Introdução a microscopia

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*MICROSCÓPIO DE LUZ (ÓPTICO)= também chamada de microscopia óptica,a
microscopía óptica,a microscopia de luz combina métodos tradicionais de formação de
imagem com princípios de aumento de resolução,permitindo a observação de detalhes de
até 200 nanômetros./é a mais utilizada,são equipamentos que utilizam luz visível ao olho
humano.E, os equipamentos, por apresentarem mais de uma lente são denominados
microscópio óptico composto. Dentre esse grupo, podemos citar exemplos como a
microscopia de campo claro, escuro, contraste de fase, contraste de interferência
diferencial, fluorescência.
-Geralmente, as partes de um microscópio são divididas em partes ópticas (lentes
oculares, lentes objetivas, condensador, diafragma e fonte luminosa) e partes
mecânicas (pé ou base, braço ou coluna, platina ou mesa, revólver ou tambor, tubo ou
canhão, Charriot ou parafuso, parafuso macrométrico, parafuso micrométrico).
Inicialmente, a luz que passou através da lâmina e chega as lentes objetivas vão formar
uma imagem aumentada, essas lentes iniciais apresentam aumentos de 4x, 10x, 40x e
100x (em nossos microscópios); no entanto, essa imagem é invertida. Nesse momento
entram em ação as lentes oculares, pois essa imagem invertida que chamaremos de
imagem 1, vai ser formada e refletida por um prisma, então os raios vindos da imagem 1
atravessaram a lente ocular, a aumentará a imagem e ela será invertida novamente (no
caso, ficando em pé), essa imagem a qual chamaremos de 2 é a imagem final que é
formada na retina
-teríamos que utilizar a lamínula para preservação do material;
-Agora você pode começar a ajustar o foco. O ajuste inicial é feito utilizando o parafuso
macrométrico (A), até que uma imagem comece a se formar. Formada a imagem, agora
você pode realizar o ajuste fino da imagem para que o foco seja alcançado com mais
nitidez. Para isso, utilize o parafuso micrométrico (B);
*COMPONENTES ÓPTICOS (MICROSCÓPIO ÓPTICO)
-São divididos em 2 partes: componentes ópticos e mecânicos
------------------ questões norteadoras --------------------
1º Quais são as peças responsáveis pelo aumento?
-lentes oculares= lente que serve para ampliar a imagem dada pela objetiva.
-lentes objetivas = lente que serve para ampliar a imagem do objeto a observar.
2ºComo definimos um aumento? E quais os aumentos que você consegue identificar
nos nossos microscópios?
Quando a imagem é ampliada. 4X,10X e 100X
A maioria dos microscópios ópticos permite uma ampliação de 40x até 1000x. Ele é
considerado composto, pois apresenta dois sistemas de lentes: ocular, que fica
próximo ao olho do observador e objetiva, próxima à preparação a ser observada. A
lente ocular geralmente amplia 10x e uma lente objetiva amplia 40x.
3º Quais peças são responsáveis pela iluminação e pela regulação da passagem da
luz?
-fonte de luz= tem a função de iluminar o material a ser observado
-condensador e diafragma= regula a intensidade da luz que atinge o objeto a observar
*4º Qual a peça que permite que possamos movimentar horizontalmente o material a
ser observado?
-Charriot=Peça ligada à platina que possibilita mover a lâmina, permitindo a melhor
centralização da mesma;
-platina ou mesa= local onde se coloca o material a observar,que pode ser fixado com o
auxílio de duas pinças.
**5º Quais são as peças que permitem que possamos movimentar verticalmente o
material a ser observado?
Condensador = Conjunto de duas ou mais lentes convergentes que orientam e espalham
regularmente a luz emitida pela fonte luminosa sobre o campo de visão do microscópio.
Diafragma=É constituído por palhetas que podem ser aproximadas ou afastadas do centro
através de uma alavanca ou parafuso, permitindo regular a intensidade da luz que incide no
campo de visão do microscópio.
Lentes Objectivas=Permitem ampliar a imagem do objecto 10x, 40x, 50x, 90x ou 100x. Existem:
○ As objectivas de 10x, 40x e 50x são designadas objectivas secas pois entre a
preparação e a objectiva existe somente ar.
As objectivas de imersão, uma vez que, para as utilizar, é necessário colocar uma gota de
óleo de imersão entre elas e a preparação, o qual, por ter um índice de refracção semelhante ao
do vidro, evita o desvio do feixe luminoso para fora da objectiva.
Oculares=Sistema de lentes que permitem ampliar a imagem real fornecida pela objectiva,
formando uma imagem virtual que se situa a aproximadamente 25 cm dos olhos do observador.
As oculares mais utilizadas são as de ampliação 10x, mas nos microscópios binoculares
também existem oculares de 12,5, 8x e 6x.
6º Quais as peças que permitem a acomodação para as necessidades individuais de
foco?
-parafuso micrométrico= parafuso que permite mover a platina com movimentos lentos,para
focar a imagem
-parafuso macrométrico= parafuso que permite mover a platina com movimentos
rápidos,para focar a imagem
------------------ explorando o microscópio -------
a)a forma que você visualizou a imagem correspondeu ao esperado?
Não,não parece nem uma letra direito
b)represente-a no campo abaixo e anote suas observações.
foi usado o menor aumento (4x)
DICA:LEMBRE-SE SEMPRE DE IDENTIFICAR O TECIDO VISUALIZADO E O AUMENTO
UTILIZADO.
---------------------- PARTE II PREPARO DE MATERIAL PARA OBSERVAÇÃO -------------
PROCEDIMENTO 1: será observado célula pavimentosa da mucosa oral sem corante (não
mostrava de quanto era o aumento,mas comparado com a 1ª imagem do 2º procedimento
parece ser a de 100x);
PROCEDIMENTO 2: a célula pavimentosa da mucosa oral com corante ficou mais visível,é
bem mais fácil localizar elas, no aumento de 100x.Já no aumento de 400x ela ficou ainda
melhor,já que agora é possível ver o núcleo e o citoplasma da célula pavimentosa da
mucosa oral.
------------------- PARTE III O USO DE CORANTES NA HISTOLOGIA ----------------------
1º Por que é necessária a utilização de um corante no experimento da dinâmica 2?
Porque a célula fica mais visível além de que com o corante é possível identificar o núcleo
e o citoplasma da célula pavimentosa da mucosa oral.
2º quais são os principais tipos de coloração histológicas empregados na atualidade?
é a hematoxilina= (básica) e tem coloração azul-púpura e eosina (HE)= (ácida) e tem
coloração vermelho
famosa coloração H&E
ps.: a hematoxilina é um corante natural obtido das cascas de pau Campeche
https://pt.wikipedia.org/wiki/Alavanca
https://pt.wikipedia.org/wiki/Objectiva
https://pt.wikipedia.org/wiki/Lente_Objetiva_de_Imers%C3%A3o_em_%C3%93leo
3º Como funcionam estes tipos de corantes?
A hematoxilina é um corante básico, que tem atração a substâncias ácidas (lembra
que os opostos se atraem). ... E a eosina é um corante vermelho. Sendo assim,
tudo aquilo que você observar na lâmina que seja dessa cor, é uma substância
básica, e que foi atraída pela eosina que é ácida, sendo então uma substância
acidófila.
-Inicialmente, o objetivo é preservar o tecido ao máximo para que seu aspecto
fique mais próximo do que era ao ser retirado, então se inicia um processo
denominado fixação, no qual o tecido é imediatamente imerso em um fixador
(que pode ser uma ou a mistura de algumas substâncias; um exemplo
amplamente utilizado é o formol*) que tem como objetivo de preservar o tecido.
O fixador vai preservar a amostra, pois, age interrompendo o metabolismo das
células, evita a degradação enzimática e consequentemente a autólise
(autodigestão), mata os microrganismos patogênicos que poderiam contaminar o
tecido e, por fim, enrijece o tecido por desnaturar as proteínas. OBS: O formol é
uma solução aquosa de um aldeído, o qual apresenta um Carbono (CH2O)
também chamado de formaldeído. Posteriormente, o objetivo é o corte da peça.
Inicialmente, lava-se a amostra pra uma posterior desidratação que consiste em
seguidas aplicações de soluções alcoólicas, até então chegar ao álcool absoluto
(teoricamente isento de água). Porém, esse álcool não pode ficar na peça, logo,
ocorre um processo denominado clarificação na qual os solventes orgânicos são
empregados para retirar o álcool, para só então haver a infiltração por parafina*.
Ai sim, a peçapode ser passada por um equipamento, o micrótomo, para ser
cortada, e em seguida colocadas em lâminas de vidro.
*OBS: existe outras formas, no qual o tecido é endurecido com congelamento
para então poder ser cortado em um equipamento denominado criostato.
------------------ IMPORTÂNCIA DOS CORANTES NA HISTOLOGIA------
1º As cores observadas são parecidas? Como são estas cores?
Não,são um pouco diferentes. Cresil violeta,prata,HE
2º Estamos observando o mesmo tecido?*
sim,o tecido nervoso (ele é encontrado no cérebro e na medula espinhal)
TECIDO=o conjunto de células com a mesma função formam os tecidos e cada
um dos tecidos exercem uma função
-o tecido nervoso é formado por células chamadas de neurônios que coordenam
as atividades do nosso corpo,esse tecido é encontrado no cérebro e na medula
espinhal
-tecido epitelial= são os tecidos que revestem e protegem muitos órgãos do
nosso corpo.Eles estão presentes na superfície da pele e no interior dos órgãos
bocus,como a nossa boca,intestino,bexiga e vasos sanguíneos
-tecido sanguíneo= constituindo de plasma e células sanguíneas.O sangue
transporta o oxigênio e os nutrientes para as demais células do corpo,além de
realizar as defesas do nosso organismo
-tecido cartilaginoso= são as cartilagens e aprensentam a função de facilitar o
deslizamento entre os ossos,além de dar suporte aos órgãos moles como o nariz
e orelha Os tecidos podem ser definidos como agrupamentos de células que
apresentam formas e funções semelhantes. Podemos classificar os tecidos
humanos em quatro tipos fundamentais: epitelial, conjuntivo, nervoso e muscular..
3º As estruturas evidenciadas pelos corantes são as mesmas nas 3
lâminas? Por quê?
Não,a 1ª e a 3ª se parecem,mas a 2ª é totalmente diferente.Por conta da
coloração diferente.