No imunoensaio ELISA, a marcação da molécula de interesse ocorre através da adição de um anticorpo conjugado a uma enzima. Esse anticorpo, quando adicionado ao ensaio, se liga ao antígeno, anticorpo ou ao complexo antígeno-anticorpo presente na amostra do paciente. A enzima ligada ao anticorpo é capaz de reagir com um substrato específico, resultando em uma mudança de cor na solução. Dessa forma, a presença da molécula de interesse pode ser detectada visualmente ou por meio de um leitor de ELISA.
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