RESUMO 1- Biologia molecular (002)

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BIBLIOGRAFIA 
Recomendação para melhor aproveitamento do conteúdo: 
 
 
APLICABILIDADE- DIAGNÓSTICO 
A biologia molecular pode ser encontrada tanto no diagnóstico 
(PCR, banco de sangue, eletroforese), como no tratamento de 
patologias (terapia gênica). 
Exemplos práticos: 
Diagnóstico do SARS-COV-2: (idealmente o teste deve ser feito 
após três dias de sintomas, para que não haja falsos negativos). 
 
Coleta: Por este vírus ser respiratório, onde sua porta de 
entrada é nariz e então se dissemina pelo resto do corpo, a 
coleta é realizada pela nasofaringe. Uma vez realizada a coleta, 
coloca-se o cotonete e as partículas virais em um tubo com meio 
de cultura para a preservação dessas partículas. 
Extração do material genético do vírus: (RNA longo, com trinta 
mil pares de base). Como esse RNA está em um meio com 
interferentes como muco, células, sujidades etc, deve-se fazer 
uso do tampão de lise, onde este irá lisar as células, romper o 
muco e irá também lisar e inativar o vírus. (Este processo deve 
ser realizado em laboratório nível NB2 ou NB3 de segurança). 
Após o processo de lise, despeja-se este conteúdo em um tubo, 
contendo uma coluna de sílica, centrifuga~se para que todo o 
conteúdo desnecessário possa precipitar e somente o RNA ficar 
preso na coluna, lava-se com tampão de lavagem + outras 
substâncias. Após o descarte e transporte do RNA para outro, 
acrescenta-se água para que haja o desprendimento material 
genético, faz-se o congelamento dessa nova solução (RNA+H2O). 
PCR Quantitativo em Tempo Real- RT-qPCR: Para a realização 
do mesmo faz-se uma RETROTRANSCRIÇÃO, onde há a 
transformação do RNA em DNA, isso é necessário, pois o PCR só 
realiza leituras em ácidos desoxirribonucleicos. Para isso usa-
se a enzima transcriptase reversa. Então submete-se o DNA a 
uma temperatura de 95°C para que ela se abra, uma vez aberta 
aplica-se à fita 60°C para que as enzimas possam ir amplificar 
a fita (realizar cópias), esse processo é chamado de ciclo e é 
repetido por 45 vezes, quanto mais ciclos (CT) maior a 
fluorescência, logo, na demonstração do gráfico é possível 
encontrar um gráfico com uma curva exponencial até que 
chegue em um platô pois chegou ao momento em que já não é 
mais possível realizar amplificações. Por último coloca-se no 
equipamento Realtime e faz-se a leitura. 
Threshold (limite)- acima positivo, abaixo negativo, caso fique 
na linha pede-se uma retestagem. A determinação do Threshold 
é feita com um controle positivo que sempre corre junto com a 
reação, ele é determinado onde está a parte mais reta da curva. 
*Quanto antes aparecer no gráfico, mais infectado. Quanto 
menor o CT (maior a carga viral). 
 
Introdução e evolução da bio mol 
APLICABILIDADE- TERAPÊUTICA 
Terapia gênica: Uso de genes sintetizados em laboratório em 
células do paciente com a finalidade de corrigir os genes 
mutados/modificados. No Brasil duas doenças já podem ser 
tratadas dessa forma: a distrofia hereditária de retina (causa 
cegueira noturna) e a atrofia muscular espinhal-AME. Já nos EUA 
possuem mais de dez fármacos à base de terapia gênica. 
(tratamento de linfoma e leucemia- não sendo a primeira linha 
de tratamento). 
Exemplos práticos: 
Tratamento com células CAR T 
Tratamento que reprograma as células contra o câncer. 
 
O objetivo dessa terapêutica é tornar a célula cancerosa 
reconhecida pelo TCD8+, uma vez que essas células tem a 
habilidade de se “esconderem” muito bem do sistema 
imunológico, dificultando o processo de reconhecimento das 
células cancerígenas pelos linfócitos T, facilitando a 
proliferação descontrolada e que acabam matando o indivíduo. 
*Célula T, Linfócito T (TCD8+ capaz de reconhecer célula 
infectada por um vírus e o destruir). 
*CAR- Receptor do antígeno quimérico (antígeno quimérico: 
proteína da célula tumoral) 
Logo, o procedimento consiste em coletar o sangue periférico 
de um paciente, extrair as células T e as levar para o laboratório. 
Então inserir um gene com todas as informações necessárias 
para a realização do CAR- que ser a fechadura nas células 
tumorais (para que haja o efeito chave-fechadura), esse gene 
realiza a produção desses receptores. Então essas células 
modificadas são inseridas novamente no paciente, essas 
reconhecem a célula tumoral e as destroem. 
*Obrigatoriamente deve-se usar as células do próprio paciente 
para o processo por conta da rejeição. 
*O processo de acrescentar o CAR é bem complexo 
HISTÓRIA E EVOLUÇÃO 
Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723)- Inventou o primeiro 
microscópio rústico, ampliava a imagem em cerca de mil vezes. 
 
Robert Hooke 1665- Inventou outro microscópio mais ou menos 
na mesma época e olhando um pedaço de cortiça, com a 
observação de pequenas unidades ele denominou pela primeira 
vez como célula. 
 
Francesco Redi (1626-1697) Fez um experimento que provou que 
somente vida gera vida- Teoria biogênica e abiogênica (se a vida 
daria de corpos vivos ou haveria a possibilidade de haver vida a 
partir da lama, estrume).