Descreva as etapas do processamento histológico, desde a coleta da amostra até a sua análise no microscópio óptico.

1. Coleta

É a primeira etapa e consiste na retirada de uma amostra de tecido para a investigação, chamadas de biópsias:

1. Biópsia cirúrgica: através de uma incisão cirúrgica no órgão ou tecido.
2. Biópsia endoscópica: para órgãos ocos, como estômago e intestino.
3. Biópsia por agulha: é obtida pela punção do órgão (fígado, pulmão), sem precisar abrir a cavidade natural.
4. Cirurgia ampla: corresponde a peças grandes (tumores) ou órgãos (mama e útero).
5. Necrópsia: pós morte para verificar a causa do óbito.

Essa amostra removida durante uma biópsia é chamada de espécime. Os cassetes histológicos são usados para acomodar esses espécimes e também durante todas as etapas de preparação do tecido.

2. Fixação

Ao se remover qualquer material (órgão ou tecido) de um organismo se inicia um processo de autólise (autodigestão). A fixação evita a autólise celular e impede a proliferação de microrganismos, preservando a morfologia do tecido e fornecendo maior resistência para as etapas seguintes.

Dessa forma, a fixação utiliza processos físicos ou químicos para imobilizar as substâncias constituintes das células e dos tecidos. Os agentes fixadores mais utilizados são o formol tamponado e o líquido de Bouin.

3. Desidratação

Consiste na remoção da água dos tecidos. Vários métodos são utilizados, porém o mais comum compreende uma série de soluções alcoólicas em concentrações diferentes, chegando até o álcool 100%.

4. Clarificação ou diafanização

Essa etapa remove totalmente o álcool, preparando o espécime para a etapa seguinte. Para remover o álcool e preparar o tecido para a penetração da parafina, utiliza-se o xilol. Conforme o xilol penetra o tecido, em substituição ao álcool, o material se torna mais claro, transparente. Por essa razão, é denominada de clarificação.

5. Inclusão

Mesmo após a fixação e a desidratação, as amostras de tecido são ainda muito frágeis. Acontece então a impregnação do tecido com uma substância de consistência firme. Assim o tecido é endurecido, o que facilita o corte em camadas finas.

A parafina é a mais utilizada neste procedimento. Além do fácil manuseio e bons resultados, endurece em poucos minutos e preenche os lugares anteriormente ocupados pela água. Forma-se um bloco de parafina, que contém o espécime em seu interior.

Os cassetes histológicos são utilizados durante todos os processos, até mesmo na inclusão. Eles permitem escrever o número de registro do material, identificando o espécime. Também são importantes para a microtomia, pois podem ser adaptados ao micrótomo.

6. Microtomia

Depois de endurecido, o bloco de parafina deve ser cortado em seções extremamente finas, que permitam a visualização do tecido ao microscópio. Para isso, é utilizado o equipamento de precisão micrótomo, que alcança a espessura dos cortes de 5 a 15 μm (micrômetros).

1 micrômetro (μm) é igual a 1/1.000 de 1 milímetro (mm). Assim, os cortes dos tecidos, extremamente finos e transparentes, são montados em lâminas de vidro.

7. Coloração

Como as seções de parafina são incolores, os espécimes não estão ainda adequados para exame com microscópio de luz. São então corados para possibilitar a análise.

A parafina deve ser dissolvida e removida. Em seguida os tecidos na lâmina são reidratados por meio de uma série de soluções de álcool em concentrações decrescentes.

Os cortes de tecido podem então ser corados com hematoxilina. Por sua natureza básica, a hematoxilina vai corar os ácidos nucleicos dos núcleos.

Em seguida, os cortes são lavados em e corados pela eosina, um corante de natureza ácida e que irá corar os componentes básicos predominantes no citoplasma das células.

Finalmente após a coloração, os cortes são protegidos por uma lamínula e podem ser analisados por microscopia.

O passo a passo consiste em coleta, fixação, desidratação, clarificação, inclusão, microtomia e coloração.

Coleta

Consiste na retirada de uma amostra de tecido para a investigação, chamadas de biópsias.

Essa amostra removida durante uma biópsia é chamada de espécime. Os cassetes histológicos são usados para acomodar esses espécimes e também durante todas as etapas de preparação do tecido.

Fixação

Ao se remover qualquer material de um organismo, inicia-se um processo de autólise. A fixação evita a proliferação de microrganismos, preservando o tecido.

Dessa forma, a fixação utiliza processos físico-químicos para imobilizar as substâncias constituintes das células e dos tecidos.

Desidratação

Consiste na remoção da água dos tecidos. O mais comum deles compreende uma série de soluções alcoólicas em concentrações diferentes, chegando até o álcool 100%.

Clarificação

Essa etapa remove totalmente o álcool, preparando o espécime para a etapa seguinte, para remover o álcool e preparar o tecido para a penetração da parafina. É denominada de clarificação porque a utilização do xilol faz com que o excerto fique mais claro.

Inclusão

Mesmo após a fixação e a desidratação, as amostras de tecido são ainda muito frágeis. Acontece então a impregnação do tecido com uma substância de consistência firme. Assim o tecido é endurecido, o que facilita o corte em camadas finas.

Microtomia

Depois de endurecido, o bloco de parafina deve ser cortado em seções extremamente finas, que permitam a visualização do tecido ao microscópio. Para isso, é utilizado o equipamento de precisão micrótomo, que alcança a espessura dos cortes de 5 a 15 μm (micrômetros).

Coloração

Como as seções de parafina são incolores, os espécimes não estão ainda adequados para exame com microscópio de luz. São então corados para possibilitar a análise.

Os cortes de tecido podem então ser corados com hematoxilina. Por sua natureza básica, esta vai corar os ácidos nucleicos dos núcleos.

Finalmente após a coloração, os cortes são protegidos por uma lamínula e podem ser analisados por microscopia.

A importância da preservação da amostra

O exame ao microscópio é feito geralmente por luz transmitida, o que significa que a luz deve atravessar o objeto a ser examinado. ... As etapas para se obter a amostra de tecidos são: coleta do material, fixação, desidratação, clarificação, inclusão, microtomia (corte) e coloração.