COMO É REALIZADO O EXAME DA ELETROFORESE

A eletroforese de hemoglobina é feita a partir da coleta de uma amostra de sangue por um profissional capacitado em laboratório especializado, isso porque a coleta incorreta pode resultar em hemólise, ou seja, destruição das hemácias, o que pode interferir no resultado.

A eletroforese é uma técnica laboratorial e que, para ser realizada, é necessário preparar um gel de agarose ou poliacrilamida, dependendo do objetivo da realização da técnica, solução tampão, cuba de eletroforese, marcador de peso molecular e uma substância capaz de permitir a visualização das amostras quando expostas à luz UV ou LED. Após o preparo e solidificação do gel, a técnica pode ser realizada da seguinte forma:

1. Colocar cada amostra em um poço do gel, misturando uma pequena quantidade de marcador de peso molecular;
2. Colocar em um dos poços um controle positivo, que é a substância que se sabe o que é, e em outro poço, o controle negativo, para garantir a validade da reação. Em ambos os poços, é necessário haver também o marcador de peso molecular;
3. Colocar o gel na cuba de eletroforese, caso não esteja, com a solução tampão específica, e ligar o aparelho para que seja gerada corrente elétrica capaz de gerar de diferença potencial e separação das partículas de acordo com a sua carga e tamanho. O tempo da corrida eletroforética varia de acordo com o objetivo do procedimento, podendo durar até 1 hora;
4. Visualizar o resultado da eletroforese por meio do transiluminador. Quando o gel é colocado sob luz UV ou LED, é possível visualizar o padrão de bandas: quanto maior a molécula, menor é a sua migração, ficando mais próximo do poço, enquanto que quanto mais leve for a molécula, maior é o potencial migratório.

Para que a reação seja validada, é preciso que sejam visualizadas as bandas do controle positivo e que no controle negativo não seja visualizado nada, pois caso contrário é indicativo de que houve contaminação, devendo todo o processo ser repetido.

A eletroforese é uma técnica muito usada em laboratório para identificação de uma amostra (DNA, proteínas) de acordo com sua massa molecular. Geralmente, a amostra é aplicada em um "gel" (depende da eletroforese, pode ser de agarose, no caso de DNA, ou para proteínas em que o "gel" é feito com acrilamida e outros reagentes); Depois, a amostra é submetida ao que chamamos no laboratório de "corrida", onde as moléculas são submetidas a uma corrente elétrica (lembrando, ela foi aplicada no gel), e ocorre sua migração entre os polos, e cada DNA irá migrar de acordo com seu peso. Com isso, após o procedimento, pode ser visualizada essas bandas.

Um exemplo prático: quero visualizar o tamanho de uma proteína (SDS-PAGE de Laemmli), portanto, irei realizar o procedimento de sua aplicação - a proteína primeiro passa por um procedimento para sua desnaturação - e posterior eletroforese. Depois disso, o gel é corado, e então eu posso comparar o tamanho da minha proteína utilizando como base um marcador molecular, onde posso verificar se de fato minha proteína está na "altura de banda" que ela deveria estar ou não.

Algo mais simples: é feito o mesmo procedimento (mas é outro tipo de gel) para identificação de diferentes tipos de hemoglobinas, onde podem ser detectadas doenças relacionadas ao sangue.

Espero ter ajudado.