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O sequenciamento de DNA revolucionou nosso conhecimento sobre material genético e revelou que a maior parte dele não codifica nenhuma proteína.
Com relação ao sequenciamento de DNA, assinale a alternativa correta.
A - Os métodos de sequenciamento têm base na produção de fragmentos de DNA de comprimento crescente, que começam em um ponto comum e possuem todos os quatro tipos de nucleotídeos nas respectivas extremidades.
B - Após a etapa de desnaturação do DNA, é colocado um primer na extremidade 5' de uma das cadeias e, com a ajuda de uma DNA polimerase, sintetiza-se a cadeia complementar por completo.
C - Após término da reação de sequenciamento, ela é submetida à eletroforese capilar.
D - Todos os fragmentos recém-sintetizados, cada um terminado em um nucleotídeo diferente e cada um marcado com um diferente fluoróforo, são separados pelas respectivas cores.
E - Os nucleotídeos empregados nessa técnica são quimicamente modificados de forma que não apresentam um terminal hidroxila (3'-OH), impedindo a inserção de um novo nucleotídeo pela DNA polimerase.
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Vamos analisar cada uma das alternativas para identificar a correta em relação ao sequenciamento de DNA: A - Os métodos de sequenciamento têm base na produção de fragmentos de DNA de comprimento crescente, que começam em um ponto comum e possuem todos os quatro tipos de nucleotídeos nas respectivas extremidades. - Esta descrição não é precisa, pois os métodos de sequenciamento geralmente produzem fragmentos de comprimento variável, não necessariamente crescente. B - Após a etapa de desnaturação do DNA, é colocado um primer na extremidade 5' de uma das cadeias e, com a ajuda de uma DNA polimerase, sintetiza-se a cadeia complementar por completo. - Esta afirmação é parcialmente correta, mas não descreve adequadamente o processo de sequenciamento, que não envolve a síntese completa da cadeia. C - Após término da reação de sequenciamento, ela é submetida à eletroforese capilar. - Esta afirmação é verdadeira, pois muitos métodos de sequenciamento, como o Sanger, utilizam eletroforese capilar para separar os fragmentos de DNA. D - Todos os fragmentos recém-sintetizados, cada um terminado em um nucleotídeo diferente e cada um marcado com um diferente fluoróforo, são separados pelas respectivas cores. - Esta afirmação é verdadeira, mas não é a única etapa do processo de sequenciamento. E - Os nucleotídeos empregados nessa técnica são quimicamente modificados de forma que não apresentam um terminal hidroxila (3'-OH), impedindo a inserção de um novo nucleotídeo pela DNA polimerase. - Esta afirmação é verdadeira e descreve a base do sequenciamento de Sanger, onde os nucleotídeos são dideoxinucleotídeos. Após a análise, a alternativa C é a mais correta em relação ao processo de sequenciamento de DNA, pois descreve uma etapa importante que ocorre após a reação de sequenciamento. Portanto, a resposta correta é: C - Após término da reação de sequenciamento, ela é submetida à eletroforese capilar.

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As técnicas de sequenciamento de Nova Geração (NGS) baseiam-se em uma amplificação clonal antes da reação de sequenciamento em si.
Sobre estas técnicas, assinale a opção correta.
A Uma das técnicas utilizadas é a PCR em ponte, na qual as fitas de DNA são dispersas em uma placa, aleatoriamente, e a PCR é realizada através de pareamento de bases com fitas de DNA presentes nesta placa; esta técnica é utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento).
B A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador 454 (pirosequenciamento) e consiste em uma emulsão de água, em uma fase oleosa, formando gotículas de água que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma 'bead' para sua ancoragem.
C Uma das técnicas utilizadas é a PCR em ponte, na qual as fitas de DNA são dispersas em uma placa aleatoriamente e a PCR é realizada através de pareamento de bases com fitas de DNA presentes nesta placa; esta técnica é utilizada na metodologia do sequenciador Sanger.
D A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador Sanger e consiste em uma emulsão de água em uma fase oleosa, formando gotículas de óleo que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma 'bead' para sua ancoragem.
E A PCR em emulsão é uma técnica utilizada na metodologia do sequenciador Illumina e consiste em uma emulsão de água em uma fase oleosa, formando gotículas de água que contêm os reagentes de PCR, uma fita de DNA a ser sequenciada e uma 'bead' para sua ancoragem.

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