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@dora_universitaria BACTÉRIAS ANAERÓBIAS DEFINIÇÃO Os anaeróbios estritos são um grupo de bactérias que produz infecção em humanos e animais e não tem capacidade de se multiplicar em presença de oxigênio atmosférico. FISIOLOGIA DOS ANAERÓBIOS O oxigênio é um elemento tóxico para as bactérias anaeróbias porque na sua redução são formadas substâncias intermediárias tóxicas como radical hidroxila e peróxido de hidrogênio. HABITAT NORMAL Habitam a pele, trato gastrointestinal, boca, laringe e trato geniturinário. Localizações comuns de infecções por anaeróbios: • Celulite necrosante • Gangrena gasosa • Abscesso pulmonar • Abscesso pélvico • Sinusite crônica • Infecções periodontais • Infecções abdominais • Abscesso hepático • Abscesso perirretal CLASSIFICAÇÃO DA INFECÇÃO POR ANAERÓBIOS Podem ser: Endógena: infecção causada pela própria microbiota do paciente- resulta do uso de agentes imunossupressores e de doenças que levam ao comprometimento do sistema imune do hospedeiro EX: abscessos; diarreia e colite (antibioticoterapia); endocardite; infecções dentárias e sinusite. Exógena- infecção causada por micro- organismos presentes no meio ambiente, solo e alimentos. São as mais conhecidas e comuns. EX: diarreia; botulismo causado por alimento; gastroenterite por Clostridium perfrigens; mionecrose (gangrena gasosa0 e tétano. Mista- está associada a bactérias anaeróbias e anaeróbias facultativas- como por exemplo a gangrena de Meleney. ASPECTOS CLÍNICOS CARACTERÍSTICOS DA INFECÇÃO Alguns aspectos clínicos fazem suspeitar de uma infecção por bactérias anaeróbias, sendo os principais esses abaixo: • Secreção fétida • Tecido necrótico • Infecção nas proximidades de superfície mucosa • Presença de gás em tecidos ou secreção • Gangrena gasosa @dora_universitaria • Coloração negra em secreção com sangue • Infecção decorrente de mordida humana ou de animal FATORES PREDISPONENTES Várias condições predispõe uma pessoa a desenvolver infecção por anaeróbios, algumas são: • Diminuição do fluxo sanguíneo por isquemias ou doenças crônico- degenerativas • Presença de áreas necróticas • Acúmulo de sais endógenos (ex: pontos de calcificação) • Infecção por bactérias aeróbias ou anaeróbias facultativas • Manipulações cirúrgicas e contaminações pela microbiota • Esterilização intestinal pré-operatória PRINCIPAIS BACTÉRIAS DE INTERESSE MÉDICO Bacilos gram + esporulados Clostridium Cocos gram + gênero Pepstreptococcus, Peptococcus niger Bacilos gram + não esporulados Propionobacterium,Actino myces , Lactobacillus e Bifdobacterium Cocos gram - Gênero Veillonella Bacilos gram _ Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium e Porphyromonas PREVALÊNCIA DAS ESPÉCIES ANAERÓBICAS NAS INFECÇÕES EM HUMANOS • Grupo Bacteroides fragilis • Grupo Bacteroides melaninogenicus • Fusobacterium spp. • Peptostreptococcus spp. • Clostridium spp. • Propionibacterium acnes TIPOS DE AMOSTRAS ADEQUADAS PARA FAZER CULTURA DE ANAERÓBIOS • Sangue • Medula óssea • Pus coletado por aspiração • Fluidos corporais estéreis • Aspirados de pulmões • Urina obtida por aspiração suprapúbica ASPECTOS LABORATORIAIS Ocorrência de formas pleomórficas na coloração de Gram; observação no material de bacilos Gram positivos esporulados (é sugestivo de Clostridium); presença de bactérias na coloração de Gram, mas que não crescem nos meios mantidos em aerobiose e crescimento de bactérias somente na parte inferior de tubos com meio de cultura líquido ou semissólido. COLETA DO MATERIAL As amostras devem ser colhidas de forma que não entrem em contato com oxigênio e não se contaminem com bactérias anaeróbias facultativas ou aeróbias da microbiota normal. Por isso DEVEM ser aspiradas com seringa, da qual é eliminado o ar imediatamente após a obtenção da amostra. O material NÃO pode ser colhido com swab @dora_universitaria TRANSPORTE DO MATERIAL Pode ser feito com a mesma seringa com que foi colhido o material. Deve ser encaminhado imediatamente ao laboratório. Podem ser utilizados tubos contendo tioglicolato de sódio e os meios semissólidos de Cary-Blair, Stuart, Amies. EXAME DIRETO Coloração de Gram: Gram positivo- Clostridium perfringes- forma de tijolo, esporulado, esfregaço com pouco polimorfonucleares Gram negativo- Coloração bipolar nos bacteroides e morfologia pleom.órfica no caso de fusobactérias Actinomyces: coloração de Ziehl- Neelsen, bacilos ramificados e filamentosos. Outras técnicas: imunofluorescência, cromatografia gasosa MEIO DE CULTURA PARA ISOLAMENTO Agar sangue para anaeróbios: semeio em duas placas- incubação por 24 horas. Aerobiose Anaerobiose Agar sangue enriquecido para anaeróbios: incubação por 48 horas • Sangue de carneiro ou de coelho (5%) • L-cistina- redutor de oxigênio • Hemina (fator V) • Vitamina K • Extrato de levedura • Aminoglicosídeo ( amicacina)- devido a resistência dos anaeróbios Caldo carne-picada glicose- Meio de Robertson: • Carne bovina picada- fonte de aminoácidos e proteínas • Glicose- fonte de carbono • L-cistina- Redutor de oxigênio Meio de cultura para crescimento/isolamento • Extrato de carne • Hidrolisado de fígado • Caseína • Glicose • Hemina (fator V) • Vitamina K • Tioglicolato de sódio • L-cistina Os meios de isolamento poderão ser meios utilizados com suplementação dos fatores de crescimento, antibióticos e agentes redutores.: Ex: meios: agar columbia, agar brucela, BHI, enriquecimento: Tween 80- estimulante do crescimento de cocos anaeróbios, hemina, vitamina K, etc. Antibióticos neomicina- para isolamento de bacteroides, clostrídios e cocos anaeróbios Vancomicina- para isolamento de fusobactérias Ácido nalidíxico com Tween 80 para isolamento de Peptoestreptococcus PRODUÇÃO DE ANAEROBIOSE Existem vários procedimentos para conseguir no laboratório uma atmosfera de anaerobiose adequada à multiplicação das bactérias anaeróbias patogênicas ao ser humano. Fatores de crescimento adicionais @dora_universitaria O sistema mais empregado em laboratórios clínicos é o sistema das jarras de anaerobiose com geradores químicos que permitem obter uma atmosfera adequada para a multiplicação dessas bactérias. Jarra de anaerobiose Dentro da jarra é colocada, além dos geradores químicos, uma fita de papel de filtro impregnada de azul de metileno- (indicador de anaerobiose). Quando a atmosfera do interior da jarra tem condições adequadas de anaerobiose, a fita, inicialmente azul, é alterada para branca. Outro exemplo: câmaras anaeróbias IDENTIFICAÇÃO DE ANAERÓBIOS Quando ocorre crescimento em ágar sangue com demandas variadas de oxigênio- deve-se estudar o comportamento da cultura. A placa destinada a cultura em anaerobiose deverá conter um disco de metronidazol Morfologia das colônias Prevotella melaninogenicus- em meio base de sangue forma colônias escuras. C. perfrigens- formam em ágar sangue um duplo halo de hemólise (alfa e beta). Prevotella melaninogenicus e C. dificile- sob luz UV aparece com coloração vermelho tijoo Fusobacterium necrophorum- em meio a base de cistéina e sob UV aparece com colônias verdes. C. dificilie- em meio a base de cisteína e sob UV aparece com colônias florescentes amarelas. Toxina e antitoxina- teste de Nagler- identificação de Clostridium perfrigens- A reação de Nagler é usada para diferenciar o grupo Perfrigens de outros clostrídios que também são lecitinase positivos , pela adição de uma antitoxina específica que neutraliza alecitinase C.
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