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CÂMERA DE NEUBAUER Contagem de leucócitos Contagem de hemácias Câmera de Neubauer • É equivalente a uma lâmina mais larga e mais alta. • Rigorosamente dividida para possibilitar contagem de estruturas microscópicas Características do retículo da câmera Possui 9 grandes áreas com três tipos de quadrantes de diferentes subdivisões (A, B, C). Estruturas menores são contadas nos quadrantes “C”, intermediárias no “B” e maiores no “A”. Câmera Neubauer • Cada quadrante mede 1 mm2. Quando se coloca a lamínula a distância entre a lâmina e a lamínula (profundidade) é de 0,1mm. • Quadrante - 1 mm2 X 0,1mm = 0,1 mm3 ou seja em cada quadrante = 0,1 mm3 Câmera Neubauer • As 4 áreas grandes angulares ( L ) são subdivididas em 16 áreas com 0,25 mm de cada lado. • Elas são utilizadas para contagem de leucócitos. Câmera Neubauer • Ex: contou 4 quadrantes = 0,1 X 4 = contou 0,4 mm3 • Se tivesse contado 8 estruturas faria a regra de três • 8 estruturas ----------0,4 mm3 • X---------------- 1,0 mm3 • X = 8/0,4 = 20 estruturas em 1 mm3 ou mililitro • Se a estrutura contada tiver sido diluída multiplicar pelo fator de diluição. • Ex: diluiu a 1/5 na situação acima = 20 X 5 = 100 PRINCÍPIO DA CONTAGEM EM CÂMARA • 1) o sangue colhido em frasco, contendo anticoagulante (geralmente EDTA), deverá ser homogeneizado antes da utilização . Se sangue capilar, a diluição deverá ser efetuada logo após a coleta. • 2) após a diluição, o tubo de diluição, deverá sempre ser homogeneizados antes do preenchimento da câmara. PRINCÍPIO DA CONTAGEM EM CÂMARA • 3) Não deverá haver demora na contagem, evitando-se assim a secagem do líquido contido na câmara, a câmara, parcialmente seca, não poderá ser utilizada. • 4) Para algumas contagens especiais, a câmara preenchida deverá ser mantida em câmara úmida Contagem de leucócitos • Diluição em tubo de ensaio (macrodiluição): • 1)Em um tubo de ensaio colocar 0,4 mL da solução diluente. • 2) Acrescentar 20 microlitros de sangue homogeneizado e rinsar a pipeta. • 3)Homogeneizar a solução final por inversão do tubo ou em vortex. • 4)Preencher a câmara de Neubauer com o auxílio de um tubo capilar. • 5) Contar os leucócitos de 4 quadrados médios e multiplicar por 50. • Analisar no microscópio as variações morfológicas dos leucócitos Preenchimento da Câmera Contagem de hemácias • A grande área central é subdividida em 25 grupos quadrados de 0,2 mm de cada lado. • Cada grupo consiste de 16 mini-áreas com 0,05 mm de lado, tendo cada área 0,0025 mm2 . • Os 5 grupos marcados ( E ) são usados para contagem de eritrócitos Contagem de hemácias Figura Divisões para contagem de eritrócitos manual (100x www6.ufrgs.br/favet/lacvet/eritrocitos.htm http://www6.ufrgs.br/favet/lacvet/eritrocitos.htm Contagem de hemácias • É observado que todas as áreas têm uma borda tripla em cada lado. • A linha central é o limite e determina quando uma célula deve ser incluída na contagem ou não. Contagem de hemácias Contagem de hemácias (macrodiluição) • 1) Em um tubo de ensaio colocar 4mL da solução diluente. • 2) Acrescentar 20 microlitros de sangue homogeneizado e rinsar a pipeta. • 3) Homogeneizar a solução final por agitação do tubo ou uso vortex em rotação lenta. • 4) Preencher a câmara de Neubauer com o auxílio da pipeta ou de um tubo capilar. • 5) Contar as hemácias de 5 quadrados médios e multiplicar por 10000. • Analisar no microscópio as variações morfológicas das hemácias.