Experimento Checkerboard

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Experimento Fici 
Equipamentos: 
01 placa de 96 poços chatos 
Drogas a serem utilizadas em concentração 4x maior do que a final desejada 
Água salina 0,9% 
Meio RPMI 
Suspensão fungica desejada com concentração 2x maior que a final desejada 
Ponteiras 
Pipetas 
Descarte 
Papel adesivo estéril 
Papel alumínio 
Caneletas 
Placas de ágar sab. 
 
Procedimento: 
1. Adicionar 50µL da alíquota 2x o MIC da droga A, na linha A1 – A8. (Ex., 
droga A o MIC é 64 µg/mL para o fungo, utilizar 512 µg/mL, ou seja 102,4 
µL da solução estoque para uma solução final de 200 µL). 
*Se for fazer uma solução maior da droga para depois adicionar 50 µl em cada 
poço, fazer com 819,2µl de droga A em 1,6mL de RPMI. Dessa solução, retirar 50 µl para 
cada poço (A1-A8). Dessa forma o MIC ficará 2x maior no primeiro poço. Fazer o mesmo 
com as outras concentrações a serem utilizadas. 
 Adicionar 50µL da alíquota 1x o MIC da droga A, na linha B1-B8. (256 
µg/mL de droga A, 51,2 µL da solução de estoque para uma solução 
final de 200 µL) 
 Assim por diante até chegar na concentração 0,031x o MIC da droga A, 
na linha G1 – G8. (15,872 µg/mL de droga A) 
2. Adicionar 50µL da alíquota 0,031x o MIC da droga B, em toda a coluna 1 
(G ao A). (Ex., para droga B, o MIC foi de 2 µg/mL, logo deve-se pegar 
0,3968 µL da solução estoque para uma solução final de 200 µL) 
 Adicionar 50µL da alíquota 0,062x o MIC da droga B, em toda a coluna 
2 (G ao A). 
 Assim por diante até chegar na concentração 2x o MIC da droga B, na 
coluna 7(G ao A). (16 µg/mL, 12,8 µL da solução de estoque para uma 
solução final de 200 µL). 
3. Coluna 9 com 50 µL de RPMI + 50 µL de cada concentração da droga A. 
4. Coluna 10 com 50 µL de RPMI + 50 µL de cada concentração da droga da 
droga B. 
5. Coluna 11 com 200 µL de RPMI. 
6. Coluna 12 com 100 µL de RPMI. 
7. Adicionar 100 µL da suspensão fungica 2x a concentração final desejada 
em todos os poços com exceção do controle negativo (coluna 11). 
8. Encubar na estufa (no ° desejado para o crescimento do microrganismos) 
durante X dias. 
 
*importante realizar as diluições das drogas a serem utilizadas antes de colocar na 
placa.