Durante uma pesquisa, desenvolvida por sua equipe de estudos de expressão gênica, foi encontrado uma sequência de DNA (gene) que codifica 8 aminoácidos, que faz parte da estrutura quaternária de uma proteína. No entanto, essa proteína está se apresentando mutante, com apenas 7 primeiros aminoácidos da proteína.
A sequência molde de DNA, que expressa a proteína normal está descrita abaixo:
3’ CCC TAC CAG CGT ACG GCG CCA GCA CTC ATC CCC 5’
Atividade:
a) Conhecendo a fita molde do gene do DNA (apresentado anteriormente), realize a transcrição e tradução e apresente a sequência normal de aminoácidos encontrados nessa proteína. Para realizar a tradução, utilize a tabela de código genético disponível abaixo.
b) Sabendo que uma mutação está ocorrendo no gene que codifica essa proteína, e que a proteína mutante apresenta apenas os 7 primeiros aminoácidos da proteína normal, e ainda, que o ribossomo finaliza a tradução ao encontrar o stop códon (códon de finalização), apresente em qual códon do RNAm está ocorrendo mutação? Qual aminoácido está faltando nessa proteína?
c) Sabendo do local da mutação e a sequência de aminoácidos da proteína mutante, explique o motivo do ribossomo continuar a iniciar a tradução do RNAm.
Obs.: lembre-se que a síntese de proteína inicia no primeiro códon de iniciação e finaliza no primeiro códon de finalização.
Para realizar a tradução do RNAm, utilize a tabela de código genético abaixo.
A sequência de DNA fornecida é:
3’ TTT TAC CAG TAC CGT ACG GCG TTA CCA GCA CTC ATC CCC 5’
Para determinar a sequência de RNA mensageiro (mRNA) transcrita a partir dessa sequência de DNA, precisamos fazer o pareamento de bases complementares. No RNA, a base timina (T) é substituída pela base uracila (U). Portanto, a sequência de mRNA correspondente será:
5’ AAA AUG GUC AUG GCA UGC CGC AAU GGU CGU GAG UAG GGG 3’
Agora, podemos traduzir a sequência de mRNA em uma sequência de aminoácidos usando o código genético. Cada conjunto de três bases (chamado de códon) no mRNA corresponde a um aminoácido específico. Aqui está a sequência de aminoácidos correspondente:
Met-Val-His-Met-Ala-Cys-Arg-Asn-Gly-Arg-Glu-Stop
Portanto, a proteína transcrita terá 12 aminoácidos.
A mutação de ponto é uma alteração em uma única base do DNA. Na Figura 1, a mutação é mostrada como uma substituição da base C por A na posição 18 da sequência de DNA original. A nova sequência de DNA será:
3’ TTT TAC CAG TAA CGT ACG GCG TTA CCA GCA CTC ATC CCC 5’
Agora, podemos transcrever essa nova sequência de DNA em mRNA:
5’ AAA AUG GUC AUU GCA UGC CGC AAU GGU CGU GAG UAG GGG 3’
Traduzindo a sequência de mRNA em aminoácidos, obtemos:
Met-Val-Ile-Ala-Cys-Arg-Asn-Gly-Arg-Glu-Stop
Portanto, a mutação de ponto resulta em uma alteração no aminoácido na posição 6 da proteína, substituindo a histidina (His) pela isoleucina (Ile).
a)
transcrição: 5' GGG AUG GUC GCA UGC CGC GGU CGU GAG UAG GGG 3'
tradução : METIONINA - VALINA - ALANINA - CISTEINA - ARGININA - GLICINA - ARGININA - ÁCIDO GLUTAMICO - STOP CODON
b) Dada a informação de que a proteína mutante apresenta apenas os 7 primeiros aminoácidos da proteína normal, podemos inferir que a mutação ocorreu em um cód0n de finalização (stop códon). Observando a sequência de RNAm normal, o códon de finalização é "UAG". Se a proteína mutante tem apenas 7 aminoácidos, isso significa que a tradução termina em um cód0n diferente do cód0n normal de finalização. Portanto, a mutação está ocorrendo no códon "UAG".
O aminoácido faltando na proteína mutante é o "Stop códon", que normalmente sinalizaria o término da tradução.
c) O ribossomo continua a iniciar a tradução do RNAm mesmo após encontrar o códon de parada mutante porque não reconhece esse códon como um sinal de término da tradução. Isso pode ocorrer devido à presença de uma mutação no gene que codifica o RNAm, levando à substituição do códon de parada por um códon de aminoácido. Como resultado, o ribossomo continua a tradução até encontrar um códon de parada válido, que indica o término da sequência de aminoácidos da proteína.
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