PRÉ E PÓS LAB REAÇÃO EM CADEIA

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PRÉ-TESTE

1) Em relação à técnica de PCR, assinale a alternativa correta:
a) É necessário apenas um iniciador (primer) para cada reação de PCR;
RESPOSTA INCORRETA
Dois primers são usados para cada reação de PCR, projetados de forma a englobar a região de interesse do DNA a ser copiada.
b) Os fragmentos de DNA da amostra são deslocados por uma corrente elétrica por meio da matriz de gel, separando os fragmentos de DNA de acordo seus comprimentos;
RESPOSTA CORRETA
Os fragmentos carregados negativamente se movem na direção do eletrodo positivo, devido ao seu comprimento (número de pares de base), ou seja, fragmentos menores se deslocam mais através da matriz de gel em comparação a fragmentos mais longos.
b) Na etapa de anelamento, ocorre a desnaturação da fita de DNA.
RESPOSTA INCORRETA
A etapa de anelamento é de pareamento e ligação dos primers às suas sequências complementares no DNA. É na etapa de desnaturação que as fitas de DNA são separadas.
2) A sequência de oligonucleotídeos de DNA curto utilizados para amplificação da reação PCR é chamada de:
a) DNA polimerase;
RESPOSTA INCORRETA
Trata-se da enzima responsável pela síntese de DNA sobre um molde de DNA de fita simples.
b) Primers;
RESPOSTA CORRETA
Trata-se das fitas iniciadoras necessárias à síntese pela polimerase e que fornecem um ponto de partida para a amplificação de DNA.
b) DNA com sequência-alvo.
RESPOSTA INCORRETA
Trata-se da amostra de DNA que é utilizada e na qual está presente a sequência-alvo para amplificação.
3) A reação PCR é utilizada na amplificação de uma região específica do DNA. Trata-se de uma técnica:
a) In vitro;
RESPOSTA CORRETA
Trata-se de uma técnica com o intuito de fazer muitas cópias de uma região específica do DNA in vitro, ou seja, em um tubo de ensaio, em vez de em um organismo.
c) Celular;
RESPOSTA INCORRETA
A técnica é executada inteiramente in vitro, ou seja, a PCR é executada fora dos sistemas vivos, em ambiente controlado e fechado de um laboratório, normalmente em recipientes de vidro, como tubos de ensaio.
c) In vivo.
RESPOSTA INCORRETA
In vivo significa "que ocorre ou tem lugar dentro de um organismo ou em tecido vivo”. Sendo assim, a afirmativa está incorreta, uma vez que a PCR é executada inteiramente fora dos sistemas vivos.
4) Em uma eletroforese de ácidos nucleicos, o que diferencia uma molécula de outra é o seu comprimento. O comprimento molecular é geralmente expresso por:
a) anticorpos;
RESPOSTA INCORRETA
Não se aplica a eletroforese de ácidos nucleicos.
b) pares de bases;
RESPOSTA CORRETA
Na eletroforese de ácidos nucleicos, a diferença na mobilidade eletroforética ocorre devido às diferenças de tamanho e forma das moléculas. O que diferencia uma molécula de outra é essencialmente o seu comprimento. O tamanho molecular, geralmente expresso por pares de bases, é determinante para a separação de ácidos nucleicos.
c) Taq polimerase.
RESPOSTA INCORRETA
A Taq polimerase é a DNA polimerase termoestável usada na PCR para a produção de novas fitas de DNA, usando as existentes como moldes.
5) A reação PCR é utilizada para amplificar, detectar e quantificar sequências específicas de DNA. Assinale a alternativa que apresenta as principais aplicações dessa técnica.
a) Detecção de agentes infecciosos e diagnóstico de doenças genéticas;
RESPOSTA CORRETA
Detecção de infecções por vírus, bactérias, fungos etc. Já no âmbito das doenças genéticas, a técnica permite o desenvolvimento de protocolos na pesquisa de pequenas alterações na sequência de DNA.
b) Medicina forense e detecção de reações imunológicas;
RESPOSTA INCORRETA
A reação PCR tem aplicações práticas nas ciências forenses, a partir da amplificação de regiões de DNA de amostras de sangue ou tecido encontradas em uma cena de crime. Porém, não é aplicada para as reações imunológicas, que geralmente envolvem a ligação antígeno-anticorpo e podem ser visualizadas ou quantificadas por meio de diferentes marcadores para o antígeno ou para o anticorpo, através de técnicas como a imunofluorescência.
c) Análise de genes e diagnóstico de diabetes.
RESPOSTA INCORRETA
A PCR permite o estudo da expressão de genes. Porém, a técnica não se aplica ao diagnóstico de diabetes, que pode ser realizado a partir de um exame de sangue simples.
PÓS-TESTE
1) As etapas da reação PCR para a síntese de DNA são, respectivamente:
a) desnaturação, anelamento e extensão;
RESPOSTA CORRETA
As etapas de aquecimento e resfriamento necessárias para a síntese de DNA são, respectivamente: desnaturação (aquecimento para separar as fitas de DNA), anelamento (resfria-se a reação, para que os primers possam se ligar) e extensão (eleva-se a temperatura, para que a Taq polimerase alongue os primers e sintetize novas fitas de DNA).
c) anelamento, desnaturação e extensão;
c) extensão, desnaturação e anelamento.
2) Suponha que você trabalhe em um laboratório de medicina forense e tenha recebido uma amostra de uma cena de crime. Considerando que a amostra de DNA da cena do crime é homozigota para a versão 200 pares de bases (pb) do marcador, a amostra de DNA do suspeito deverá ser:
a) heterozigota;
RESPOSTA INCORRETA
A amostra da cena do crime possui duas cópias do mesmo alelo, ou seja, é homozigótica para a versão 200 pb do marcador; sendo assim, apenas uma banda será amplificada durante a PCR. Caso a amostra da cena do crime possuísse dois alelos diferentes do marcador, o que não é o caso, ela seria heterozigótica e duas bandas de diferentes tamanhos seriam amplificadas durante a PCR.
b) alelo homozigoto de 200 pb;
RESPOSTA CORRETA
Tanto a amostra de DNA da cena do crime quanto a amostra de DNA do suspeito são homozigotas para a versão de 200 pb do marcador. Isso é, as duas amostras coincidem para esse marcador.
b) alelo homozigoto de 300 pb.
RESPOSTA INCORRETA
Apesar da amostra desse suspeito ser homozigota, ele é homozigoto para o alelo de 300 pb, sendo assim a amostra do suspeito não coincide com a amostra da cena do crime, que é alelo homozigoto de 200 pb.
3) O mix de reação utilizado na técnica de PCR compreende:
a) termociclador e transiluminador;
RESPOSTA INCORRETA
O termociclador é o equipamento utilizado nos ciclos de aquecimento e resfriamento da reação de PCR, enquanto o transiluminador é o equipamento que emite raios UV, utilizado para visualização do gel de agarose.
b) primers e brometo de etídeo;
RESPOSTA INCORRETA
Os primers fazem parte do mix de reação, porém o brometo de etídeo é um agente intercalante fluorescente utilizado na etapa de preparação do gel de agarose.
c) tampão de reação; primers e enzima Taq polimerase.
RESPOSTA CORRETA
O mix da reação compreende o par de iniciadores (primers): senso (forward) e antisenso (reverse), a enzima Taq polimerase e a solução tampão.
4) Assinale a alternativa correta em relação à interpretação do resultado de uma eletroforese em gel.
a) Os fragmentos de DNA mais longos migram mais rapidamente através do gel;
RESPOSTA INCORRETA
Os fragmentos de DNA mais longos migram mais lentamente através do gel e ficam próximos dos poços (onde o gel foi carregado inicialmente).
b) Os fragmentos de DNA mais longos migram mais lentamente através do gel;
RESPOSTA CORRETA
Assim como os fragmentos de DNA de menor comprimento migram mais rapidamente através do gel e ficam próximos da outra extremidade (distante dos poços).
b) A migração dos fragmentos de DNA não depende de seus comprimentos.
RESPOSTA INCORRETA
A diferença na mobilidade eletroforética ocorre devido às diferenças de tamanho e forma das moléculas. O que diferencia uma molécula de outra é, essencialmente, o seu comprimento.
5) Na reação PCR, a Taq polimerase é uma enzima termoestável que permite a amplificação de qualquer sequência de DNA coletada de amostras, tal/tais como:
a) sangue, urina e outros fluidos corporais;
RESPOSTA CORRETA
A sensibilidade da técnica permite utilizar uma amostra muito pequena (traços mínimos de sangue ou outros tecidos biológicos).
c) apenas amostras contendo vestígios de sangue;
RESPOSTA INCORRETA
A técnica é sensível a uma extensavariedade de materiais, desde que contenham restos celulares
c) amostras de sangue e fluidos corporais humanos, apenas.
RESPOSTA INCORRETA
Amostras de microrganismos, células vegetais ou animais, mesmo com milhares de anos, também são sensíveis à técnica.