Prova 2 - Vírus

Prévia do material em texto

MICROBIOLOGIA – AP 2 - Vírus 
Quais são os dois tipos de transmissão da hepatite? 
• Hepatites B, C e D: contaminação por material biológico (sangue); 
• Hepatites A e E: contaminação via oral. 
Quais são os exemplos de doenças virais? 
Ebola, Hepatite, Chikungunya 
O que seria arenavírus e arbovírus? 
• Arenavírus: vírus transmitidos por roedores e que provocam febre hemorrágica; 
• Arbovírus: vírus transmitidos por artrópodes. 
Quais são as características de vírus do grupo 4? 
Inclui agentes infecciosos patogênicos que causam doenças graves ao ser humano e animais, 
podendo facilmente serem transmitidas entre os indivíduos, de forma direta ou indireta. Não 
se conhecem tratamento eficaz e as medidas profiláticas não estão bem estabelecidas. Ex: 
Ebola, Marburg. 
Como deve ser a entrada de pessoas em um laboratório de nível de segurança 4? 
É realizada através de vestiários de barreira. Ao entrar, as pessoas trocam todas as roupas e 
colocam EPIs adequados, além dos macacões. O complexo isolamento dos trabalhadores de 
laboratório em relação aos materiais infecciosos aerossolizados é realizado primariamente em 
cabines de segurança biológica classe III ou com um macacão individual suprido com pressão 
de ar positivo. A instalação do prédio de nível segurança 4 é construído separadamente, em 
uma zona isolada. 
Quais são as características dos vírus? 
• São parasitas intracelulares obrigatórios (Dependência do equipamento celular do 
hospedeiro para realizar a sua multiplicação); 
• Possuem um único tipo de ácido nucléico (DNA ou RNA); 
• Possuem uma cobertura proteica (as vezes recoberta por um envelope de lipídeos, 
proteínas e carboidratos) envolvendo o ácido nucléico. 
• Induzem a síntese de estruturas especializadas capazes de transferir o ácido nucléico 
viral para outras células. 
Como ocorre a multiplicação dos vírus? 
Para se multiplicarem, os vírus não podem estar em meios de cultura quimicamente sintéticos 
e sim, associados a células vivas. 
Quais são os tipos de vírus? 
Os vírus podem ser classificados em vários tipos morfológicos diferentes, com base na 
arquitetura do capsídeo: 
• Vírus helicoidais: bastões longos; podem ser rígidos ou flexíveis; o genoma viral está no 
interior de um capsídeo cilíndrico oco e com estrutura helicoidal; raiva e febre 
hemorrágica. 
• Vírus poliédricos: muitos vírus animais, vegetais e bacterianos; o capsídeo da maioria 
tem a forma de um icosaedro; os capsômeros de cada face formam um triângulo 
equilátero; adenovírus, poliovírus. 
• Vírus envelopados: relativamente esféricos; vírus helicoidais envelopados ou vírus 
poliédricos envelopados; influenza, herpes. 
• Vírus complexos: vírus bacterianos; bacteriófago possui capsídeo com estrutura 
adicional aderida; poxvírus não possuem capsídeos claramente definidos, mas 
apresentam várias coberturas ao redor do genoma viral. 
 
Por que os vírus não são considerados organismos vivos? 
Porque são inertes fora das células. Entretanto, quando penetram em uma célula hospedeira, 
o ácido nucléico viral torna-se ativo, ocorrendo a multiplicação viral. 
O que seria o espectro de hospedeiro? 
• Consiste na variedade de hospedeiros que o vírus pode infectar; 
• É determinado pela exigência viral quanto a receptores específicos na superfície 
celular do hospedeiro; 
• A maioria dos vírus infecta tipos específicos de células; 
Como se denomina os vírus que infectam bactérias? 
Bacteriófagos ou fagos. Possuem dependência completa do equipamento celular da bactéria 
hospedeira para realizar a replicação. 
Como ocorre a multiplicação dos bacteriófagos? 
Os bacteriófagos podem se multiplicar tanto em culturas bacterianas em meio líquido em 
suspensão quanto em meio sólido (permite o uso do método da contagem da placa). 
Como se denomina a estrutura de cobertura do ácido nucléico dos vírus? 
O ácido nucléico é envolvido por uma cobertura proteica denominada capsídeo. O capsídeo é 
formado por subunidades proteicas denominadas capsômeros. Em alguns vírus, o capsídeo é 
coberto por um envelope. 
O que seria a espícula? 
São estruturas que se projetam na superfície do envelope, que podem ou não possuir, 
formadas por complexo carboidrato-proteínas. Muitos vírus utilizam para ancorar no 
hospedeiro. 
Como se dá a infecção? 
A superfície externa do vírus deve interagir quimicamente com receptores específicos. O 
sistema imune é estimulado a produzir antircorpos, porém, muitos vírus escapam porque os 
genes que codificam proteínas virais de superfície sofrem mutações. 
Como é o ciclo de replicação de bacteriófago? 
• Ancoragem ou adsorção: um sítio de adsorção (fibras na cauda) no vírus se liga ao sítio 
receptor complementar na bactéria (parede celular) – ligações fracas; 
• Penetração: liberação de lisozima pelo bacteriófago; injeção viral dentro da bactéria; 
• Indução 
• Replicação 
• Maturação: os virions são completos e formados a partir do DNA e dos capsídeos; 
• Liberação: lise da célula hospedeira (lisozima) e liberação dos virions 
O que seria o tempo de ruptura? 
É a duração de um ciclo lítico completo (tempo decorrido desde a adsorção até a liberação do 
fago). 
O que seria o tamanho da população liberada? 
O número de novas partículas virais liberadas de uma única célula. 
Quais são as características de um ciclo lisogênico? 
• Não ocorre a ruptura da célula e alguns fagos podem realizar ambos os ciclos; 
• O fago incorpora seu DNA ao genoma do hospedeiro (profago); 
• Lisogenia: fago permanece latente; 
• Fagos lisogênicos ou temperados: fagos que se multiplicam por ambos os mecanismos; 
• Células lisogênicas: bactérias; tornam-se imunes à reinfecção pelo mesmo fago. 
O que seria espécie viral? 
Espécie viral compreende um grupo de vírus que compartilham a mesma informação genética 
e o mesmo nicho ecológico (espectro de hospedeiros). 
O que seria a unidade infecciosa viral? 
Corresponde à menor unidade capaz de provocar um efeito detectável, quando inoculada em 
um hospedeiro susceptível. 
Crescimento Microbiano 
Do que são formadas as colônias? 
São formadas pelo acúmulo de células em crescimento. São compostas por populações 
(podem ser formadas por centenas, milhares ou bilhões de células). 
Quais são as vantagens das populações microbianas? E as desvantagens? 
Vantagens: Micro-organismos benéficos ou para a realização de pesquisas científicas. 
Desvantagens: micro-organismos patogênicos ou deteriorantes de alimentos. 
Quais é o tipo de reprodução microbiana? 
Assexuada: em micro-organismos unicelulares, cada célula divide-se em duas células filhas 
idênticas. Pode ser por: 
• Fissão binária: É o processo no qual as células dividem-se individualmente em duas 
células filhas de tamanho aproximadamente igual; 
• Brotamento: Processo no qual uma pequena protuberância cresce em uma 
extremidade da célula, torna-se uma nova célula e então se separa da célula parental; 
• Conidiósporos (actinobactérias): Actinobactérias são bactérias filamentosas que se 
reproduzem através de uma cadeia de esporos externos nas pontas dos filamentos; 
• Fragmentação de filamentos: Poucas espécies bacterianas simplesmente se 
fragmentam e estes fragmentos iniciam o crescimento de uma nova célula. 
No que consiste a divisão celular? 
É uma sequência de eventos identificáveis que ocorrem desde que surge uma nova célula até 
que esta se divida em duas células-filhas. 
Como se dá o crescimento populacional? 
Com o aumento do número ou massa microbiana. 
O que seria o tempo de geração? 
É o intervalo de tempo requerido para que cada micro-organismos se divida (e sua população 
duplique). É fortemente influenciado não somente pela composição nutricional do meio, mas 
também pelas condições físicas de incubação. 
Como é obtida a curva de crescimento microbiano? Quais são as suas etapas? 
É obtida quando se realiza a contagem da população em intervalos de tempo definidos após 
um inóculo de um número pequenode bactérias em meio líquido. Uma curva de crescimento 
bacteriano demonstra o crescimento de células durante um período de tempo. São divididas 
nas etapas: 
• Lag: período variável, onde ainda não há um aumento significativo da população; fase 
de adaptação; pouco ou nenhum crescimento; intensa atividade metabólica; o número 
de organismos permanece praticamente inalterado; 
• Log ou exponencial: as células estão plenamente adaptadas, absorvendo os nutrientes, 
sintetizando seus constituintes, crescendo e se duplicando; a reprodução celular é 
mais ativa; é a fase de maior atividade metabólica; o tempo de geração atinge valor 
constante nessa fase; a quantidade de produtos finais de metabolismo ainda é 
pequena; é a fase importante nos processos industriais (> eficiência); nesta fase são 
realizadas as medidas de tempo de geração; a taxa de crescimento exponencial é 
variável, de acordo com o organismo. 
• Estacionária: Nesta fase, os nutrientes estão escasseando, os produtos tóxicos estão 
tornando-se cada vez mais abundantes e o pH sofre alterações; N° de células em 
divisão = N° de células que morrem; é nessa fase que são sintetizados metabólitos 
secundários, que incluem antibióticos e algumas enzimas. 
• Morte celular (ou declínio logarítmico): a maioria das células estão morrendo, embora 
outras ainda estejam se dividindo; N° de células que morrem > N° de células em 
divisão; a contagem total permanece constante, enquanto a de viáveis diminui; em 
alguns casos ocorre a lise celular. 
Podem ser de sistemas abertos (culturas contínuas) ou fechados (cultura em batelada). 
Quando ocorre a fase lag? 
• Ocorre quando o inóculo inicial é proveniente de culturas mais antigas; 
• Quando as células sofrem traumas físicos (choque térmico, radiações) ou químicos 
(produtos tóxicos); 
• Quando são transferidas de um meio rico para outro de composição mais pobre, 
devido a necessidade de síntese de várias enzimas; 
• Observa-se um aumento na quantidade de proteínas, no peso seco e no tamanho 
celular. 
O que seria a estabilização da população na fase estacionária? 
Quando não há crescimento líquido. 
Para que é usado experimentalmente o quimiostato? 
Para estudos de ecologia microbiana. Com ele, a população celular pode ser mantida em fase 
exponencial por longos períodos, essas células em fase exponencial são desejáveis para os 
experimentos fisiológicos. 
Quais são os métodos diretos para quantificar o crescimento microbiano? E os indiretos? 
Diretos: contagem total ao microscópio; contagem de viáveis em placas (pour-plate, alternate 
pour-plate e spread plate); contagem celular eletrônica; filtração (membrana filtrante); 
número mais provável. 
Indiretos: turbidimetria; peso seco; atividade metabólica. 
Quais são as limitações da contagem microscópica direta? 
A contagem direta é uma técnica rápida, mas impossibilita a distinção entre células vivas e 
mortas, porém no caso de leveduras, esse problema pode ser contornado pelo uso de corantes 
vitais. Além disso, podem haver contagens errôneas, devido às pequenas dimensões de 
algumas células, ou pela formação de agregados celulares. 
Qual é a aplicação da contagem celular eletrônica? 
É muito comum, aplicada para quantificar células em vacinas, leite e culturas, e é expresso em 
número de células/mL. Ex: Contador tipo Coulter e Citometria de fluxo. 
Quais são as etapas da contagem de viáveis em placa pelo método de incorporação em 
placa? 
• Inoculação em placa vazia (1 ou 0,1 mL); 
• Adição do meio ágar nutriente fundido; 
• Agitação em círculo para misturar; 
• As colônias crescem na superfície e dentro do meio solidificado. 
Quais são as etapas da contagem de viáveis em placa pelo método de espalhamento em 
placa? 
• Inoculação em placa contendo meio sólido (0,1 mL); 
• Espalhamento do inóculo em toda a superfície; 
• As colônias só crescem na superfície do meio. 
De que maneiras a contagem de viáveis pode ser feita? 
Pela semeadura em superfície (spread plate) ou em profundidade (pour plate). Geralmente, o 
volume a ser inoculado não deve ultrapassar 0,1 mL ou 1 mL para evitar a confluência das 
colônias. A contagem deve ser feita no número de colônias entre 30 e 300. Os resultados são 
expressos em UFC/mL (Unidade Formadora de Colônia). Para a minimização dos erros há 
ecessidade de triplicatas para cada diluição. 
• Vantagens: mensura células viáveis; técnicas amplamente utilizada e relativamente 
simples; 
• Limitações: requer 24h ou mais de incubação; nem toda colônia foi originada de 
apenas uma bactéria; a contagem de 30 a 300 colônias por placa. 
Quando é usado o método da membrana filtrante? 
Utilizado para contagem em número reduzido. O volume filtrado é de 100 mL da água, ocorre 
a retenção das bactérias no filtro (concentração) e, por fim, ocorre a transferência do filtro 
para o meio de cultura líqudo. 
Qual é o princípio da técnica do número mais provável (NMP)? 
Quanto maior o número de bactérias numa amostra, maior o número de diluições necessárias 
para diminuir a densidade bacteriana, até o ponto de não haver mais sua presença. 
• Aplicações: análises de amostras com baixas densidades celulares; avaliação da 
potabilidade da água; pesquisa de coliformes na água e em alimentos como leite e 
outros produtos. 
• Essa metodologia é utilizada para a pesquisa de coliformes totais e coliformes 
termotolerantes. 
O que são coliformes? 
Micro-organismos indicadores de poluição fecal, o que pode ter como consequência a 
presença de outros organismos patogênicos, como protozoários e vírus. 
No que consiste a técnica do número mais provável (NMP)? 
• É realizada inoculando-se 3 séries de 5 tubos com 10 mL, 1 mL e 0,1 mL do produto 
homogeneizado em solução salina, ou em meios seletivos para coliformes totais, 
contendo tubos de Durham invertidos no seu interior; 
• Permite o cálculo do número de micro-organismos específicos numa amostra de água 
e de alimentos, utilizando tabelas de probabilidade; 
• De acordo com o número de tubos que apresentam a produção de gás determina-se o 
NMP, pela consulta de uma tabela desenvolvida por Hoskins em 1934. 
O que são coliformes totais? 
Todas as bactérias na forma de bastonetes Gram-negativos, não esporogênicos, aeróbios ou 
anaeróbios facultativos, capazes de fermentar a lactose com produção de gás, em 24 a 48 
horas a 35°C. 
O que são coliformes termotolerantes? 
São aqueles que possuem a capacidade de fermentar a lactose com produção de gás, em 24 
horas a 44,5-45,5°C. 
Cite um exemplo de coliforme específico e sua importância: 
Escherichia coli, é o mais importante indicador de contaminação fecal, representa maior 
proporção da população bacteriana e, normalmente, não-patogênico. 
No que consiste a turbidimetria? 
É a medida indireta do crescimento microbiano. O crescimento tem como efeito a turvação do 
meio líquido, com isso, a estimativa de unidades de absorbância da massa se dá com células 
em suspensões. 
Como se dá a quantificação por meio da atividade metabólica? 
É uma medida indireta e a mensuração da atividade metabólica de uma população é 
diretamente proporcional ao número de células microbianas. Ela detecta produtos 
metabólicos e os resultados são expressos em quantidade do produto/mL (Ex: Liberação de 
CO2 por aeróbicos). 
Como se dá a quantificação por meio do peso seco? 
É aplicado para a medida indireta da massa celular, expresso em mg de N/mL; é comumente 
aplicada a bactérias (actinobactérias) e fungos filamentosos; esta técnica é aplicada quando 
não é necessário determinar o número preciso de micro-organismos presentes. 
REPRODUÇÃO E CRESCIMENTO MICROBIANO 
Para que é usado a técnica do número mais provável? 
É basicamente utilizada para a pesquisa de coliformes totais e coliformes termotolerantes, que 
são microrganismos indicadores de poluição fecal, o que pode ter como consequência a 
presença de outros organismos, como protozoários e vírus.São utilizadas em água, leite e 
outros produtos. 
Como essa técnica é feita? 
Foi desenvolvida após análises estatísticas complexas. A determinação do NMP é realizada 
inoculando-se 3 séries de 5 tubos com 10,1 e 0,1 mL do produto homogeneizado em solução 
salina, em meios seletivos para coliformes totais contendo tubos de Durham invertidos no seu 
interior. De acordo com o número de tubos com gás, determina-se o NMP. 
Quais são os métodos do NMP? 
• A diluição a partir de um alto volume de inóculo (ex: 10 mL); 
• A diluição a partir de um médio volume de inóculo (ex: 1 mL); 
• A diluição a partir de um baixo volume de inóculo (ex: 0,1 mL); 
• Contagem do n° de tubos positivos; 
• Estimativa do n° de células/mL de bactérias. 
Para que é usado o conteúdo de nitrogênio na técnica do NMP? 
É muito comum, aplicado para a medida indireta da massa celular, expresso em mg de N/mL. 
Para que são usados os produtos metabólicos na técnica do NMP? 
Aplicados a ensaios microbiológicos e medidas indiretas da atividade metabólica 
(crescimento), expressa em quantidade do produto/mL. 
O que seria poluição biológica? 
Presença de microrganismos patogênicos, especialmente na água potável. 
BACTÉRIAS E SUAS DOENÇAS: 
Escherichia coli Gastroenterite 
Leptospira spp. Leptospirose 
Salmonella spp. Tifo e Salmonelose 
Shigella Disenteria bacteriana 
Vibrio cholerae Cólera 
Entenovírus Gastroenterite, Meningite 
Vírus A Hepatite Hepatite 
Rotavírus Gastroenterite 
Quais são os indicadores de qualidade de água? 
• Bactérias: Escherichia coli; 
• Protozoários: Cistos (Giardia) e Oocistos (Cryptosporidium) 
• Algas: cianobactérias; 
• Vírus 
• Ovos de helmintos. 
O que são os coliformes? 
São bacilos gram-negativos não esporulados, que fermentam a lactose com produção de gás 
em 48 h a 35°C. De maneira geral, os coliformes são representados por 4 gêneros da família 
Enterobacteriaceae: Citrobacter; Enterobacter; Escherichia e klebsiella. 
O que são os coliformes totais? 
Reúne um grande número de bactérias, entre elas a Escherichia coli, de origem exclusivamente 
fecal e que dificilmente se multiplica fora do trato intestinal. Entretanto, outras bactérias dos 
gêneros Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella, podem ser identificados como CT. Não é 
possível afirmar que uma amostra de água com resultado positivo para coliformes totais tenha 
entrado em contato com fezes. 
Qual é a diferença entre coliformes totais e termotolerantes? 
Os termotolerantes continuam vivos mesmo a 44°C, enquanto os coliformes total têm 
crescimento a 35°C. A identificação de termotolerantes permite afirmar que houve presença 
de matéria fecal, embora não exclusivamente humana. 
Quais são os outros indicadores microbiológicos? 
• Bactérias Heterotróficas: utilizam nutrientes orgânicos; a contagem é feita de medida 
empírica; presença em maior grau ou menor quantidade → grau de poluição da água 
→ enriquecimento MO. 
• Estreptococos fecais: melhores indicadores para águas marinhas → tolerância a altas 
concentrações de sal. Grupo: Streptococcus faecalis, S. faecium, S. galinarum e S. 
avium. 
• Leveduras: indicadores de poluição em ambientes de água doce e marinhos; Gêneros: 
Aureobasidium, Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Saccharomyces e Trichosporon. 
Qual é a metodologia usada para a coleta de água? 
• Coletar a amostra em recipiente esterilizado (até 4/5 do frasco); 
• Água com cloro: 0,1 mL de tiossulfato a 10% 
• Água bruta que contenha metais pesados: 0,3 mL EDTA a 15%. 
Quais doenças bacterianas podem ser causadas pelo consumo de água contaminada? 
• Meningoencefalite: O contágio se dá pelo contato (consumo ou banho) com águas 
contaminadas. 
• Cólera: O contágio se dá com o consumo de água contaminada por fezes ou vômito de 
algum indivíduo contaminado. 
• Leptospirose: a água contaminada por urina de ratos é a principal causa da doença, 
cuja incidência aumenta com chuvas fortes e enchentes. Apresenta maior perigo em 
águas próximas a depósitos de lixo e em áreas sem esgotamento sanitário. 
• Febre Tifóide: O contágio se dá pela ingestão de água ou alimentos contaminados. A 
contaminação dos alimentos se dá com a lavagem por água contaminada. 
• Gastroenterites: ingestão de água ou alimentos contaminados por fezes causam muita 
variedade de distúrbios gástricos, geralmente associados a diarreias. 
• Desinteria Bacilar: ingestão de água sem tratamento; diversas formas de diarreias, 
formando um quadro de febre, dores e mal estar geral. 
Quais são as doenças viróticas podem ser causadas pela ingestão de água contaminada? 
• Hepatite viral A e Poliomielite: O contágio se dá ao contato (consumo ou banho) com 
água contendo urina ou fezes humanas infectadas. 
METABOLISMO 
Qual foi o resultado do desenvolvimento de bioprocessos baseados no metabolismo 
microbiano? 
Produção de diversas substâncias como acetona, butanol, ácido cítrico, antibióticos. 
Quais são os objetivos dos bioprocessos? 
• Multiplicação de microorganismos para obtenção de biomassa; 
• A obtenção de produtos microbianos (antibióticos, aditivos, álcool, enzimas, etc); 
• Conversão de um substrato em outro, por ação de micro-organismos ou de enzimas; 
• Tratamento de efluentes, transformação de algum poluente em alguma substância 
facilmente degradável. 
Quais são as etapas dos bioprocessos? 
• Escolha do agente biológico adequado; 
• Transformação da matéria prima (condições que podem exigir controle do processo, 
como pH, temperatura, etc); 
• Separação e purificação do produto final. 
O que seria metabolismo? 
Um conjunto de reações químicas de degradação (catabolismo) e de síntese (anabolismo) de 
substâncias em um organismo. 
O que seriam as vias catabólicas? 
Degradação de compostos orgânicos em moléculas menores, uma parte desta será acumulada 
sob a forma de ATP, e o restante é dissipada como calor. As principais vias catabólicas são a 
respiração e a fermentação. 
Dependendo das condições ambientais, isto é, da presença ou ausência de oxigênio, algumas 
leveduras e bactérias podem fermentar ou respirar. 
O que são os metabólitos secundários? 
Os metabólitos secundários não desnecessários no metabolismo microbiano, mas, mesmo 
assim, permitem a sobrevivência em ambientes extremamente competitivos que contam com 
escassos nutrientes. 
Quais são as fases de produção de metabólitos? 
• Fase log: é a fase onde são produzidos os metabólitos primários; 
• Os metabólitos secundários são produzidos no fim da fase log e início da fase 
estacionária. 
Qual é a característica para que um fermentador seja economicamente viável? 
O micro-organismo deve ser capaz de se reproduzir rapidamente, sintetizando grande 
quantidade do produto a partir de uma matéria prima barata (soro de leite, melaço de cana ou 
de beterraba, amido de milho, etc.). Além disso, não devem ser patogênicos e não podem 
produzir toxinas. 
O que seria a fermentação anaeróbica? Cite exemplos. 
São processos que não utilizam oxigênio, porém, em alguns processos, pode haver oxigênio, 
em pequenas quantidades, suficientes para inibir a biossíntese do produto. Ex: fermentação 
alcoólica, láctica e acetobutílica. 
O que seria a fermentação aeróbica? Cite exemplos. 
São processos que necessitam de oxigênio. Ex: fermentação acética e cítrica. 
Quais são os fermentadores mais utilizados? 
Os fermentadores mais utilizados com micro-organismos são aqueles que contam com aeração 
e agitação mecânica. 
Como é o processo sem aeração forçada? 
É o caso dos processos que não necessitam de anaerobiose estrita, como a produção de etanol 
por Saccharomyces cerevisiae, ou de processos aeróbicos onde a agitação é suficiente para 
suprir o oxigênio necessário ao processo como a produção de ácido cítrico. 
Como é o processo com aeração forçada? 
O ar fornecido deve ser estéril, sem umidade, etc. Utiliza-se ar comprimido. Quase todos os 
processos biossintéticos possuem aeração forçada. Processosanaeróbicos que são inibidos 
com pequenas quantidades de oxigênio devem sofrer aeração com nitrogênio ou monóxido de 
carbono até a saturação do ar e a eliminação do oxigênio. 
Descreva o processo fermentativo do sistema de produção descontínuo. 
O fermentador carregado com a matéria-prima e o inóculo correspondente, a fermentação 
prossegue até o esgotamento dos nutrientes. Concluído o processo e extraído o produto, o 
fermentador é esvaziado, limpo e esterilizado antes de receber outra carga. Esse processo é 
bastante utilizado na indústria farmacêutica. 
Descreva o processo fermentativo do sistema de processo contínuo. 
O substrato é adicionado continuamente de modo que sua concentração fique constante. Ao 
mesmo tempo, retira-se o mostro fermentado de modo que o volume total permaneça 
constante. A velocidade do crescimento e de consumo do substrato são constante e vão 
depender da concentração de “substrato limitante”. Elimina-se quase totalmente o tempo 
improdutivo. Ex: produção de cerveja, fermento de padaria a partir do melaço, etc. 
Como também pode ser chamada a técnica de produção estéril? 
Pode ser chamada de asséptica e é conduzida em condições de absoluta esterilidade. Ex: 
produção de antibióticos, vitaminas, acetona-butanol. 
Como se dá a fermentação semi-estéril? 
É feito um tratamento térmico para diminuir a contaminação do meio, mas a fermentação não 
é conduzida de forma asséptica. Ex: produção de etanol. 
Como se dá a fermentação não estéril? 
A manipulação das próprias condições de fermentação (pH muito ácido, temperaturas 
extremas, pressão osmótica elevada) evitam a ocorrência de contaminações. Ex: produção de 
ácido acético e de iogurte. 
O que acontece quando o produto é secretado fora da célula? E dentro? 
Produto secretado fora da célula: disperso em grande volume de água, sendo necessário 
separá-lo por decantação ou filtração. 
Produto dentro da célula: desintegração para extração. 
Quais são os métodos que o produto poderá ser concentrado? 
Sedimentação, Precipitação, Filtração, Centrifugação, Extração por solventes, Destilação, 
Evaporação do Solvente e Secagem. 
Qual é a diferença entre as enzimas extracelulares e as intracelulares? 
As enzimas extracelulares são mais baratas (amilases, proteases, celulases) e as enzimas 
intracelulares são mais caras, já que requerem um grau de pureza maior por serem muitas 
delas utilizadas como fármacos ou em restes diagnóstico. 
Para onde vai a produção de aminoácidos? 
Se destina fundamentalmente às indústrias de alimentos (66%), as rações animais (33%), e em 
menor grau às indústrias farmacêuticas e cosméticas (1%). 
Quando é usada a bactéria Corynebacterium glutamicus? 
Na produção de ácido L-glutâmico, um realçador de sabor em alimentos. 
Quando são usadas as bactérias E. coli e Pseudomonas dacunhae ? 
Na produção de Aspartame, um adoçante não calórico. 
Quando é usado o fungo Aspergillus niger ? 
Na produção de ácido cítrico. Na indústria de alimentos é usado como aditivo (acidulante e 
antioxidante), na cosmética como regulador de pH e na indústria farmacêutica como 
ingredientes em tabletes efervescentes. 
Quando é usada a bactéria Xanthomonas campestris? 
Como espessante, utilizado na composição de molhos, pudins, geleias, sorvetes, pasta de 
dentes, etc. 
Para que é usada a cana de açúcar? 
Para a produção de etanol pela ação fermentativa de leveduras. 
Como se dá o processo de biodigestão? 
Esse processo fermentativo se desenvolve sobre resíduos rurais (esterco), agroindustriais 
(vinhaça, efluentes das indústrias de laticínios e matadouros), domésticos (esgotos). Esses 
resíduos são adicionados ao biodigestor em pH neutro e anaerobiose. 
Como é produzido o biogás? 
Em condições anaeróbicas, a digestão da matéria orgânica é realizada por vários grupos de 
micro-organismos em sucessão biológica, sendo os produtos finais metano, dióxido de carbono 
e água. 
O que ocorre em condições aeróbias, com a matéria orgânica? 
Produção de água e gás carbônico. 
Quais são os tipos de fermentação feita por bactérias? 
Acética, Lática, Acetobutílica, Propiônica, Glucônica. 
Quais são os tipos de fermentação feita pelas leveduras? 
Alcoólicas e Glicéricas 
Quais são os tipos de fermentação feita por fungos? 
Ácido cítrico, ácido glucônico, ácido lático, ácido fumárico, manitol. 
Como ocorre a glicólise? 
É a oxidação da glicose a ácido pirúvico, geralmente a primeira etapa no catabolismo dos 
carboidratos. As enzimas da glicólise catalisam a quebra da glicose (6 C) em dois açúcares de 3 
carbonos. Estes açúcares são então oxidados, liberando energia e seus átomos rearranjados 
para formar duas moléculas de ácido pirúvico. A glicólise não requer oxigênio pode ocorrer 
tanto em condições aeróbica ou anaeróbica. 
Quais são as etapas da glicólise? 
• Duas moléculas de ATP são utilizadas para ativar uma molécula de glicose e iniciar a 
reação; 
• A molécula de glicose ativada pelo ATP divide-se em duas moléculas de 3 carbonos; 
• Há a incorporação de fosfato inorgânico e a formação de NADH; 
• Duas moléculas de ATP são liberadas recuperando as duas utilizadas no início; 
• Ocorre a liberação de duas moléculas de ATP e formação de piruvato. 
Como funciona a via pentose fosfato? 
Funciona simultaneamente com a glicólise e fornece condições para a quebra de açúcares de 5 
carbonos (pentoses). Produz importantes pentoses intermediárias utilizadas na síntese de 
ácidos nucléicos, glicose a partir de dióxido de carbono (na fotossíntese) e certos aminoácidos. 
É produtora de coenzima reduzida NADPH a partir de NADP+. 
Quais são as bactérias que utilizam a via pentose fosfato? 
Bacillus subtillis, E. coli, Leuconostoc mesenteroides e Enterococcus faecalis. 
Quais são os tipos de fermentação? O que cada uma produz? 
• Alcoólica → Produção de etanol; 
• Lática → Homolática: Produção de ácido lático / Heterolática: Ácido lático + etanol +CO2 
• Propiônica → Produção de ácido propiônico; 
• Fórmica → Produz uma mistura de ácidos; 
• Butírica → ácido butírico, butanol, acetona, isopropanol e outros ácidos orgânicos; 
• Acética → Produção de ácido acético 
• Produção de metano 
Quem faz a fermentação lática? 
É feita por bactérias (ex: Lactobacillus) e por algumas células animais (como células musculares 
esqueléticas, ósseas e cartilaginosas). Tem como produto final o ácido láctico. Além da produção 
em larga escala deste ácido, este tipo de fermentação é usado para a produção de leite. 
Uma molécula de glicose é oxidada em duas moléculas de ácido pirúvico gerando-se 2 moléculas 
de ATP. As moléculas de ácido pirúvico são reduzidas por duas moléculas NADH para formar 
duas moléculas ácido lático (produto final, não sofre mais oxidação). Rendimento de energia 
baixo. GLICOSE → ÁCIDO LÁTICO + 2 ATP 
Quais são as formas dos micro-organismos que fazem a fermentação lática? 
Streptococcus e Bacillus. 
Quais são os substratos da fermentação lática? 
Glicose de milho, sacarose, soros de leite, melaços, lactose, hidrolisado de batata. 
Quais são os produtos oriundos da fermentação lática? 
Iorgurte, leite, chucrute, azeitona, picles e conservas de pepino. 
Quem faz a fermentação alcoólica? 
É realizada por fungos, particularmente leveduras (ex: Saccharomyces cerevisae e 
Saccharomyces carlsbergensis). Tem como produto final o etanol e é usada industrialmente (e 
artesanalmente) para a produção do próprio etanol, de bebidas alcoólicas e pães. 
Através da glicólise, uma molécula de glicose produz duas moléculas de ácido pirúvico e duas de 
ATP. Essas duas moléculas de ácido pirúvico são convertidas em duas de acetaldeído e duas 
moléculas de CO2. Depois, essas duas moléculas de acetaldeído são reduzidas por 2 NADH para 
formar duas moléculas de etanol. Podem utilizar a via pentose-fosfato. 
Quais são os substratos da fermentação alcoólica? 
Sacarose, Amido e Celulose sacarificados. 
Quais são os produtos oriundos da fermentação alcoólica?Cerveja, vinhos, bebidas alcoólicas, álcool. 
Quem faz a fermentação acética? 
A fermentação acética é feita por bactérias e tem como produto final o ácido acético. É utilizada 
para a produção de ácido acético e vinagre. 
Quais são os micro-organismos que participam da fermentação acética? 
Acetobacter acetii; A. xylinum; A. suboxidans; A. rancens; A. pasterianus; A. ascendens; A. 
acetigenum; A. melanogenus; Bacillus orgeanense; B. schuetzenbachii. 
Quais são os substratos da fermentação acética? 
Glicose, frutose, glicerol, manitol. 
Quais são os micro-organismos que participam da fermentação propiônica? 
Propionibacterium thoeni; Clostridium propionicum; Micrococcus lactilicus; Propionivacerium 
thecnicum; Propionibacterium shermanii. 
Quais são os substratos da fermentação propiônica? 
Lactose, lactatos, ácido lático e glicerol. 
Quais são os produtos da fermentação propiônica? 
Queijo Ementhal e Gruyère. 
Quais são os microorganismos da fermentação cítrica? 
Aspergillus niger; A. clavatus; Penicillium luteum; Penicillium citrinum. 
Quais são os substratos da fermentação cítrica? 
Açúcares, glicose. 
Quais são os produtos da fermentação cítrica? 
Ácido cítrico. 
REPRODUÇÃO E CRESCIMENTO MICROBIANO: CONTAGEM DE VIÁVEIS EM PLACA 
Qual é o objetivo dessa técnica? 
Determinar o número de micro-organismos viáveis em uma amostra. 
No que se baseia o método de contagem em placa? 
Baseia-se no fato de que quando uma célula isolada cresce em meio sólido, dará origem a uma 
colônia. Presume-se que a suspensão bacteriana seja homogênea e que não existam 
agregados ou arranjos. 
Qual deve ser o volume a ser inoculado? 
Para pour plate e alternate não deve ultrapassar 1 mL e para Spread plate deve ser de 0,1 mL 
para evitar a confluência das colônias. 
Qual é o procedimento? 
• Diluição 1/100: Adicionar 1 mL da suspensão da cultura de E. coli, em um frasco 
contendo 99 mL de solução salina (0,9%) estéril. Agitar o frasco. 
• Diluição 1/1000: adicionar 1 mL da diluição anterior em 9 mL de salina estéril. 
• Diluição 1/10000: adicionar 1 mL da diluição anterior em 9 mL de salina estéril. 
• Repetir: até a diluição 1/10^6 ou 1/10^7. 
Para quem é mais usada a técnica do espalhamento em placa? 
Para aeróbios estritos. A superfície do meio de cultura deve estar seca para que seja embebida 
pelo líquido inoculado. 
Qual é o procedimento da técnica pour plate? 
• Identificação das placas (em duplicata) de acordo com as diluições (10-6, 10-5 e 10-4); 
• Adição de 1 mL de cada diluição em sua respectiva placa; 
• Distribuição de 15 mL de meio ATGE (estéril, fundido e mantido a 50°C) sobre o 
inóculo contido nas placas; 
• Agitar fazendo movimentos em forma de 8 para homogeneizar o inóculo com o meio; 
• Esperar solidificar o meio, inverter as placas e incubá-las a 35°C/48h. 
Qual é o procedimento da técnica spread plate? 
• Identificação das placas (duplicata) de acordo com as diluições (10-5, 10-4 e 10-3); 
• Adição de 0,1 mL de cada diluição em sua respectiva placa contendo meio; 
• Espalhar o inóculo sobre a superfície da placa com o auxílio de uma alça de Drigalsky; 
• Inverter as placas e incubá-las a 35°C/48h. 
Se, em uma mesma diluição, as placas apresentem contagens de uma placa entre 30 e 300 
(normal) e a duplicata com menos de 30 ou mais de 300 colônias (fora do padrão), o que 
deve ser feito? 
Contar as duas placas, considerar o número de colônias de ambas, utilizando a média para 
calcular o número de UFC. 
NÚMERO MAIS PROVÁVEL – NMP 
O que são os micro-organismos indicadores de condições higiênico-sanitárias insatisfatórias? 
São grupos de micro-organismos que quando presentes em um alimento fornecem 
informações sobre a ocorrência de contaminação de origem fecal, sobre a provável presença 
de patógenos. 
O que são os Streptococus fecais? 
Este grupo inclui os estreptococos que indicam a qualidade sanitária da água e incluem as 
seguintes espécies: S. faecalis, S. faecium, S. bovis, S. equinus e S. avium. 
Quais são as condições para que um micro-organismo seja utilizado como indicador de 
poluição fecal? 
• Estar sempre presente em altas concentrações nas fezes; 
• Não se multiplicar fora do trato intestinal humano; 
• Presente em todos os tipos de água, mas ausente em água potável; 
• Densidade populacional diretamente relacionada com o grau de contaminação. 
Em alimentos processados, a presença de um número considerável de coliformes indica? 
• Processamento térmico inadequado e/ou recontaminação pós processamento; 
• Proliferação microbiana que poderia permitir a multiplicação de micro-organismos 
patogênicos. 
O que seria o teste presuntivo dos coliformes? 
• É realizado tanto para coliforme total como termotolerante; 
• Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) com tubos de Durham invertidos; 
• Três séries de três tubos; 
• Incubação: 35 – 37°C por 24 – 48h; 
• A leitura se dá com a produção de ácido e gás da lactose. O tubo de Durham retém o 
gás. 
O que seria o teste confirmativo dos coliformes? 
• Os tubos positivos no teste presuntivo são semeados em Caldo Verde Brilhante Bile 
Lactose (VBBL) com tubos de Durham em seu interior; 
• São incubados em uma temperatura de 35 – 37°C por 24 – 48h; 
• A leitura se dá com a produção de gás nos tubos positivos. 
• Cálculo do número mais provável para coliformes totais. 
O que seria o teste confirmativo para coliformes termotolerantes? 
• Tubos positivos no teste presuntivo são colocados em caldo de E. coli contendo tubos 
de Durham em seu interior; 
• São incubados em uma temperatura de 44,5 – 45,5 °C por 24 – 48h; 
• A leitura se dá com a produção de gás positiva para o teste confirmativo; 
• Cálculo do NMP para Coliformes Termotolerantes. 
O que seria o teste completo de coliformes termotolerantes? 
• Os tubos positivos no teste confirmativo são semeados para o meio Eosina Azul de 
Metileno (EAM) que possui sais biliares que inibem o crescimento de bactérias gram (+), 
favorecendo o crescimento das gram (-). 
• Semeadura por estriamento do inoculo no meio EAM; 
• Incubação: 35 – 37°C por 24h; 
• Leitura: Preta com ou sem brilho metálico → E. coli; Os outros termotolerantes 
apresentam colônias mucoides e com tendência a se confluírem. 
Quais são as características do crescimento termotolerante? 
• E. coli: centro negro e brilho verde metálico (ausente ou pouco visível); 
• Enterobacter: centro variando de cinza à marrom, aparência mucoide e não apresentam 
brilho metálico; 
• Salmonella e Shigella: não fermentam a lactose; apresentam-se translúcidas e incolores. 
Qual é a fórmula para o cálculo do valor do NMP, se as séries de diluições forem diferentes de 
10, 1 e 0,1 mL de amostra? 
NMP = NMP da tabela x 10 / maior quantidade testada 
IMVIC 
Para que é usado o teste do indol? 
Permite classificar o microrganismo quanto a sua capacidade de utilizar o aminoácido 
triptofano como fonte de carbono. A produção de indol, a partir do triptofano pode ser 
detectada pela formação de um anel róseo na superfície do meio, após a adição do reativo de 
KOVACS. 
Para que serve o sulfato ferroso amoniacal? 
Serve como indicador, pois o ferro combina-se com o H2S, formando um precipitado negro 
insolúvel. 
O que acontece após a adição do indicador de pH vermelho de metila? 
A cor vermelha no meio evidencia a presença de ácidos, indicando que a utilização da via de 
fermentação ácido mista. 
Qual é o princípio de Voges-Proskauer? 
Determinar a habilidade de alguns microrganismos em produzir o acetilmetilcarbinol 
(acetoína) a partir da fermentação da glicose que é inicialmente metabolizada em ácido 
pirúvico durante a glicólise. 
Qual é a importância do citrato? 
Permite identificar quais bactérias em condições aeróbicas tem a capacidade de utilizar citrato 
como fonte de carbono. Com a liberação de CO2, este combina-se com o sódio, do citrato de 
sódio e água para formar carbonato de sódio, um produto alcalino, aumentando o pH.