada à PCR. Também podemos quantificar o nosso alvo através da PCR em tempo real ou, indiretamente, mensurar aproximadamente a sua quantidade através de gel de agarose, reagente Low mass e sistema de coloração adequado para análise dos amplicons.

5.
A reação em
cadeia da polimerase (PCR) tem como base a:

termorreação para hidratação do DNA.

identificação de proteínas.

amplificação de moléculas de RNA.

degradação do DNA.

amplificação de moléculas de DNA.

Explicação:
PCR é uma técnica de amplificação do DNA que permite a detecção de moléculas e sequências de nucleotideo alvo

6.
(POLÍCIA CIENTÍFICA, PE, 2016) - Acerca da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a opção correta:

O último passo da PCR, a polimerização, é a excisão da fita de DNA no sentido 3'→5', começando no primeiro nucleotídeo do primer iniciador incorporado;

A reação de PCR é dependente da atividade de cópia de fragmentos de DNA, catalisada pela enzima DNA sintetase;

Os iniciadores são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita dupla, usualmente com extremidade 3'-OH, e complementares à sequência do segmento de DNA de interesse;

A enzima termoestável direciona o posicionamento dos precursores de DNA ― dNTP ― iniciando a síntese de novas fitas de DNA. A temperatura ideal para a polimerização varia entre 25 ºC e 45 ºC;

PCR é a tecnologia por meio da qual são produzidos bilhões de cópias de fragmentos de DNA. Os fragmentos do DNA amplificado pela PCR são chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes métodos.

Explicação:
A enzima é chamada DNA polimerase. Os iniciadores são moléculas fita-simples com a extremidade 3´OH livre, complementares às bordas do fragmento de interesse. A fita de DNA molde lida no sentido 3´--> 5´ não é removida após a polimerização/extensão da fita nascente no sentido 5´ --> 3´ na última etapa de um ciclo de PCR. Na ciclagem subsequente, esse DNA hídrido será desnaturado, disponibilizando ambas as fitas como molde para novas reações de polimerização. O estabelecimento dos dNTPs a serem incorporados pela enzima termoestável se dá pela fita de DNA molde, em função da complementariedade de bases. A temperatura ideal de polimerização varia entre 50-55°C.

7.
A técnica de PCR (reação em cadeia da DNA polimerase) é utilizada com o objetivo de se obter várias cópias (amplificação) de um fragmento específico de DNA. Entretanto, um dos problemas que pode ocorrer durante a PCR é a amplificação inesperada de fragmento(s) inespecífico(s). Dados os fatores que influenciam nesse tipo de problema, I. Sequência de nucleotídeos dos primers. II. Temperatura de anelamento dos primers. III. Concentração do DNA template. IV. Concentração dos primers.
Verifica-se que está(ão) correto(s):

A) I, apenas.

D) I, II e IV, apenas.

E) I, II, III e IV.

B) II e III, apenas.

C) III e IV, apenas.

Explicação:
Todos os fatores influenciam.

1.
(Unesp, 2012): A eletroforese em gel de agarose é uma técnica bastante utilizada em laboratório de biologia molecular para separação de ácidos nucleicos pelo seu tamanho. Assim, é correto afirmar que, na eletroforese em gel de agarose:

quanto maior a concentração da agarose no gel mais rápido as moléculas de DNA vão migrar.

as moléculas menores de DNA vão migrar mais rápido que as maiores;

as moléculas de RNA não migram sob campo elétrico em agarose;

as moléculas de DNA vão migrar sob campo elétrico para o polo negativo;

as moléculas maiores de DNA vão migrar mais rápido que as menores;

Explicação:
As moléculas de DNA, dotadas de carga negativa, migram do polo negativo (por repulsão), em direção ao polo positivo (atração). A concentração do gel irá determinar o tamanho dos poros e, consequentemente, influenciará na velocidade com que as partículas migrarão na malha. O tamanho do amplicon será inversamente proporcional à sua velocidade de deslocamento.

2.
(Adaptada de UFMG, 2013) - Em relação à espectrofotometria, é incorreto afirmar que:

a luz visível para o olho humano é a região do espectro eletromagnético com comprimento de onda entre 390 e 780 nm;

a energia é transmitida por ondas eletromagnéticas que são caracterizadas pela frequência e comprimento de onda;

a espectrofotometria é a medida da intensidade da luz em comprimentos de onda selecionados;

a absorvância é a capacidade de uma substância em absorver ou transmitir radiação;

a espectrofotometria permite estimar a concentração de soluções.

Explicação:
Absorbância e transmitância são conceitos não sinônimos e inversamente proporcionais; isto é, quanto maior a absorbância, menor a transmitância, e vice-versa.

3.
(SESAU, RO, 2017) - Técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga. Pode ser utilizada para separação de diversas moléculas orgânicas, como lipoproteínas, proteínas, RNA e DNA. A técnica de separação descrita no texto é denominada:

cromatografia.

eletroforese;

floculação;

filtração;

centrifugação;

Explicação:
As demais técnicas citadas não envolvem a utilização de campo elétrico para a separação das partículas em função de seus respectivos pesos moleculares.

4.
(Polícia Científica, PE, 2016): A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta:

A eletroforese consiste na migração das partículas de uma solução coloidal sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas;

A identificação dos fragmentos amplificados de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida;

A eletroforese em gel de agarose é usada para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência;

Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo.

A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, comparada a eletroforese em acrilamida, sendo utilizada como instrumento para averiguação de êxito na etapa de extração;

Explicação:
A eletroforese em gel de agarose destina-se apenas a ácidos nucleicos, enquanto a eletroforese em gel de poliacrilamida pode ser empregada para ácidos nucleicos e proteínas. Na técnica de eletroforese, graças à aplicação de campo elétrico, as partículas são induzidas a migrar no polímero. O movimento das partículas é determinado em função da repulsão do pólo negativo uma vez que, em função dos seus respectivos grupamentos fosfato, o DNA possui cargas semelhante.

5.
(Prefeitura de Barra Mansa, RJ, 2010) - Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. Em relação à eletroforese em gel é correto afirmar que:

na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA positivamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;

as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de maior massa situam-se na porção superior do gel e as de menor massa na região inferior;

após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluoresce (torna-se visível) vivamente em contato com a luz infra-vermelha.

as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção superior do gel e as de maior massa na porção inferior;

Na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;

Explicação:
O DNA possui carga negativa, o que faz com que a migração ocorra do polo negativo (repulsão) em direção ao polo positivo (atração). A
facilidade com que isso ocorre depende do tamanho das partículas. As maiores ficam atrasadas na trama do polímero, e são retardadas na migração, fazendo com que ocupem posições superiores no gel. Para a revelação do resultado, é necessário excitar o brometo de etídeo com luz UV.

6.
(FIOCRUZ, 2010) - Analise as afirmativas a seguir:
I. A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial.
II. A eletroforese em gel é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
III. Existem vários tipos de eletroforese em gel para analisar proteínas durante o processo de purificação. Entre elas, estão a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil de sódio sulfatado (SDS-PAGE), a eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante (Native PAGE) e o gel em duas dimensões.
Assinale:

se apenas as afirmativas I e II estiverem corretas;

se apenas a afirmativa II estiver correta;

se apenas as afirmativas I e III estiverem corretas.

se apenas a afirmativa I estiver correta;

se apenas a afirmativa III estiver correta;

Explicação:
A eletroforese bidimensional não é utilizada para avaliação do grau de pureza, mas sim para a separação simultânea de um conjunto de proteínas presentes em uma amostra, através da diferença entre seus pesos moleculares e pontos isoelétricos.

7.
(Adaptada de IF, RN, 2017) - Entre as técnicas usadas na biotecnologia:

na técnica do DNA recombinante, utilizam-se as endonucleases e a Taq polimerase para unir as duas fitas de DNA;

a biobalística usa microprojéteis revestidos com DNA para identificar trechos que se repetem no DNA;

Nenhuma das alternativas acima.

a eletroforese é usada para separar fragmentos de DNA de tamanhos diferentes a partir de corrente elétrica;

na reação em cadeia da polimerase (PCR), utiliza-se a DNA helicase para separar as fitas de DNA a 94° C;

Explicação:
Na técnica de PCR, promovemos a desnaturação das fitas de DNA através de processo térmico, e não enzimático. Na técnica de DNA recombinante, além de endonucleases, utilizamos as DNA ligases para promover o restabelecimento das ligações químicas. A biobalística corresponde a uma estratégia de transferência gênica/transformação de organismos.

.
(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:

A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;

Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;

A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.

É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;

Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);

Explicação:
A metodologia de PCR digital corresponde a um avanço da metodologia de PCR em tempo real, permitindo a quantificação de ácidos nucleicos com grande sensibilidade e dispensando a necessidade de curva-padrão.

2.
(UFES, 2015): Considere as seguintes afirmações sobre a reação em cadeia da DNA polimerase (PCR):
I. Segmentos específicos de DNA podem ser facilmente amplificados a milhões de cópias.
II. A PCR pode ser utilizada em medicina forense e diagnósticos clínicos. Produtos da reação de PCR podem ser usados em clonagem.
III. A PCR utiliza uma DNA-polimerase termoestável, porque, para cada etapa de amplificação, o DNA de fita dupla deve ser desnaturado pelo calor.
É correto o que se afirma em:

I e II apenas;

I apenas;

II e III apenas;

I, II e III.

II apenas;

Explicação:
Todas as afirmativas estão corretas.

3.
PCR em tempo real é uma inovação tecnológica derivada da PCR que tem se difundido rapidamente nos laboratórios de biotecnologia. Dadas as afirmativas sobre a PCR em tempo real,
I. Permite quantificar os fragmentos de DNA amplificados durante a fase exponencial da reação em cadeia da polimerase.
II. Apresenta um detector de fluorescência para o monitoramento da reação ao longo dos ciclos de amplificação.
III. Permite a investigação de alterações genéticas e dos níveis de expressão dos genes.
IV. Utiliza uma análise eletroforética para a detecção dos produtos da reação.
Verifica-se que está(ão) correta(s):

E) I, II, III e IV.

B) I e IV, apenas.

D) I, II e III, apenas.

A) II, apenas.

C) III e IV, apenas.

Explicação:
A qPCR faz a quantificação do material genético em tempo real, não necessitando de processamento eletroforético pós-PCR

4.
(INCA, 2014): Um oligonucleotídeo de DNA curto utilizado para amplificação por PCR é adequadamente chamado de:

polimerase;

vetor.

sonda;

primer;

inserto;

Explicação:
As sondas são utilizadas para a detecção de ácidos nucleicos. Insertos correspondem a pequenos fragmentos de DNA os quais são clonados em plasmídeos ou vetores, utilizados para a transferência de material genético. A polimerase é a enzima responsável pela amplificação do ácido nucleico.

5.
(PC, DF, 2012) - O propósito da PCR é fazer um número imenso de cópias de um determinado fragmento gênico, cujo tamanho pode variar de poucos pares de base até milhares de pares de base. A PCR é constituída de três ciclos. Assinale a alternativa que apresenta esses ciclos:

fase de desnaturação, fase de extensão ou anelamento e fase de fixação;

fase de desnaturação, fase de captação e fase de extensão.

fase de desnaturação, fase de hibridização ou anelamento e fase de extensão;

fase de desnaturação, fase de hibridização e fase de fixação ou anelamento;

fase de desnaturação, fase de fixação e fase de hibridização ou anelamento;

Explicação:
As fases de fixação e captação não fazem parte da reação de PCR. Além disso, só é possível a fase de extensão se, na fase imediatamente anterior, houver a hibridização ou anelamento dors primers com a fita molde.

6.
(INCA, 2014): Qual afirmação descreve com precisão o processo de PCR?

O peso molecular do fragmento de DNA não é diagnóstico de especificidade de um PCR;

Os produtos de PCR são inibidores da reação em cadeia da polimerase;

A reação de PCR amplifica geometricamente um fragmento de DNA.

A reação de PCR requer um tipo especial de enzima de restrição;

É necessário um par de primers para a amplificação de um fragmento de DNA;

Explicação:
Os produtos de uma etapa da reação de PCR servem como substrato para as etapas subsequentes. Não é necessário utilizar enzima de restrição para essa metodologia. O uso de pesos moleculares auxilia na deteção de amplificações inespecíficas. A amplificação é considerada exponencial.

7.
A PCR em Tempo Real também denominada qPCR, foi descrita pela primeira vez em 1993 por Higuchi e seus colaboradores. Sobre esse tema, marque V para as afirmativas verdadeiras e F para as falsas.
( ) Ela é uma variante da reação de PCR convencional, pois a amplificação e a detecção ocorrem simultaneamente, com possibilidade de gerar resultados quantitativos com maior precisão.
( ) A quantificação na PCR em Tempo Real é mensurada pela quantidade de produto amplificado durante cada ciclo (através da fluorescência emitida). Essa metodologia utiliza um equipamento com sistema de monitoramento da emissão
de fluorescência.
( ) Na PCR convencional, é necessária a preparação de gel de agarose para visualização; na PCR em tempo real não ocorre manipulação pós-PCR.
Assinale a alternativa correta.

V, V, V

F, F, V

F, V, F

F, F, F

V, F, F

Explicação:
V, V, V

1.
(Unesp, 2012): Um clone de cDNA para um gene humano que codifica uma proteína amilase foi marcado com radioatividade e utilizado em um experimento de Southern blotting. Nesse experimento, o DNA genômico de Ratos Wistar foi digerido com a enzima de restrição Eco RI e três fragmentos de DNA foram observados na análise de Southern blotting. Quando os pesquisadores realizaram os mesmos experimentos com outra linhagem de ratos, foi observada a ausência de fragmentos na análise de Western blotting, mesmo após estes experimentos terem sido repetidos três vezes. Podemos concluir corretamente que:

esses resultados mostram que existem três sítios de restrição para a enzima Eco RI no DNA genômico dos ratos Wistar, gerando, portanto, três fragmentos de tamanhos diferentes na análise de Southern blotting. Na outra linhagem de ratos, a presença de apenas um sítio de restrição para essa enzima (Eco RI) gera um fragmento muito grande, o qual não é capaz de se hibridizar com o clone de cDNA e, portanto, não é possível ser detectado pela análise de Southern blotting;

esses resultados demonstram que o DNA dos ratos Wistar contém dois ou mais sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos de tamanhos diferentes. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos fornece prova de que esses animais sofreram mutações na sequência de DNA que codifica a proteína amilase e essa sequência não é mais reconhecida pela enzima de restrição Eco RI, portanto não são observados fragmentos na análise de Southern blotting;

esses resultados demonstram que, na linhagem de ratos Wistar, existe um sítio de restrição para a enzima Eco RI na sequência da proteína amilase e, portanto, são observados três fragmentos com tamanhos diferentes que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos demonstra a falta de sítios de restrição para a enzima Eco RI na proteína amilase desses animais, indicando, portanto, que o gene da amilase está deletado por mutação no DNA desses animais.

os resultados da análise de Southern blotting com os ratos Wistar demonstram que há o reconhecimento de sítios de restrição pela enzima Eco RI na sequência de DNA do gene que codifica a proteína amilase. Entretanto, a ausência de fragmentos na outra linhagem de camundongo analisada é certamente resultado de erros metodológicos na aplicação dessas análises, pois este seria um resultado improvável;

na linhagem de ratos Wistar a região do DNA que codifica a proteína amilase contém dois sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos sugere que esses animais não têm a capacidade de produzir essa enzima amilase, pois essa sequência de DNA pode ter sido perdida ou deletada;

Explicação:
O número de sítios de restrição cliváveis pela enzima Eco RI para o gene analisado irá implicar na quantidade de fragmentos encontrados. Um sítio de restrição gera dois fragmentos, dois sítios de restrição gera três fragmentos e, assim sucessivamente. Na outra linhagem de ratos, a ausência de bandas no Western Blot sinaliza a ausência da proteína (amilase) que seria codificada pelo seu respectivo gene codificante.

2.
A eletroforese em gel é uma das principais ferramentas de trabalho no campo da biologia molecular e tem sido utilizada no estudo de proteínas, DNA e RNA. Marque a opção que apresente técnicas de biologia molecular que analisam, respectivamente, proteínas, DNA e RNA.

Northern blot, Southern blot e Western blot.

Western blot, Southern blot e Northern blot.

Southern blot, Northern blot e Western blot.

Western blot, Northern blot e Southern blot.

Southern blot, Western blot e Northern blot.

Explicação:
Western blot - analisa proteína. Southern blot- analisa DNA . Northern blot - analisa RNA

3.
Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:

uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo"

A obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A".

uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A".

uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".

uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A".

Explicação:
O Southern-blot revelaria a presença do gene especifico na especie A, porém não seria possível afirmar se esse gene é transcrito ou traduzido.

4.
(Adaptada de UFG, 2017): A identificação e quantificação de moléculas específicas em células e tecidos pode ser realizada pela interação antígeno-anticorpo. Qual metodologia utiliza dessa interação para identificação molecular?

espectrometria de massa;

qRT-PCR;

Nenhuma das alternativas acima.

Western Blot;

espectrofotometria;

Explicação:
As demais metodologias citadas não envolvem interação antígeno x anticorpo.

5.
(UFRJ, 2013): Selecione a opção que contém as etapas necessárias para execução do protocolo de Western blotting:

Cromatografia de afinidade; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.

Transferência do DNA do gel para membrana; incubação com sonda hibridizadora radioativa; revelação.

Imobilização em coluna de afinidade, eluição com tampão glicina, neutralização do eluato, dot blot.

Transferência de proteínas do gel para membrana; bloqueio da membrana; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.

Desnaturação de proteínas; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.

Explicação:
É necessária a transferência das proteínas para uma membrana, onde as reações antígeno x anticorpo se processarão. Colunas de afinidade não são necessárias nesse procedimento.

6.
Considerando os princípios das técnicas de hibridização e suas aplicações dentro da biologia molecular, assinale a alternativa correta:

A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Southern Blotting;

Southern, Northern e Western Blotting podem ser utilizadas para estudos envolvendo expressão gênica;

Não existe técnica de hibridização capaz de avaliar expressão gênica.

A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Western Blotting;

A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Northern Blotting;

Explicação:
A técnica de Northern blot corresponde a uma técnica de hibridização de moléculas de RNA com sondas de oligonucleotídeos marcadas. Trata-se de uma metodologia útil, portanto, na detecção de RNA mensageiro (RNAm), nos estudos de expressão gênica, na avaliação da degradação
de RNA e splicing, por exemplo.

7.
(FGV, 2010): Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:

uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".

a obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A";

uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A";

uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo;

uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A";

Explicação:
A obtenção de produtos de PCR amplificados utilizando-se iniciadores para tox apenas detecta a presença do gene, assim como a hibridização por Southern Blot. Para avaliação da expressão gênica por hibridização, seria necessário realizar a técnica de Northern Blot. Para avaliação da tradução do gene por técnica de hibridização, seria necessária a realização de Western Blot.

(Adaptada de UFTM, 2016): A eletroforese é uma técnica muito utilizada nos laboratórios de bioquímica, com a finalidade de acompanhar a purificação, a expressão e isolamento de proteínas para análise por espectrometria de massa ou determinar a massa molecular (Mr) da proteína. Analise as afirmações abaixo e escolha a alternativa correta:

A eletroforese desnaturante separa as proteínas com relação à sua carga e forma.

Eletroforese descreve a migração de uma partícula carregada sob influência de um campo elétrico.

Em um gel SDS-PAGE as proteínas com maior massa molecular (Mr) são encontradas na parte inferior do gel.

Nenhuma das alternativas acima.

A separação eletroforética de proteínas é comumente realizada empregando-se géis de agarose, os quais possuem alta capacidade de resolução.

Explicação:
Os géis de agarose são preferencialmente utilizados para análises de ácidos nucleicos. A eletroforese desnaturante confere às proteínas carga negativa, fazendo com que a separação ocorra apenas pela diferença de peso molecular. As proteínas de maior peso molecular ficam atrasadas na trama do gel, ocupando posições superiores.

2.
(UnB, Cespe): Em um experimento de proteômica, ao se analisar géis de eletroforese bidimensional provenientes de amostras de eritrócitos humanos, comparando-se duas situações diferentes (exposto versus não exposto a um medicamento), foram analisadas amostras de 3 indivíduos em cada condição, sendo cada amostra analisada em triplicata, em um total de 18 géis. Para que seja possível determinar quais proteínas devem ser identificadas como presentes em quantidades distintas nas duas condições, é necessário realizar determinadas etapas. Assinale opção que apresenta a ordem correta de realização dessas etapas:

detecção, para determinação das coordenadas cartesianas dos spots; análise estatística da variação de massa molecular de cada spot; pareamento com base nas intensidades de cada spot.

análise estatística comparando massa molecular e pI dos spots; detecção, para delimitação das coordenadas cartesianas de cada spot; pareamento entre os spots de cada grupo;

pareamento, para delimitação das coordenadas e da intensidade de cada spot; detecção, para a comparação entre os grupos; análise estatística para validação dos dados de detecção;

pareamento dos spots entre todos os grupos; análise estatística comparando as coordenadas cartesianas dos spots; detecção, para delimitação das áreas dos spots;

detecção, para delimitação das áreas dos spots; pareamento dos spots em cada grupo e, a seguir, entre os grupos; análise estatística comparando as intensidades dos spots;

Explicação:
Existem softwares que comparam os géis bidimensionais permitindo a contagem do número de spots, a caracterização automática dos valores de pI e massa molecular, análise de níveis de expressão e etc, validando os dados estatisticamente ao final.

3.
(Adaptada de UERJ, 2015): A eletroforese foi realizada pela primeira vez em 1937, por Arne Tiselius, trabalho que lhe rendeu um prêmio Nobel. Desde então, variações dessa técnica têm sido usadas na prática analítica. A técnica que separa proteínas de acordo com seus pontos isoelétricos e suas massas moleculares é conhecida como:

cromatografia líquida;

eletroforese bidimensional;

eletroforese capilar;

zimografia;

Nenhuma das alternativas acima.

Explicação:
A corrida eletroforética tem duas dimensões, por isso, é chamada bidimensional. Na primeira dimensão, as proteínas são separadas de acordo com seus pontos isoelétricos. Na segunda dimensão, as mesmas são separadas de acordo com as suas massas moleculares.

4.
(Policia Cientifica, PR, 2017): A espectrometria de massa é uma técnica utilizada para o estudo de massas de átomos, moléculas ou fragmentos de moléculas, desde que estes estejam eletricamente carregados. A respeito desse assunto, julgue as afirmações.
I. Um espectrômetro de massas determina a massa de uma molécula ou átomo medindo a razão massa/carga dos íons gerados;
II. Os íons são gerados pela indução, perda ou ganho de carga por uma espécie eletricamente neutra;
III. Uma vez formados, os íons são direcionados, por forças eletrostáticas, para dentro do analisador de massas, separados de acordo com suas razões massa/carga e finalmente detectados.
Assinale a alternativa correta:

Estão corretas apenas as afirmativas I e III;

Estão corretas apenas as afirmativas I e II;

Estão corretas todas as afirmativas;

Estão corretas apenas as afirmativas II e III;

Está correta apenas a afirmativa I.

Explicação:
Todas as alternativas estão corretas.

5.
(Fiocruz, 2010): Nas análises rotineiras de eletroforese bidimensional, após a ruptura dos tecidos e/ou das células, as proteínas são solubilizadas e desnaturadas em soluções contendo detergentes não iônicos ou zwiteriônicos, agentes caotrópicos e pequenas quantidades de agentes redutores, para posterior análise em gel. Assinale abaixo a única alternativa que não descreve exemplos, respectivamente, destas três classes de substâncias:

Triton X-100, hidrocloreto de guanidina e Ditiotreitol;

CHAPS (3-[(3-Cloroamidopropil)dimetilamônio]-1 propanosulfonato), uréia e iodoacetamida;

Triton-X100, tiouréia e β-mercaptoetanol;

sulfobetaínas, tiouréia e β-mercaptoetanol.

Duodecil sulfato de sódio, uréia e Ditiotreitol;

Explicação:
O duodecil sulfato de sódio (SDS) é um agente caotrópico.

6.
Uma técnica de grande utilidade e resolução utilizada em laboratórios de bioquímica e biologia molecular é a eletroforese bidimensional. Sobre essa técnica, assinale V para verdadeiro e F para falso nas afirmativas a seguir:
( ) Em uma das dimensões da eletroforese bidimensional, as moléculas são separadas em função de seus pontos isoelétricos.
( ) Em uma das dimensões da eletroforese bidimensional, as moléculas são separadas de acordo com sua massa molecular.
( ) Proteínas isoladas por essa técnica podem ser, a seguir, analisadas por espectrofotometria de massas, permitindo que sejam calculadas as massas moleculares de peptídeos derivados.
( ) Não é possível realizar western blotting a partir de um gel bidimensional.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA de V e F de cima para baixo:

V-V-V-V

F-V-V-F

V-V-F-V

F-V-F-V

V-V-V-F

Explicação:
A eletroforese 2D também pode ser utilizada para separação de proteinas que precede o Western Blot

7.
(Unesp, 2012): A eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante (contendo Dodecil Sulfato de Sódio ou SDS) é uma técnica bastante utilizada em laboratório de biologia molecular para separação de proteínas. Assim, é correto afirmar que, na eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para separação de proteínas:

quanto maior a carga negativa da proteína mais rápido ocorrerá a migração no gel;

as proteínas sempre migrarão para o polo positivo quando realizada a pH 8,6;

as proteínas maiores migrarão mais rápido que as proteínas menores.

a velocidade da migração dessa proteína no gel não sofre ação da concentração do gel de poliacrilamida;

as proteínas sempre migrarão para o polo negativo quando realizada a pH 8,6;

Explicação:
O SDS é um detergente aniônico que irá conferir carga elétrica negativa às proteínas. Dessa forma, durante a eletroforese, as proteínas migrarão em direção ao polo positivo de acordo com seus respectivos pesos moleculares.

1.
(INSTITUTO AOCP, 2018): Considerando as técnicas de sequenciamento do DNA, a respeito das características desse tipo de procedimento, assinale a alternativa correta:

O método de dideoxinucleotídeos utiliza o grupo 3-hidroxila;

A presença de ddNTPs na reação dispensa a adição de desoxinucleotídeos trifosfato normais;

Os fragmentos resultantes são separados eletroforeticamente e submetidos à autorradiografia;

O método Sanger também é conhecido como sequenciamento de nova geração;

A utilização de vetores plasmidiais, em técnicas de subclonagem de fragmentos de DNA, é denominada "pirossequenciamento".

Explicação:
Devido à ausência do grupamento hidroxila no carbono 3´ da pentose, os nucleotídeos modificados não possuem capacidade de fazer ligação química com um próximo nucleotídeo. O sequenciamento de nova geração corresponde a uma metodologia mais moderna de sequenciamento genômico, de alta vazão, ao contrário do método de Sanger. A presença de ddNTPs não dispensa a necessidade de dNTPs, uma vez que, é necessário produzir moléculas de DNA com diferentes extensões para se elucidar a ordem das bases nitrogenadas. Se apenas ddNTPs estivessem presentes, as moléculas seriam abortadas precocemente, tão logo um ddNTP fosse incorporado. As reações de pirosequenciamento dispensam a necessidade de clonagem molecular.

2.
(Adaptado de CESPE, 2018): Complete as lacunas do texto a seguir, a respeito do projeto genoma (humano e outros) e às estratégias de sequenciamento disponíveis:
"No projeto genoma humano, foi empregado o método de Sanger, que adicionava ____________________ modificados, os didesoxirribonucleotídeos, para ____________________ o crescimento de um fragmento de DNA em replicação pela ____________________."

Nucleotídeos/ impedir/ DNA polimerase;

Nucleotídeos/ delimitar/ DNA ligase.

Nucleotídeos/ estimular/ RNA polimerase;

Primers/ estimular/ RNA polimerase;

Primers/ impedir/ DNA polimerase;

Explicação:
O método de Sanger se baseia na interrupção da cadeia nucleotídica em crescimento pela DNA polimerase, através da incorporação de nucleotídeos modificados, os quais não permitem ligações químicas.

3.
(Adaptada de CESPE, 2013): Considerando que o esquema abaixo apresenta o sequenciamento de DNA, processo responsável por uma verdadeira revolução nas ciências biológicas, avalie o gel abaixo:
Pelo perfil apresentado no gel, a ordem correta de bases nitrogenadas do fragmento sequenciado é:

5´-TGCCAT-3´

5´-TACCGT-3´

5´-ATGGCA-3´

5´-ACGGTA-3´

Nenhuma das alternativas acima.

Explicação:
Para elucidar a ordem das bases nitrogenadas, o gel deve ser lido de baixo para cima, ou seja, do menor fragmento para o maior fragmento. Além disso, o resultado respeita o sentido 5´-3´ de polimerização.

4.
(Adaptada de CESPE, 2018): Complete as lacunas do texto a seguir, a respeito do projeto genoma (humano e outros) e às estratégias de sequenciamento disponíveis:
"As técnicas de sequenciamento genômico se baseiam na _______________ da dupla fita de _______________ em moléculas de fita simples."

Transcrição/ DNA;

Tradução/ DNA;

Nenhuma das alternativas acima.

Transcrição/RNA;

Tradução/RNA;

Explicação:
As técnicas de sequenciamento visam elucidar a ordem das bases nitrogenadas que compõem as moléculas de DNA.

1.
(UFAM, 2016): Quando comparada com a clonagem molecular em células hospedeiras, a PCR possui muitas vantagens. Sob essa perspectiva, qual das alternativas a seguir é incorreta?

A PCR é uma técnica muito versátil e, atualmente, proporciona a amplificação de até 20 Kb de DNA. Na clonagem, utilizando-se vetores plasmidiais, pode haver limitações quanto ao tamanho do inserto a ser clonado;

Velocidade do procedimento: a PCR pode durar algumas horas, enquanto o procedimento de clonagem molecular é realizado em um ou mais dias;

A PCR gera fragmentos de DNA bem maiores que na clonagem molecular, além de possuir uma fidelidade mais alta no processo;

Por ser um processo automatizado, a PCR é mais simples de ser conduzida;

A PCR pode ser utilizada para amplificar DNA de material degradado, muito útil em investigações forenses.

Explicação:
Um produto de PCR, após amplificação, pode ser clonado em vetor. O parâmetro "tamanho do inserto" pode ser ajustado de acordo com os diferentes vetores de clonagem possíveis, adequados para menores ou maiores extensões. O ensaio da PCR não está livre de incorporação de erros, uma vez que a enzima está submetida a vários ciclos de oscilação de temperatura em um curto espaço de tempo.

2.
(FIOCRUZ, 2010): São características de um bom vetor de clonagem, um plasmídeo que contém as seguintes características, exceto:

presença dos mesmos sinais de início de transcrição e de tradução entre procariotos e eucariotos;

possuir replicação independente do DNA genômico da célula. Alem disso, eles devem ser facilmente introduzidos em bactérias que não os contenham por meio de métodos químicos ou métodos físicos de transformação.

presença de sítios únicos de clivagem para enzimas de restrição. O conjunto destes sítios é denominado de Sítio Múltiplo de Clonagem (SMC) e é o local onde o inserto é incorporado ao vetor de clonagem;

presença de um gene que codifica um produto que permita a distinção entre a célula com plasmídio de uma célula sem plasmídio, como por exemplo, um gene para resistência a antibióticos;

presença de uma origem de replicação, ou seja, uma seqüência de DNA que permita que o vetor seja replicado na célula hospedeira;

Explicação:
Os sinais de início de transcrição e tradução são diferentes entre procariotos e eucariotos.

3.
(UFAM, 2016): A clonagem molecular é caracterizada pela produção de muitas cópias de um fragmento de DNA alvo (amplificação), por meio da tecnologia do DNA recombinante. Sobre essa técnica, são feitas as seguintes afirmativas:
I. Um vetor de clonagem molecular pode conter mais de um marcador de seleção;
II. A região do gene repórter deve conter sítios de restrição enzimática para clonagem;
III. Em uma placa de Petri, o número de clones recombinantes não excede o número de clones não recombinantes;
IV. Uma das características exigidas para a clonagem molecular é que as células utilizadas como hospedeiras
sejam organismos não patogênicos;
Assinale a alternativa correta:

Somente as afirmativas I,II e IV estão corretas;

Somente as afirmativas I, II e III estão corretas;

Todas as afirmativas estão corretas.

Somente as afirmativas II e III estão corretas;

Somente as afirmativas I e III estão corretas;

Explicação:
O processo de clonagem pressupõe a existência de falhas nos processos de clonagem em vetor e transformação em organismos competentes. Dessa forma, as concentrações de vetor com inserto e bactéria são otimizadas de forma a otimizar a produção de clones recombinantes.

4.
(FIOCRUZ, 2010): Plasmídeos são moléculas circulares de DNA encontrados em bactérias. Elas são utilizadas como vetores para a clonagem de genes e, portanto fundamentais para o estudo de genes.
Sobre as características típicas encontradas em plasmídeos utilizados para clonagem, assinale a alternativa incorreta:

O plasmídeo usualmente tem sítio múltiplo de clonagem que permite a utilização de várias enzimas de restrição durante a clonagem;

O plasmídeo precisa ter uma origem de replicação, que permite a multiplicação independente do DNA bacteriano;

O plasmídeo precisa ter mais de 10.000 pb de forma que seja estável na bactéria;

O plasmídeo usualmente tem um sítio para anelamento de iniciadores de PCR para sequenciamento M13 próximo a sítio de inserção.

O plasmídeo precisa ter um marcador de seleção que confere resistência a bactéria a um antibiótico específico;

Explicação:
Os plasmídeos são vetores ideais para insertos de DNA menores.

1.
(FMTM, MG): Dois homens, P-I e P-II, disputam a paternidade de uma criança C, filha da mulher M. Diante disso, foi pedido o exame de DNA dos envolvidos. O resultado do teste revelou os seguintes padrões:
Acerca dos resultados obtidos foram feitas as seguintes afirmações:
I. P-II pode ser o pai da criança, pois há maior quantidade de faixas coincidentes com o padrão da criança;
II. as faixas de números 3, 9, 10, 14, e 17 correspondem ao DNA que a criança recebeu da mãe;
III. não é possível excluir a possibilidade de P-I ser o pai da criança.
Está correto o contido apenas em:

I e II;

II;

I e III;

I;

II e III.

Explicação:
É possível excluir a paternidade de P-I à medida em que, após excluir as bandas que têm correspondência com a mãe, P-I e a criança não possuem bandas compatíveis.

2.
(FUVEST, SP): "Teste de DNA confirma paternidade de bebê perdido no tsunami. Um casal do Sri Lanka que alegava ser os pais de um bebê encontrado após o tsunami que atingiu a Ásia, em dezembro, obteve a confirmação do fato através de um exame de DNA. O menino, que ficou conhecido como "Bebê 81" por ser o 81º sobrevivente a dar entrada no hospital de Kalmunai, era reivindicado por nove casais diferentes." Folha online, 14/02/2005 (adaptado).
Algumas regiões do DNA são seqüências curtas de bases nitrogenadas que se repetem no genoma, e o número de repetições dessas regiões varia entre as pessoas. Existem procedimentos que permitem visualizar essa variabilidade, revelando padrões de fragmentos de DNA que são ¿uma impressão digital molecular¿. Não existem duas pessoas com o mesmo padrão de fragmentos com exceção dos gêmeos monozigóticos. Metade dos fragmentos de DNA de uma pessoa é herdada de sua mãe e metade, de seu pai.
Com base nos padrões de fragmentos de DNA representados abaixo, qual dos casais pode ser considerado como pais biológicos do Bebê 81?

Casal B;

Casal E.

Casal D;

Casal A;

Casal C;

Explicação:
Para todos os outros supostos casais, sempre encontraremos alguma banda no bebê 81 para a qual não haverá correspondência nem materna nem paterna.

3.
(PUC-Rio, 2015): A figura abaixo representa o resultado de um teste de paternidade. Este teste baseia-se na identificação de marcadores genéticos compartilhados ou não por pai, mãe e filhos.
Considerando a figura, não é correto afirmar que:

IV e I são irmãos gêmeos monozigóticos.

II não é filho deste pai;

V não pode ser filho biológico deste casal;

I é filho biológico do casal;

III é irmão biológico de I;

Explicação:
V pode ser filho biológico do casal, dado que metade das suas bandas apresentam compatibilidade com a mãe e, a outra metade, compatibilidade com o pai.

4.
(UEL, 2017): O teste de DNA abaixo foi solicitado por uma mulher que queria confirmar a paternidade dos filhos. Ela levou ao laboratório amostras de cabelos dela, do marido, dos dois filhos e de um outro homem que poderia ser o pai. Os resultados obtidos estão mostrados na figura abaixo:
A partir dos resultados podemos obter as seguintes conclusões, exceto:

o filho 2 não é dessa mãe;

o filho 2 é do marido;

o marido e o outro homem não são irmãos.

o filho 1 compartilha metade de seu material genético com a mãe;

o filho 1 é do outro homem;

Explicação:
Não podemos excluir a maternidade nesse caso, pois metade das bandas do filho 2 apresenta compatibilidade com a mãe em questão.

1.
(Enade, 2016): Desenvolvida recentemente, a técnica de edição de genoma denominada CRISPR/Cas9 mostra-se bastante promissora nas áreas de Biotecnologia e Medicina. Por engenharia genética, é possível direcionar o sistema CRISPR/Cas9 para clivar o DNA em um ponto específico dos genomas de vírus, de plantas, de fungos e de animais, inclusive de embriões humanos, o que tem gerado discussões a respeito dos aspectos éticos de sua utilização.
(YANAGUI, K. Novas tecnologias, novos desafios. Ciência e Cultura, São Paulo, v. 68, n. 3, set. 2016 (adaptado)).
Em relação às questões bioéticas envolvidas na edição genética, avalie as afirmações a seguir.
I. No Brasil, não é permitido o uso de técnicas para a edição genética de embriões humanos; os estudos científicos nessa área devem ter como objetivo tratar e curar problemas de saúde e não alterar o genoma ou realizar clonagens;
II. A despeito do caráter promissor da edição genética no tratamento de doenças graves, as intervenções feitas por meio da técnica de CRISPR/Cas9 em embriões podem ser passadas às gerações futuras, por esse motivo, a prática é considerada eugenista, o que ensejou a proibição de estudos desse tipo em embriões humanos em alguns países;
III. Em alguns países, inclusive no Brasil, são permitidas por lei a manipulação e a modificação genética de embriões humanos para fins de pesquisa, entretanto, esses embriões devem ser descartados dentro do prazo de duas semanas.
É correto o que se afirma em:

I, II e III.

II e III, apenas;

I, apenas;

I e II, apenas;

III, apenas;

Explicação:
No Brasil, a legislação veta qualquer experimento que envolva a manipulação genética de embriões humanos. A Lei de Biossegurança (11.105/2005) proíbe em seu artigo 6, inciso III, a ¿engenharia genética em célula germinal humana, zigoto humano e embrião humano¿.

2.
(UNIFESP, 2017): Por que a alteração na sequência de DNA provocada pelo CRISPR-Cas9 pode inativar um gene?

Porque o RNA transcrito a partir dessa sequência também será alterado;

CRISPR-Cas9 é incapaz de inativar um gene.

Porque o DNA alterado não será transcrito;

Porque o RNA transcrito não será traduzido;

Porque o RNA transcrito tem uma meia vida menor do que o RNA original;

Explicação:
De acordo com o dogma da biologia molecular, a alteração na sequência de DNA implicará na alteração do RNA transcrito. Consequentemente, a proteína traduzida a partir desse RNAm pode não ser funcional, ou seja, o gene pode ser inativado.

3.
(Adaptado de UNIFESP, 2017): Considere uma infecção hipotética de uma bactéria por um vírus
patogênico. Supondo que no DNA viral exista a sequência de bases nitrogenadas CCCTATAGGG, qual será a sequência de bases no RNA-guia associado à Cas9 bacteriana?

CCCUAUAGGG;

CCCTCTCGGG.

GGGATATCCC;

CCCTATAGGG;

GGGAUAUCCC;

Explicação:
A sequência de bases do RNA-guia associado deve ser complementar ao DNA que será inativado.

4.
(IADES, 2018): Avanços recentes em engenharia genética dão início a uma revolução; cientistas são capazes de manipular DNA humano de forma prática e barata, abrindo portas para uma gama de novos estudos genéticos nas áreas de medicina e de biotecnologia. O sistema CRISPR-Cas9 constitui uma maquinaria celular que é natural em diversos organismos vivos e oferece um enorme potencial, desde a cura de doenças causadas por mutações e danos no DNA até a criação de fármacos com organismos geneticamente modificados, entre outras aplicações em biotecnologia. Em relação ao sistema CRISPR-Cas9, é correto afirmar que:

corresponde a pequenas moléculas de RNA associadas a uma enzima de restrição, com capacidade de reconhecer e clivar sequências específicas de DNA exógeno.

isola genes individuais do DNA humano e os insere em DNA plasmidial;

visualiza antígenos nos tecidos ou em suspensões celulares utilizando corantes fluorescentes;

identifica e quantifica moléculas de RNA em uma amostra de interesse, para estudo de expressão gênica;

amplifica em milhares de vezes uma região específica da molécula de DNA;

Explicação:
A técnica de CRISPR-Cas9 isoladamente não é capaz de quantificar ou amplificar moléculas de ácido nucleico. Além disso, não é utilizada para fins de DNA recombinante ou ensaios baseados em detecção de proteínas.
1a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

São exemplos de ácidos nucleicos:

DNA e RNA;

Adenina e guanina;

Timina e uracila.

Monossacarídeos e dissacarídeos;

Proteínas e lipídios;
Respondido em 27/09/2020 19:35:44

Explicação:
As demais alternativas fornecem exemplos de outras macromoléculas ou bases nitrogenadas.

2a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

A técnica de PCR (reação em cadeia da DNA polimerase) é utilizada com o objetivo de se obter várias cópias (amplificação) de um fragmento específico de DNA. Entretanto, um dos problemas que pode ocorrer durante a PCR é a amplificação inesperada de fragmento(s) inespecífico(s). Dados os fatores que influenciam nesse tipo de problema, I. Sequência de nucleotídeos dos primers. II. Temperatura de anelamento dos primers. III. Concentração do DNA template. IV. Concentração dos primers.
Verifica-se que está(ão) correto(s):

D) I, II e IV, apenas.

A) I, apenas.

C) III e IV, apenas.
E) I, II, III e IV.

B) II e III, apenas.
Respondido em 27/09/2020 19:39:26

Explicação:
Todos os fatores influenciam.

3a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(Prefeitura de Barra Mansa, RJ, 2010) - Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. Em relação à eletroforese em gel é correto afirmar que:

após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluoresce (torna-se visível) vivamente em contato com a luz infra-vermelha.

na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA positivamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;

Na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;

as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção superior do gel e as de maior massa na porção inferior;
as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de maior massa situam-se na porção superior do gel e as de menor massa na região inferior;
Respondido em 27/09/2020 19:42:54

Explicação:
O DNA possui carga negativa, o que faz com que a migração ocorra do polo negativo (repulsão) em direção ao polo positivo (atração). A facilidade com que isso ocorre depende do tamanho das partículas. As maiores ficam atrasadas na trama do polímero, e são retardadas na migração, fazendo com que ocupem posições superiores no gel. Para a revelação do resultado, é necessário excitar o brometo de etídeo com luz UV.

4a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

A PCR em Tempo Real também denominada qPCR, foi descrita pela primeira vez em 1993 por Higuchi e seus colaboradores. Sobre esse tema, marque V para as afirmativas verdadeiras e F para as falsas.
( ) Ela é uma variante da reação de PCR convencional, pois a amplificação e a detecção ocorrem simultaneamente, com possibilidade de gerar resultados quantitativos com maior precisão.
( ) A quantificação na PCR em Tempo Real é mensurada pela quantidade de produto amplificado durante cada ciclo (através da fluorescência emitida). Essa metodologia utiliza um equipamento com sistema de monitoramento da emissão de fluorescência.
( ) Na PCR convencional, é necessária a preparação de gel de agarose para visualização; na PCR em tempo real não ocorre manipulação pós-PCR.
Assinale a alternativa correta.

F, F, V

F, V, F

F, F, F

V, F, F
V, V, V
Respondido em 27/09/2020 19:52:02

Explicação:
V, V, V

5a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(FGV, 2010): Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:

uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A";

uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".
uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo;

uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A";

a obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A";
Respondido em 27/09/2020 19:54:31

Explicação:
A obtenção de produtos de PCR amplificados utilizando-se iniciadores para tox apenas detecta a presença do gene, assim como a hibridização por Southern Blot. Para avaliação da expressão gênica por hibridização, seria necessário realizar a técnica de Northern Blot. Para avaliação da tradução do gene por técnica de hibridização, seria necessária a realização de Western Blot.

6a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(Unesp, 2012): A eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante (contendo Dodecil Sulfato de Sódio ou SDS) é uma técnica bastante utilizada em laboratório de biologia molecular para separação de proteínas. Assim, é correto afirmar que, na eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para separação de proteínas:

quanto maior a carga negativa da proteína mais rápido ocorrerá a migração no gel;

as proteínas sempre migrarão para o polo negativo quando realizada a pH 8,6;

a velocidade da migração dessa proteína no gel não sofre ação da concentração do gel de poliacrilamida;
as proteínas sempre migrarão para o polo positivo quando realizada a pH 8,6;

as proteínas maiores migrarão mais rápido que as proteínas menores.
Respondido em 27/09/2020 20:02:12

Explicação:
O SDS é um detergente aniônico que irá conferir carga elétrica negativa às proteínas. Dessa forma, durante a eletroforese, as proteínas migrarão em direção
ao polo positivo de acordo com seus respectivos pesos moleculares.

7a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(Adaptada de CESPE, 2018): Complete as lacunas do texto a seguir, a respeito do projeto genoma (humano e outros) e às estratégias de sequenciamento disponíveis:
"As técnicas de sequenciamento genômico se baseiam na _______________ da dupla fita de _______________ em moléculas de fita simples."

Tradução/RNA;

Tradução/ DNA;
Nenhuma das alternativas acima.

Transcrição/RNA;

Transcrição/ DNA;
Respondido em 27/09/2020 20:04:23

Explicação:
As técnicas de sequenciamento visam elucidar a ordem das bases nitrogenadas que compõem as moléculas de DNA.

8a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(UFAM, 2016): Quando comparada com a clonagem molecular em células hospedeiras, a PCR possui muitas vantagens. Sob essa perspectiva, qual das alternativas a seguir é incorreta?

A PCR gera fragmentos de DNA bem maiores que na clonagem molecular, além de possuir uma fidelidade mais alta no processo;

A PCR pode ser utilizada para amplificar DNA de material degradado, muito útil em investigações forenses.

Velocidade do procedimento: a PCR pode durar algumas horas, enquanto o procedimento de clonagem molecular é realizado em um ou mais dias;

Por ser um processo automatizado, a PCR é mais simples de ser conduzida;

A PCR é uma técnica muito versátil e, atualmente, proporciona a amplificação de até 20 Kb de DNA. Na clonagem, utilizando-se vetores plasmidiais, pode haver limitações quanto ao tamanho do inserto a ser clonado;
Respondido em 27/09/2020 20:07:03

Explicação:
Um produto de PCR, após amplificação, pode ser clonado em vetor. O parâmetro "tamanho do inserto" pode ser ajustado de acordo com os diferentes vetores de clonagem possíveis, adequados para menores ou maiores extensões. O ensaio da PCR não está livre de incorporação de erros, uma vez que a enzima está submetida a vários ciclos de oscilação de temperatura em um curto espaço de tempo.

9a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(PUC-Rio, 2015): A figura abaixo representa o resultado de um teste de paternidade. Este teste baseia-se na identificação de marcadores genéticos compartilhados ou não por pai, mãe e filhos.
Considerando a figura, não é correto afirmar que:

I é filho biológico do casal;

II não é filho deste pai;
V não pode ser filho biológico deste casal;

IV e I são irmãos gêmeos monozigóticos.

III é irmão biológico de I;
Respondido em 27/09/2020 20:08:29

Explicação:
V pode ser filho biológico do casal, dado que metade das suas bandas apresentam compatibilidade com a mãe e, a outra metade, compatibilidade com o pai.

10a
Questão
Acerto: 1,0 / 1,0

(Enade, 2016): Desenvolvida recentemente, a técnica de edição de genoma denominada CRISPR/Cas9 mostra-se bastante promissora nas áreas de Biotecnologia e Medicina. Por engenharia genética, é possível direcionar o sistema CRISPR/Cas9 para clivar o DNA em um ponto específico dos genomas de vírus, de plantas, de fungos e de animais, inclusive de embriões humanos, o que tem gerado discussões a respeito dos aspectos éticos de sua utilização.
(YANAGUI, K. Novas tecnologias, novos desafios. Ciência e Cultura, São Paulo, v. 68, n. 3, set. 2016 (adaptado)).
Em relação às questões bioéticas envolvidas na edição genética, avalie as afirmações a seguir.
I. No Brasil, não é permitido o uso de técnicas para a edição genética de embriões humanos; os estudos científicos nessa área devem ter como objetivo tratar e curar problemas de saúde e não alterar o genoma ou realizar clonagens;
II. A despeito do caráter promissor da edição genética no tratamento de doenças graves, as intervenções feitas por meio da técnica de CRISPR/Cas9 em embriões podem ser passadas às gerações futuras, por esse motivo, a prática é considerada eugenista, o que ensejou a proibição de estudos desse tipo em embriões humanos em alguns países;
III. Em alguns países, inclusive no Brasil, são permitidas por lei a manipulação e a modificação genética de embriões humanos para fins de pesquisa, entretanto, esses embriões devem ser descartados dentro do prazo de duas semanas.
É correto o que se afirma em:

I e II, apenas;

II e III, apenas;

I, apenas;

III, apenas;

I, II e III.
Respondido em 27/09/2020 20:09:51

Explicação:
No Brasil, a legislação veta qualquer experimento que envolva a manipulação genética de embriões humanos. A Lei de Biossegurança (11.105/2005) proíbe em seu artigo 6, inciso III, a ¿engenharia genética em célula germinal humana, zigoto humano e embrião humano¿.