Osmose e hemólise na prática

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Biofísica 
Osmose e hemólise na prática 
Prof.ª Dr.ª Thaís Dalzochio 
Introdução 
 
As hemácias, ou glóbulos vermelhos, são células anucleadas, metabolicamente 
ativas e capazes de sintetizar ATP por via anaeróbica. O ATP é utilizado, entre outros 
sistemas, pela enzima ATPase Na-K, na membrana plasmática, como fonte de energia 
para o bombeamento do sódio do interior da célula para o meio extracelular e de 
potássio, em sentido contrário. Este transporte é responsável pela manutenção de uma 
composição iônica intracelular diferente da do fluido extracelular e, indiretamente, pela 
regulação do volume celular. As hemácias se encontram em equilíbrio osmótico com o 
meio extracelular. Alterações da pressão osmótica do fluido extracelular, com solutos 
impermeantes, levam a ajustes rápidos de volume celular que ocorrem em segundos, 
decorrentes de entrada e saída de água da célula. 
As hemácias, ao microscópio, se apresentam como discos bicôncavos. A forma 
bicôncava depende de dois fatores principais: a) natureza da membrana plasmática, em 
particular de seus constituintes, dentre os quais o colesterol e proteínas contráteis; b) 
regulação do volume celular. A hemácia se comporta como um micro osmômetro, pelo 
fato de sua membrana ser permeável à água e pouco permeável a solutos, 
principalmente iônicos, e por sua impermeabilidade a cátions. Solutos não iônicos 
hidrossolúveis atravessam a membrana com relativa facilidade dependendo do tamanho 
molecular. 
Variações na osmolaridade da solução externa levam a alterações do volume 
das hemácias devido ao movimento osmótico da água através da membrana 
plasmática, até que um novo equilíbrio osmótico seja atingido. A forma bicôncava 
permite às hemácias variarem de volume, principalmente aumentarem de volume, sem 
estiramento da membrana. Ao ultrapassar um volume crítico, quando a hemácia atinge 
a forma esférica, ocorre rompimento da membrana ou hemólise, com liberação do 
conteúdo celular (particularmente hemoglobina) para o meio extracelular. 
 
Objetivo 
 
Demonstrar aspectos relacionados ao movimento de água na membrana celular 
de eritrócitos. 
Execução 
 
1) Prepare as seguintes soluções: NaCl 5% e NaCl 0,9%. 
 
2) Enumere os tubos de ensaio de 1 a 3 e pipete as soluções conforme abaixo. 
 
Tubo 
1 5 mL água destilada Meio hipotônico 
2 5 mL de NaCl 5% Meio hipertônico 
3 5 mL de NaCl 0,9% Meio isotônico 
 
3) Em seguida, adicione duas gotas de sangue com a pipeta Pasteur em cada um 
dos tubos, cubra os tubos com plástico PVC e agite (evitar formação de bolhas) 
e observe qual tubo se apresenta mais turvo e mais transparente. 
✓ Nessa etapa, observa-se a turbidez está relacionada ao número e tamanho de 
partículas suspensas. Enquanto houver turbidez significa que há partículas 
suspensas – hemácias íntegras que dificultam a passagem da luz pois absorvem 
e refletem parte dela. Logo, quanto maior o número de hemácias íntegras, maior 
será a turbidez do tubo. Enquanto houver hemácias suspensas na solução 
haverá turbidez. Observa-se maior turbidez no tubo 3 (NaCl 0,9%). 
✓ Por outro lado, a hemólise determina o grau de transparência (grau de turbidez 
é inversamente proporcional ao grau de transparência). Quanto menor a 
concentração da solução do tubo, mais hipotônica ela fica em relação às 
hemácias, maior é a osmose e mais água entra nas células. Mais células 
hemolisam e, portanto, há maior transparência. Neste caso, observa-se maior 
transparência no tubo 1 (água destilada). 
 
Figura 1: tubo da esquerda corresponde ao tubo 3 enquanto que o da direita 
corresponde ao tubo 1. 
 
4) Coloque uma gota de cada uma das soluções sobre três lâminas diferentes 
(identifique-as), cubra com lamínula e observe ao microscópio. 
Nesta etapa, é possível verificar as alterações morfológicas decorrentes das 
diferentes soluções utilizadas. Ilustrações destas podem ser verificadas no 
material da aula 3. 
 
5) Centrifugue os tubos por 5 minutos a 2500 rotações por minuto e observe a 
formação de um botão vermelho ao fundo do tubo. 
A diminuição do botão vermelho e coloração palha/avermelhada indicam que as 
hemácias hemolisaram, ficando o pigmento hemoglobina disperso no líquido. 
 
 
 
Responda às questões: 
 
✓ Conforme o experimento exposto, em qual tubo ocorreu hemólise e em qual 
ocorreu plasmólise? Comente. 
✓ Como se chama o eritrócito com deformações quando em meio hipertônico? 
Explique este processo. 
✓ Quanto à morfologia da hemácia e formação de um botão vermelho no fundo do 
tubo, comente sobre o que ocorreu no tubo 3 (NaCl 0,9%). 
✓ Identifique as causas de hemólise in vivo e in vitro. Como pode-se diferencia-
las?