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1. Assinale a alternativa CORRETA: O método de Sanger e Coulson (1977) para sequenciamento de DNA também é conhecido como método de sequenciamento por interrupção de cadeia. O método de Sanger e Coulson (1977) foi o primeiro método que permitiu aos cientistas determinar a sequência de nucleotídeos de uma determinada molécula de DNA. O projeto original e, na verdade, o primeiro método de sequenciamento de DNA por interrupção de cadeia, data de 1976, cujos autores são Allan Maxam e Walter Gilbert. É atribuído a Sanger e Coulson o mérito do sequenciamento do DNA por interrupção de cadeia, porque a técnica foi desenvolvida em 1975 e demorou 2 anos para ser publicada. O método de sequenciamento de DNA por interrupção de cadeia é idêntico ao modelo original descrito por Sanger e Coulson (1977) e também se mantém o método confiável em termos de qualidade das sequências. Explicação: Primeiro método se sequenciamento de primeira geração. 2. A respeito dos sequenciadores, marque a alternativa INCORRETA. O Ion Torrent que é um equipamento entre 2º e 3º geração utiliza a variação do pH como mecanismo de detecção. O pirossequenciador mede a liberação do pirofosfato por quimioluminescência O Ilumina assim como o método de Sanger realiza síntese usando DNA polimerase e dideoxinucleotídeos marcados e não constrói biblioteca. No SoLiD, a reação de sequenciamento é catalisada por uma DNA ligase e não pela DNA polimerase Os sequenciadores de 1º geração produzem fragmentos sequenciados maiores, porém os de 2º geração são muito mais rápidos. Explicação: Resposta letra D. O Ilumina utiliza didesoxinucleotídeos assim como o sequenciamento por Sanger, porém ele constrói bibliotecas a a partir do PCR de emulsão. 3. A respeito do sequenciamento de Sanger e o Pirossequenciamento, marque V para as verdadeiras e F para as falsas. O Pirossequenciador e o Sequenciador automático de Sanger pertencem a 1º geração dos sequenciadores. No pirossequenciamento a liberação do pirofosfato proveniente da formação da ligação fosfodiester, é convertido em luz e lido no sequenciador. O Pirossequenciador é um aparelho classificado na segunda geração O pirossequenciador é classificado como de 3º geração e o sequenciamento automático de Sanger como 1º geração. No sequenciamento automático de Sanger, a reação da fita complementar é interrompida pela adição dos didesoxirribonucleotídeos. Explicação: O pirossequenciador é um aparelho classificado como de 2º geração 4. Uma fita de DNA apresenta a seguinte sequência: TCAAGT Marque a alternativa que indica corretamente a sequência encontrada na fita complementar: AGTTCA ATAAUA UCTTGU AGUUGA AGUUCA Explicação: É importante perceber que o DNA é composto por duas fitas e que uma complementa a outra. Sabemos que na molécula de DNA a adenina sempre se une à timina e que a citosina sempre se liga à guanina. Sendo assim, uma sequência TCAAGT liga-se a uma sequência AGTTCA. 5. (PCERJ) O DNA (ácido desoxirribonucléico) é constituído por uma longa fita dupla de nucleotídeos. O sequenciamento de DNA é um processo que determina a ordem desses nucleotídeos. A fita dupla é formada pelo pareamento das bases. Desta forma, referente ao pareamento desses nucleotídeos, não é correto afirmar: As bases dos nucleotídeos são adenina (A), timina (T), guanina (G) e citosina (C) Adenina se pareia com timina A sequência desse pareamento é responsável pelas características genéticas do homem e de todos os seres vivos A guanina se pareia com adenina A guanina se pareia com citosina. Explicação: Retornar na aula 5, no topico de sequenciamento 6. Marque a alternativa que melhor define um gene. O gene é uma porção da molécula de RNA que determina uma característica. O gene é uma sequência de nucleotídeos em que está contida a informação que será usada para a síntese de proteínas. O gene é uma porção da célula. O gene é uma região do DNA que é responsável pela síntese de carboidratos, determinando nossas características. Trecho do RNA que contém sequências de nucleotídeos que são usados para a síntese de proteínas. Explicação: O gene é uma porção de DNA (sequência de nucleotídeos) onde estão contidas as informações que serão essenciais para a formação das proteínas. 7. (MPU2007) Um pesquisador deseja isolar um gene de uma espécie de planta hipotética que codifica uma proteína capaz de inibir a proliferação de fungos que crescem sobre a superfície das suas folhas. O pesquisador tem disponível em seu laboratório uma biblioteca genômica, várias bibliotecas de cDNA, uma biblioteca de expressão dessa espécie de planta e a proteína purificada. O pesquisador encontrará mais rapidamente o gene desejado se: seqüenciar o DNA da biblioteca de cDNA e pesquisar os quadros de leitura. seqüenciar o DNA da biblioteca genômica e procurar os ESTs. clonar o cDNA da espécie e com ele triar a biblioteca genômica. seqüenciar os aminoácidos das proteínas produzidas na biblioteca de expressão até identificar a proteína desejada. produzir um anticorpo específico para essa proteína e com ele triar a biblioteca de expressão. Explicação: Aula 5, retornar em sequenciamento. F V V F V
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