Citogenética: Estudo dos Cromossomos

Prévia do material em texto

Citogenética 
Walter Fleming 1882 
• Ilustrações de cromossomos humanos 
• Cromatina 
• Mitose 
Waldeyer 1888 
• Cromossomo = corpo colorido 
• hereditariedade 
Sutton 1900 
• Citogenética 
• Citologia + Genética 
• Teoria Cromossômica da Herança 
• Tijo e Levan 1956 
• 46 cromossomos 
 
• Estuda a estrutura e função dos 
cromossomos nas células, modos de herança e as 
condições e doenças relacionadas 
Citogenética Molecular 
• FISH • Hibridização in situ por fluorescência 
• Sondas de DNA marcadas com fluorescência 
• Detectar anomalias cromossômicas que 
estão além do poder de resolução da citogenética 
clássica 
 
• Estrutura autoduplicadora 
• Corada por corantes Básicos 
• Incapaz de promover Transcrição 
• Formada de DNA, RNA, proteínas básicas e ácidas 
• Contém os genes em seus determinados Locus 
• Visualizados durante a divisão celular 
 
 
 
 
 
 
 
 
• Maior parte do cromossomo 
• Fibras menos condensadas 
• Coloração uniforme 
• Variados graus de condensação durante o ciclo 
celular 
• Regiões mais condensadas 
• Mais coradas 
➔ Construtivas: 
• DNA altamente repetitivo 
• Não transcricional 
➔ Facultativa: 
• Inativação de genes 
• Podem ser ativados 
 
 
 
• 46 ou 23 pares 
• 44 
• Autossomos 
• Homólogos 
• 2 
• Sexuais 
• Homólogos – feminino (XX) 
• Não homólogos – masculino (XY) 
• Algumas regiões homólogas 
 
• 2 cromátides 
• Centrômero 
• constrição primária 
• Braços cromossômicos 
• p = curto 
• q = longo 
• Telômeros 
• Extremidades 
• Satélite 
• Separados por constrições secundárias 
• Nucléolos 
 
 
• Classificação 1960 
• Tamanho: 
• Grandes 
• Médios 
• Pequenos 
• Muito pequenos 
• 7 grupos 
• A a G 
• Numerados 
• 1 ao 22 
• Sexuais a parte 
• X – C - submetacêntrico 
• Y – G – acrocêntrico 
 
• A – Grandes – Metacêntricos e Submetacêntrico (2) 
• B – Grandes – Submetacêntricos 
• C – Médios – maioria Submetacêntricos 
• D – Médios - Acrocêntricos 
• E – Pequenos – Metacêntrico (16) e 
submetacêntricos 
• F – Muito Pequenos – Metacêntricos 
• G - Muito Pequenos – Acrocêntricos 
Cariótipo: 
• Cariograma 
• Contagem e classificação 
• Organização dos cromossomos aos pares 
• Análise de Aneuploidias e Quebras 
 
• Mitose – Metáfase -> Cromossomos mais 
condensados 
• Tecidos com alto índice mitótico – in vivo 
• Medula esternal/crista ilíaca 
• Bainha radicular de Bulbos capilares 
• Tumores sólidos 
• Indução de mitose – in vitro 
• Fragmentos de pele 
• Biópsias 
• Tecido amniótico (células em suspensão) 
 
• Pró-metáfase → Cromossomos mais estendidos 
• Cultivo de Linfócitos 
• Mitose estimulada = fitohemaglutinina 
 
 
 
 
 
 
 
 
Bandeamento: 
• Bandas Q (1970) 
o Quinacrina Mostarda (fluorescente) 
o Faixas (bandas) - diferentes 
intensidades 
o Identificação de Y 
• Bandas G 
o Trpsina- desnatura proteinas 
cromossomicas 
o Corados com Giemsa 
o Bandas claras (GC) e escuras (AT) 
 
Padrão único para cada cromossomo 
 
Analise: 
• Cariotipo bandas G 
 
• Ideograma 
 
Nomenclatura: 
 
Citogenética molecular: 
Fish (Fluorecence in situ hybridization): 
• Segmento de DNA de cadeia simples (sonda / 
probe) enrola-se em uma sequência complementar 
• Sequencia específica de Nts quimicamente 
modificados - fluorescentes 
• Hibridização (incorporação) ao DNA da 
amostra 
• Vantagem de ser usada na interfase 
• Detecta anormalidades cromossômicas 
• Mapeamento gênico 
 
 
SKY (Spectral Karyotyping) 
• Cada par de cromossomo é colorido de forma 
diferente 
• Usada para análise de cariótipos complexos 
• Determinar alterações cromossômicas estruturais 
não vistas pela citogenética clássica 
• Origem de material adicional (amplificação, quebras, 
inserções) 
 
CGH(Compara4ve Genomic hybridization) 
• Sondas para DNA controle (vermelho) 
• Sondas Teste (verdes) 
• Comparação de intensidades: 
• Se teste tem mais DNA 
• Amplificação = verde 
• Se teste tem menos DNA 
• Deleção = vermelho 
 
Cromossomos sexuais (X e Y) 
• Técnicas u:lizadas em substituição ao cariótipo para 
determinação do sexo do paciente 
• Mulheres com amenorréia primária 
• Homens com problema de fertilidade 
• Gestantes com risco de transmissão de doença ligada 
ao sexo 
• Mucosa oral / vaginal 
• Sedimento urinário 
• Líquido amniótico 
Cromatina sexual X: 
• 5% do Genoma nuclear 
• Submetacêntrico 
• 1098 genes (699 conhecidos) 
• Genes funcionais em ambos os sexos 
 
Corpúsculo de Barr 
• Barr e Bertram, 1949 
• Sexo feminino (XX) 
• Massa fortemente corada aderida a 
membrana nuclear 
• Um dos X permanece condensado em 
interfase 
• Compensação de dose de genes com relação 
ao Y 
• Inativação do X é incompleta 
• Metilação diferencial 
• Determinado por um gene: XIST 
 
 
Hipótese de Lyon 
• Descreve o mecanismo pelo qual se dá à na 
inativação do X como forma de compensação de dose 
1. X geneticamente a:vo / X geneticamente inativo 
2. Inativação durante fase embrionária (15 a 16 dias 
após fecundação) 
3. Origem materna ou paterna (acaso, porém 
permanente nas linhagens) 
 4. Óvulo não apresenta X inativo (reversibilidade) 
Cromatina sexual do Y: 
• Visualização de Y requer coloração fluorescente 
(quinacrina) e microscopia de contraste de fase 
• Y = ponto brilhante 
• Acrocêntrico 
• Pobre em genes (+/- 250) 
• Genes controlam função sexual 
• Garante fenótipo masculino independentemente da 
quantidade de X” 
 
Indicações de analises citogenéticas 
• Alterações de crescimento e desenvolvimento 
• Natimorto / óbito neonatal 
• Infertilidade / abortos recorrentes 
• Neoplasias 
• História familiar de cromossomopatia 
• Gestação em mulher com idade > 35 anos