Prévia do material em texto
RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL IDENTIFICAÇÃO 1. Acadêmico: Eulália Céo de Carvalho 2. Matrícula: 3423870 3. Curso: Biomedicina 4. Turma:FLC15100BBI 5. Disciplina: Hematologia Clínica 6. Tutor(a) Externo(a): Larissa Santos DADOS DA PRÁTICA 1. Título: Contagem Manual de Eritrócitos 2. Semestre: 6 3. Data: 04/11/2024 INTRODUÇÃO Os parâmetros hematológicos constituem importante ferramenta de investigação clínica de patologias hematológicas e auxiliam no monitoramento de adaptações às condições fisiológicas, como alimentação e variações hormonais, e alterações por mudança geográfica. A análise quantitativa de eritrócitos pode também sinalizar condições patológicas, como policitemias, hemorragias, anemias hemolíticas e deficiência de eritropoetina. A contagem manual (ou global) de eritrócitos é uma técnica que permite a determinação ao microscópio do número de eritrócitos por milímetro cúbico (mm3) de uma amostra de sangue total utilizando câmara de Neubauer. Esse instrumento é uma lâmina grossa de vidro, com dimensões de 30x70mm de comprimento e 4mm de espessura, de formato retangular, com uma depressão central, utilizada com auxílio de uma lamínula, que concentra a amostra entre a grade de contagem da câmara e própria lamínula, preenchendo o espaço de 0,1mm. OBJETIVOS O objetivo desta técnica é permitir a determinação do número de eritrócitos por mm3 (concentração eritrocitária) de amostra de sangue total utilizando câmara de Neubauer. -determinar o número de eritrócitos em mm3 de uma amostra de sangue total utilizando a câmara de Neubauer; -realizar corretamente a diluição da amostra; -identificar o local na câmara de Neubauer onde deve ser realizada a contagem de eritrócitos; -realizar corretamente os cálculos de conversão da contagem de eritrócitos por campo em número de eritrócitos por mm3; -utilizar corretamente a câmara de Neubauer para contagem de eritrócitos; reconhecer o erro na execução, se houver, que deu origem ao resultado inadequado. MATERIAIS • Amostra de sangue total em tubo de EDTA; • Câmara de Neubauer; • Gaze; • Lamínula; • Micropipeta de 1000µL e respectiva ponteira; • Micropipeta de 20µL e respectiva ponteira; • Microscópio; • Reagente de Gower (diluente); • Tubo de ensaio. METODOLOGIA Os parâmetros hematológicos constituem importante ferramenta de investigação clínica de patologias hematológicas e auxiliam no monitoramento de adaptações às condições fisiológicas, como alimentação e variações hormonais, e alterações por mudança geográfica. A análise quantitativa de eritrócitos pode também sinalizar condições patológicas, como policitemias, hemorragias, anemias hemolíticas e deficiência de eritropoetina. A contagem manual (ou global) de eritrócitos é uma técnica que permite a determinação ao microscópio do número de eritrócitos por milímetro cúbico (mm3 ) de uma amostra de sangue total utilizando câmara de Neubauer. Esse instrumento é uma lâmina grossa de vidro, com dimensões de 30x70mm de comprimento e 4mm de espessura, de formato retangular, com uma depressão central, utilizada com auxílio de uma lamínula, que concentra a amostra entre a grade de contagem da câmara e própria lamínula, preenchendo o espaço de 0,1mm. No centro da câmara existem várias linhas perpendiculares (conhecidas como ranhuras) que dão origem às marcações denominadas quadrantes. Pode-se perceber que existem três tipos de quadrantes, que juntos formam um quadrado maior, ou grade de contagem, que tem 3mm x 3mm de tamanho e é subdividida em nove quadrantes de 1mm x 1mm. A distribuição das células sobre esses quadrantes, quando observadas ao microscópio, segue padrões de contagens que possibilitam determinar o número de células em determinado volume de sangue. No caso de contagem hematológica, os eritrócitos são contados no quadrante central (em 5/25 quadrados contidos no quadrante central, ou seja, em 1/5 do volume do quadrante central). Após a devida diluição da amostra, uma lamínula é colocada sobre a câmara de Neubauer, cobrindo a área central da câmara, onde se localiza a grade de contagem. A contagem celular é realizada ao microscópio utilizando o aumento de 100x e de 400x. 1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO Coloquei os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”. Nesse experimento foi e é obrigatório o uso de jaleco, luvas, máscara e óculos. 2. PREPARANDO A AMOSTRA Inicialmente, pipetei 4 mL (4000µL) de solução diluente e transferir para o tubo de ensaio. Feito isso, utilizei a micropipeta de 20µL, adicionei a amostra ao tubo contendo reagente e homogeneízei durante o tempo necessário. 3. FIXANDO O MATERIAL NA CÂMARA DE NEUBAUER Pipetei 20µL da solução contendo o agente diluente e a amostra, e desprezei na câmara de Neubauer. Após isso, coloquei a lamínula e levei a câmara até o microscópio. 4. OBSERVANDO O RESULTADO Moví a lâmina para o microscópio. Executei todas os ajustes necessários para a visualização. Observei o resultado através da lente ocular. Anotei suas impressões. 5. FINALIZANDO O EXPERIMENTO Fiz a limpeza de todos os materiais utilizados, retirei a lâmina do microscópio e desliguei-o. perimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas, máscara e óculoscnica FOTOGRÁFICO Resultados e Discurssões 6. AVALIANDO OS RESULTADOS 1. Quantos quadrantes precisam ser contados na câmara de Neubauer para obter o número total de hemácias? Informe também a localização deles. Pode-se perceber que existem três tipos de quadrantes, que juntos formam um quadrado maior, ou grade de contagem, que tem 3mm x 3mm de tamanho e é subdividida em nove quadrantes de 1mm x 1mm. A distribuição das células sobre esses quadrantes, quando observadas ao microscópio, segue padrões de contagens que possibilitam determinar o número de células em determinado volume de sangue. 2. Para que não ocorra nenhum erro durante a contagem de hemácias é necessário realizar um processo sistemático desse procedimento. Descreva como deve ser feita essa contagem (ordem dos quadrantes, posição da célula no quadrante) e quais objetivas devem ser usadas. No caso de contagem hematológica, os eritrócitos são contados no quadrante central (em 5/25 quadrados contidos no quadrante central, ou seja, em 1/5 do volume do quadrante central). Após a devida diluição da amostra, uma lamínula é colocada sobre a câmara de Neubauer, cobrindo a área central da câmara, onde se localiza a grade de contagem. A contagem celular é realizada ao microscópio utilizando o aumento de 100x e de 400x. REFERÊNCIAS BIONETWORK. Counting Cells with a Hemocytometer. 2012. (6m30s). Disponível em: https://www.youtube.com/watch?v=pP0xERLUhyc&t=269s. Acesso em: 8 set. 2020. MELO, C. P. A.; FRANCO, J. M.; GARCIA, T. F. P.; NEVES, P. A. Manual Roca Técnicas de Laboratório: sangue. São Paulo: Roca, Grupo Editorial Nacional, 2011. OLIVEIRA LIMA, A.; GRECO, J. B.; BENJAMIN SOARES, J.; CANÇADO, J. R.; GALIZZI, J. Métodos de laboratório aplicados à clínica: técnica e interpretação. 8. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001.