prova 1 de biomolecular

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O qPCR (PCR em tempo real) utiliza corantes fluorescentes ou sondas específicas, que emitem fluorescência quando se encontram ligados ou intercalados à fita de DNA no meio de reação da PCR. Considerando esse fator, a fluorescência emita, é proporcional à quantidade de material disponível para iniciar a amplificação. Sobre os parâmetros para quantificação do qPCR, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- O threshold, também conhecido como linha de corte, demonstra o momento em que a fluorescência apresentada está livre de ruídos, sendo essencialmente a representação da amplificação da amostra teste.
PORQUE
II- O equipamento é capaz de determinar em que momento a fluorescência detectada é proveniente apenas das amostras que estão sendo amplificadas e, assim, determinar a linha de corte.
Assinale a alternativa CORRETA:
	 a)
	A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
	 b)
	As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
	 c)
	As asserções I e II são proposições falsas.
	 d)
	As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
	 *
	Observação: A questão número 1 foi Cancelada.
	2.
	As bibliotecas de DNA e cDNA são essenciais para manter e replicar um fragmento clonado por tempo indeterminado. Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Biblioteca de cDNA.
II- Biblioteca de DNA.
III- Hibridização em colônia.
(    ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas específicas em meio de cultivo sólido.
(    ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação, isolamento e sequenciamento do genoma.
(    ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico, relacionado sempre a sua função.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
	 a)
	III - II - I.
	 b)
	I - II - III.
	 c)
	I - III - II.
	 d)
	II - I - III.
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	3.
	A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) se refere à replicação in vitro de um fragmento de DNA. Sobre o PCR, assinale a alternativa CORRETA:
	 a)
	O processo do PCR não necessita da utilização de nucleotídeos.
	 b)
	A ligação dos primers à fita de DNA é denominado como desnaturação.
	 c)
	O processo de replicação in vitro, depende do uso de primers (oligonucleotídeos sintéticos), com sequências de 18 a 22 nucleotídeos, que seja complementar ao gene de interesse.
	 d)
	A enzima DNA polimerase humana é uma das principais responsáveis pelo sucesso da técnica in vitro.
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	4.
	Para detecção do DNA em bibliotecas de DNA, uma membrana é colocada em contato com as colônias na placa logo após o crescimento das colônias bacterianas em placas de cultivo contendo meio sólido. Algumas células irão se aderir à membrana, formando uma impressão das colônias presentes na placa. Em seguida, as células aderidas sofrem lise celular, a fim de liberar o DNA, que permanece aderido à membrana. Por fim, a membrana é incubada com sondas de hibridização marcadas, complementares à porção do gene de interesse, permitindo a visualização da posição dos clones que contêm o fragmento de interesse. Sobre a técnica exposta, assinale a alternativa CORRETA:
	 a)
	Northen-blot.
	 b)
	Southern-blot.
	 c)
	Hibridização in situ.
	 d)
	Hibridização em colônia.
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	5.
	O mais recente avanço no campo de sequenciamento de DNA foi o desenvolvimento de plataformas portáteis capazes de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos. Um exemplo dessas plataformas é a MinION. Sobre a plataforma MinION, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para que seja realizado o sequenciamento por meio da plataforma MinION, as amostras a serem sequenciadas são ligadas a enzimas de processamento. Essas enzimas induzem o fragmento de DNA a passar pelo nano poro, onde as variações da corrente elétrica são detectadas.
PORQUE
II- Sendo conhecidas as variações características de cada nucleotídeo, a sequência de nucleotídeos é formada rapidamente.
Assinale a alternativa CORRETA:
	 a)
	As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
	 b)
	A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
	 c)
	As asserções I e II são proposições falsas.
	 d)
	As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
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	6.
	O gráfico a seguir ilustra uma curva de amplificação da PCR em tempo real. De acordo com a interpretação do gráfico, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
(    ) A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct.
(    ) A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a quantidade de material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse.
(    ) A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade intermediária de  amostra, quando comparadas às amostras A e C.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
	
	 a)
	V - F - F.
	 b)
	V - V - F.
	 c)
	F - F - V.
	 d)
	V - F - V.
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	7.
	O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisa de expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR. Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA complementar (cDNA).
II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando como molde uma fita simples de RNA.
III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de cDNA.
Assinale a alternativa CORRETA:
	 a)
	As sentenças I e II estão corretas.
	 b)
	As sentenças I e III estão corretas.
	 c)
	Somente a sentença III está correta.
	 d)
	Somente a sentença II está correta.
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	8.
	Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica. De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
(    ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese.
(    ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita.
(    ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
	 a)
	V - F - V.
	 b)
	V - V - F.
	 c)
	F - F - V.
	 d)
	V - F - F.
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	9.
	As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo com essas enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
(    ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar o DNA em regiões específicas, permitindo a manipulação do DNA.
(    ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e purificada a partir de colônias dessas bactérias.
(    ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões de clivagem aleatórias de 4 a 8 nucleotídeos.Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
	 a)
	V - F - F.
	 b)
	V - V - F.
	 c)
	F - F - V.
	 d)
	F - V - F.
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	10.
	Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com enzimas de restrição e clonagem em vetor. Com base nas etapas para construção de uma biblioteca de DNA, ordene os itens a seguir:
I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da DNA ligase.
II- Clivado do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares de fragmentos de DNA.
III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos diferentes fragmentos.
IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um organismo.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
	 a)
	I - IV - III - II.
	 b)
	I - III - II - IV.
	 c)
	IV - II - I - III.
	 d)
	IV - II - III - I.
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