A função do cristal violeta na coloração de Gram é dar cor às bactérias, tanto as gram positivas quanto as gram negativas. O cristal violeta é o primeiro corante utilizado na técnica de coloração de Gram e é responsável por corar todas as células bacterianas presentes na lâmina. Após a aplicação do cristal violeta, é realizada a etapa de fixação com o lugol, que ajuda a fixar o corante nas células. Em seguida, é feita a decoloração com álcool-acetona, que remove o excesso de corante das bactérias gram negativas, mas não das gram positivas. Por fim, é aplicado o corante de contraste, a safranina, que cora as bactérias gram negativas que perderam o cristal violeta e as bactérias gram positivas que mantiveram o cristal violeta.
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